導語：如何才能寫好一篇護蛋行動，這就需要搜集整理更多的資料和文獻，歡迎閱讀由公務員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

我們每人得先準備一個蛋。我也回家找雞蛋，我找到了裝蛋的竹簍，哇！簍子里的蛋可真多呀！一個個安靜地躺在里面，就像在熟睡的小寶寶，可看得我眼花?亂了。我想：我的蛋寶寶一定要白白胖胖的，還是選一個最大的雞蛋好了。

我把選好的雞蛋畫上了一個可愛的小男孩圖案，可是給蛋寶寶取名又成了我頭痛的事了，我左思右想，還是叫個“小羅哈瑪”吧。蛋寶寶也要一個溫暖舒適的家呀，我連忙找來個漂亮的小紙盒子，在盒子底下放一層厚厚的細紙，把蛋寶寶小心翼翼放進去正好合適。為了蛋寶寶的安全，我又把小盒子放進一個大盒子里，這樣我才放心了。

第二天，我帶著雞蛋寶寶來到了學校。上課時，我偶爾瞟了瞟蛋寶寶，生怕它有什么意外。叮鈴鈴，下課了，同學們邀我去打籃球，我說：“我就不去了，要是蛋寶寶破了，那我就不可以得到‘愛心小天使’的稱號了。”

就這樣，下課時我都守著蛋寶寶不敢輕易離開，同學們都嘲笑我成了只“小母雞”。艱難的一天終于熬了過去了。

篇2

回到家后，我隨手拿了個雞蛋放在桌上，準備把它當做第二天護蛋的主人公，可沒想到調皮的妹妹竟這么性急，我出去還不到半分鐘，回來時我那可憐的蛋寶寶已經被妹妹給推下去“墜地身亡”了。護蛋行動不戰而敗，還沒開始就已經…沒辦法，我只好又找了一枚蛋作為明天的主人公。

……

護蛋行動，開始！

2011年1月27日第一天

今天呢，是護蛋行動的第一天。早晨起來后，我捧著蛋寶寶對它說：“蛋寶寶，從今天開始我就是你的‘媽媽'了，別害怕，我一定會好好保護你的！”平淡的一天很快就過去了，最讓我擔心的還是晚上，因為老師說過→寸步不離，這就說明，睡覺也得抱著雞蛋睡覺咯？那怎么行！要是壓碎了怎么辦？！盡管帶著種種疑問和擔心，我還是毫無防備地拿著蛋寶寶睡覺了。睡夢中我隱約地記著我好幾次起來找雞蛋，就這樣輾轉了一夜。

2011年1月28日第二天

早晨起來時我條件反射性地低頭看了看手中的雞蛋，還好，雞蛋沒有事，仍安然無恙地睡在我的手心里，這下我就放心了。起床后我去掛表，把雞蛋放在了口袋里。由于表太重，我一個沒抓緊，差點滑下去蹭著我口袋里的雞蛋，幸虧我又及時抓緊，才避免了一場悲劇的發生。

2011年1月29日第三天

今日閑來無事，我玩弄著雞蛋，把它扔上去又接著，扔上去又接著…可是在一次雞蛋下降的時候，我差點沒接住，雞蛋落下來時在手上轉了好幾個彎，眼看著就要掉下去了，又突然穩了下來，乖乖地停在了我手心上，真是虛驚一場。但通過這個事件，我卻在想：如果再有這樣的危險情況怎么辦？倒不如給蛋寶寶穿一層外衣，又美觀又實用。嗯，說做就做！我先用保鮮膜給雞蛋包了一層薄薄的外衣，然后又用衛生紙多包了幾層，加強了防御力，最后用膠帶紙粘了起來，就這樣，一個具有保護系統的全新“第二代”雞蛋誕生了！

2011年1月30日第四天

今天，我帶著“第二代”雞蛋到姐姐家去借書，姐姐見我手里拿著，便問：“你手里拿的是什么啊？”邊說邊拿了過去。我說：“是雞…”“蛋”字還未說出口，就聽見“砰”一聲，把我和姐姐都好嚇，不過幸虧是具有保護系統的“第二代”雞蛋，它的抵御力也沒那么差啦，這么點小創傷，是不會有什么障礙的。

2011年1月31日第五天

篇3

到了學校，老師說雞蛋要隨身帶，不能破，下課了我呆在教室，連去廁所也把雞蛋帶在身上，生怕一不小心將雞蛋弄破。侯玉祥同學最慘了，上班隊課時，他想把白宇豪同學的桌子往前拉一拉，手上拿著雞蛋，正巧白宇豪想幫他一把，于是就推桌子一下，“砰”雞蛋破了，當然也有許多同學的雞蛋破了。

上課了，老師讓我們去二樓上扔雞蛋，二樓差不多3米高，大家將雞蛋扔了下去“砰砰砰砰”同學們紛紛跑下來，撿自己的雞蛋，我緊張撿起的雞蛋，打開看看，“耶！”我的雞蛋沒有破，看看同學們的雞蛋，許多人的雞蛋都破了。

老師讓我們雞蛋沒破的同學再從三樓扔下去，上樓了，到了上面看到同學期待的眼神，那將雞蛋扔下去的那一刻，我的心也飛了下，我飛快的跑下了樓，心中暗想：希望自己的雞蛋不破。撿起一看，我的雞蛋沒有破，我很自豪，原以為比賽結束了，可是老師說還有一場比賽，我的心跳再次加速了，老師說只有一分鐘，可是我還要幾分鐘準備呢，我以迅雷不及掩耳之勢，裝好了雞蛋，進行了第三次比賽。

這一次我充滿信心挑戰，結束時我又贏了，興奮極了，我心花怒放，放學了，我把雞蛋完整的帶回家了，我仿佛還沉浸在護蛋行動中，這次護蛋行動，只有4個雞蛋保住了，我、沈吉軍同學等同學。

篇4

從前，一戶人家里有兩只蒼蠅，一只叫甲，一只叫乙。它們平日里受夠了蒼蠅拍的殘殺，總想報復一下。

一天，甲碰見了乙，便對它訴苦道：“蒼蠅拍這個家伙真是可惡，想方設法地殺我們，叫我們死得死，逃得逃。現在只剩我們倆了！”

乙想了一下，覺得這是個除掉甲的好機會，因為在食物緊缺的時候，他非常不愿把自己辛苦弄來的飯分給甲，便假作吃驚地說：“你還不知道，蒼蠅拍已經斷了！我們可以去報復一下。”

時間過得飛快，12時馬上就到了。兩個黑影也到了，對了一下暗號，便來到了扔蒼蠅拍的地方，找到了蒼蠅拍，對它說：“老東西，沒想到會在這見面，我還以為你都成了烈士，被供在烈士墓里了呢！”說罷，便在蒼蠅拍上拉屎作惡。

篇5

新華網消息 以單親家庭小學生的學習輔導、心理輔導及互動活動等為內容的“黃絲帶”教育互助行動，近期在昆明啟動，目前已有100多個家庭、200多名志愿者通過電話和現場報名的方式參加。

“黃絲帶”教育互助行動是對來自單親家庭的小學生展開學習輔導、互助活動及心理輔導的一項公益活動，將采用分層教學的方法，針對孩子量身訂制學習及心理輔導方案，因材施教、因需施教，同時對單親孩子的家長進行輔導，使他們更好地對孩子進行教育。

活動主辦方表示，隨著越來越多的愛心人士和社會群體參與，今后將致力推動此項活動常態化，為更多單親家庭的孩子排憂解難。

浙江：技能優秀的中職生可保送上高職

《中國教育報》消息 “到2015年，中職畢業生升入高一級學校的比例達到30%左右，高職專升本比例達到10%”。這是近期出臺的《浙江省推進中高職一體化人才培養模式改革工作方案》提出的目標。

浙江省提出，從2012年起啟動實施五年一貫制職業教育試點，即由高職院校與中職學校共同研究制定五年一體化的人才培養方案，聯合招收應屆初中畢業生，并由高職院校為主統籌中職、高職階段的教學與管理。

從2012年起，浙江省還決定實施技能優秀中職畢業生免試升學政策。參照現行普通高校招收保送生政策，凡獲得教育部等部委舉辦的全國職業技能大賽一、二、三等獎的本省籍應屆中職畢業生，可免試保送就讀該省高職院校相關或相近專業；獲得全省職業技能大賽一、二等獎的中職學生，在高職院校自主招生和“三位一體”綜合評價招生中，由招生院校計入綜合成績，不受政策加分上限的限制。

武漢：188所中小學建起校園“放心小賣部”

《長江日報》消息 3月22日，武漢市鋼城11中初三（2）班學生彭佳琪來到學校“放心校園店”，花2.5元錢買了兩根火腿腸、一根雞味棒。據悉，目前，武漢全市已有供孩子們選購的放心商品。

武漢市教育局勤工儉學管理處負責人介紹，以往很多學校“小賣部”十分簡陋，就在一張竹床上擺著批發來的小作坊商品售賣；還有一些小攤販推著小車在校外隔著欄桿叫賣；“三無”產品缺乏監管，存在嚴重的食品安全隱患。2007年，市政府將“在中小學校新增60家放心超市”作為當年10件實事之一，“放心校園店”創建提上議事日程。

各區按照統一名稱、標志、進貨渠道、食品價格、人員著裝、培訓考核等“六統一”要求，選擇有資質、社會信譽度高的企業經營校園店，嚴禁個人承包。對飲料、面點等主要食品采取集中采購，確保安全的同時，價格低于社會商店10%以上。相關部門對經營企業每年考核，引入“退出”機制，嚴防“三無”產品流入學校。

目前，全市共爭取政府補助獎勵236萬元，已在中小學創建188所“放心校園店”，未發生一起安全事故。據了解，“十二五”期間，全市1 200多所中小學60%將開設“放心校園店”。

云南規范民辦教育發展400米內限開1所民辦幼兒園

云南網消息 《云南省民辦教育機構管理辦法》（以下簡稱“辦法”）正式出臺，“辦法”提出，在省內設立民辦教育機構應當符合所在地教育發展的規劃，布局合理。幼兒園在400米、中小學在800米范圍內不重復審批設置。其中，民辦教育機構不得以任何形式買賣、變造、出租、出借辦學許可證。校長年齡均不得超過70歲。“辦法”將從今年5月1日起施行，一系列“緊箍咒”將力求規范云南民辦教育發展。

在辦學方面，嚴禁民辦學校擅自開設教學班（點）。3家以上具有獨立法人資格的民辦教育機構，經所屬教育行政部門批準，可以組建教育集團或者教育聯合體。民辦教育機構應當按照國家規定或者經批準的教學計劃、課程標準（教學大綱）組織開展教育教學活動，不得隨意減少課程和課時。

民辦教育機構應當按照批準的層次、專業、范圍進行招生，招生簡章和廣告應當真實、準確。招生簡章應載明民辦教育機構的名稱、辦學許可證編號、專業或者培訓項目、辦學地址、修學年限、收費標準、證書發放等事項。

玉溪增加200余所農村寄宿制小學

新華網消息 為促進教育公平和提高教育質量，云南省玉溪市打破鄉鎮行政區劃調整學校布局，宜增則增、宜減則減，優化配置義務教育資源。自2003年至今，這個市小學布局調整共撤并教學點300余個，與此同時農村寄宿制小學增加200余所。

據玉溪市教育局局長李世華介紹，隨著經濟社會的發展和城鎮化水平的提高，人口出生率下降、進城務工人口增多，當地廣大農村、山區學校出現辦學規模偏小，辦學效益不高，學校標準化建設水平低，教學設施及教育資源利用率低等問題。對此玉溪市采取“減校增效，撤小強大、集中辦學”的方法，先后開展了三輪中小學布局調整，其中小學學校數和教學點由2003年的649所、383個調整為2011年的568所和27個，農村寄宿制小學由250所增加到461所。

元江縣洼垤鄉的老茶己小學是附近村小組的4個校點撤并后成立的村完小，現有91名學生，其中有82名學生寄宿。學校校長趙雄杰說，以前每個校點只有一兩名老師，教學質量難以保證，校點撤并有助于教師資源利用達到最優化。

李世華表示，接下來玉溪市將進一步做好校舍建設、寄宿制學生伙食補助、跨村學生路費補助等工作，提高集中辦學度，促進城鄉教育均衡發展。

北京：首批140名農民工走進大學校門

《工人日報》消息 3月24日，“首都農民工大學生助推計劃”第一期新生開學典禮在北京市總工會職工大學舉行，140名農民工學員開始了他們為期兩年半的大學生活。其間，他們每人的6 000元學費全部由北京市總工會承擔。

“首都農民工大學生助推計劃”是北京市總工會專門為農民工搭建的教育服務平臺，旨在通過滿足農民工學歷、技能提升的需求，進而實現維護農民工職業發展權的目的。“助推計劃”在實施中，由農民工所在的各企事業單位推薦報名，北京市總工會職工大學為其進行考前集中輔導，農民工需通過全國成人高等教育統一招生考試方能被錄取。被錄取后，學員將經過為期兩年半的業余學習，畢業后獲得國民教育序列的大專畢業證書。

之前，在深入企業實地調研和專家論證的基礎上，北京市總工會確定“助推計劃”首批學員以數量較多、技術技能和管理水平亟待提升的建筑業工人為主要招生對象。在金隅集團、房地集團、環衛集團、城市排水集團等十幾家企業工會組織的推薦下，全市共有200多名農民工報名參加了考前集中輔導和全國成人高等教育統一招生考試，最終有140人被錄取，其專業方向為建筑工程管理。

39歲的韓飛云在新學員中年齡最大，是北京一家非公有制企業的員工，1993年來到北京打工。“雖然在北京打工快20年了，工作能力也不錯，但由于沒有大學學歷，錯失了很多好的工作機會。”他說，“沒有工會搭建的這個學習平臺，就沒有我今天‘大學夢’的實現！”

北京市總工會職工大學常務副校長張錦告訴記者，“首都農民工大學生助推計劃”在設計課程的時候特別注重量身定做。讓學員們在課堂上既可以增強職業技能，還可以學習文化知識。完成學業后，學員們在獲得高等職業教育學歷證書的同時，還可以獲得相應的職業資格證書。“這就是我們所說的‘雙證制’，學員畢業后，他就是一名既掌握了技能又有了相應學歷的大學生。”

據悉，“首都農民工大學生助推計劃”今后每年招收農民工學員將不少于100名，由北京市總工會全額資助。

內蒙古將投入20億元全面實施高中階段免費教育

《人民日報》消息 今年，將投入20億元實施高中階段免費教育政策，實現高中階段學生全部享受免學費、免費教科書的“兩免”政策，預計將有82萬名學生受益。

篇6

關鍵詞：保護性耕作技術 經濟效益 社會效益 生態效益

2005年-2010年，鳳城被列為保護性耕作項目示范縣，并承擔省級農業技術推廣項目一玉米機械化保護性耕作技術推廣課題任務，項目分別落實在白旗、邊門等7個鄉鎮進行實施。計劃實施面積2005年500畝、2006年2000畝、2007年1萬畝、2008年1.5萬畝、2009年2萬畝、2010年3萬畝，累計7.75萬畝。幾年來，在政府的大力支持下，經廣大農機推廣人員的共同努力，項目實施順利。項目區平均每畝增產40.07千克，每畝節省作業成本94.5元，累計增產120萬千克，總增收節支499.5萬元。項目的示范推廣起到了以點帶面的效果，目前該技術已輻射到鳳城13個鄉鎮，2011年鳳城保護性耕作作業面積已達5萬畝，輻射面積8萬畝，取得了顯著的經濟效益、社會效益和生態效益。現僅將項目區的效益情況具體分析如下：

一、經濟效益

1、實施面積及單位面積增產量

各實施鄉鎮每年都進行實際測產，各項目區2005-2010年每年的實施面積和畝產、對比田產量、增產量及年平均增產量都在測量范圍內。2005年最初僅以白旗鎮、邊門鎮作為示范區，從2006年開始至2010年又逐步增加了鳳山鎮、大堡鎮、愛陽鎮、賽馬鎮、沙河區幾個示范區，測產結果都證明實施玉米機械化保護性耕作技術平均每畝均增產40.07千克。下面僅以2005年和2010年示范區實施玉米機械化保護性耕作技術面積及單位面積增產量列表為代表進行說明。

2、畝節約生產費用

（1）常規播種畝用種量約2.5公斤，精量播種用種量畝需1公斤，每畝節約種子費用=2.5公斤×15元-1公斤×15元=22.5元/畝。

（2）玉米機收每畝需支付作業費60元；人工收獲每畝需支付作業費72元，每畝節余作業費=72-60=12元。

（3）玉米秸稈粉碎還田相當于增施農家肥10立方米。每立方米農家肥20元，運費10元/立方米，撒肥費5元/立方米，合計35元/立方米。以中等肥力土壤每畝地施3立方米農家肥計算，每畝節約農家肥費用=3立方米×35元/立方米=105元。

另外，人工收獲每畝秸桿折價為30元，深松作業投入為15元。

直接經濟效益：保護性耕作可增加收入=畝節約種子費+畝節余作業費+畝節約農肥費用一人工收獲每畝秸桿折價一深松作業投入。即：保護性耕作增收=22.5+12+105-30-15=94.5元/畝。

二、社會效益

玉米保護性耕作技術的示范推廣，不僅可以獲得可觀的經濟效益，還可以獲得較高的社會效益。實施保護性耕作技術，可以減少大量的勞動用工，促進勞動力轉移，大量的勞動力轉移出來以后，從事到二、三產業中去，從而加快了城鎮化發展的步伐。以項目區3萬畝地僅機收一項來看，機收獲1天可收獲40畝，僅需750天，而人工收每畝需1.2個工日，合計：30000×1.2=36000個工日，這些轉移出去的勞動工日，從事到二、三產業可以獲得更多的社會效益。即：36000天×100元/天=3，600，000元。

三、生態效益

玉米保護性耕作技術的實施尤其在生態效益方面，對改良土壤、保護環境、防止水土流失、抑制沙塵暴的發生，保持農業的可持續發展具有重要的意義。

（1）減少環境污染和防止水土流失，增加土壤蓄水保墑能力。

大量農作物秸稈還田，避免了因焚燒秸稈而引起的嚴重空氣污染，使大氣環境得到改善。同時，由于農田有秸稈碎稈覆蓋，可以增加土壤蓄水能力，保住墑情，亦可減少雨水地表徑流和水分的蒸發，有利于雨水下滲，促進作物生長。

（2）增強了土壤的生物活性。

還田的玉米秸稈，含有大量的有機物質，可以為土壤微生物提供大量的營養物質，促進土壤中微生物的活動，使土壤生物活性大大增強。根據草河、白旗、邊門等地的測試，玉米保護性耕作技術實施地塊的蚯蚓數量每平方米增加1-2條。

（3）提高了土壤有機質含量、改善了土壤理化性狀。

篇7

從2008年起，資興市先后出臺一系列綱領性文件，創造性定義流動人口概念，將離開戶籍地鄉鎮30天以上，以工作、生活、生育為目的，在縣內異地居住或有固定職業的人群，納入流動人口計生服務管理范疇。量化目標任務，細化操作環節，強化責任措施，構建了“黨政統籌、部門協同、鄉村為主、多方互動”新機制，解決了以往縣內跨鄉流動人口計生服務管理“無規則可依”“無辦法管理”問題。

一、創新信息體系

一是建立“以房控人?五個一”工作制度。即制作1個區劃責任平面圖，完善1套居住人口樓棟示意圖，填寫1張育齡對象信息卡，簽訂1份房屋租賃計生管理合同，辦理1份育齡對象移交手續，做到街不漏巷、巷不漏棟、棟不漏戶、戶不漏人、人不漏項。二是建立分類采集制度。科學劃分流動人口基礎、流向、定位、變動四類信息。另根據信息應用的輕重緩急程度，分為一般信息、重要信息和緊急信息，由鄉村定期集中采集收集、核對、匯總轄區內流動人口信息。三是建立逐級核報制度。統一報表樣式及內容，統一上報時間及操作，利用QQ群、“實時通”和“村直報”系統，對一般信息1個月內、重要信息2天內、緊急信息8小時內報告鄉鎮計生辦，做到“人來登記、人走移交”。四是建立移交管理制度。流出地與流入地簽訂《互動協議書》和《移交花名冊》后，將對象信息及服務管理移交流入地。

二、創新管理隊伍

建立城鎮協管員、企業計生專干、組級信息員、樓棟長管理網絡。樓棟長由所屬社區因地制宜選聘，定崗定人，定責定酬，實行績效考評制。其他人員均按各自管轄范圍內的人口規模給予100～300元/月補助。

三、創新投入機制

市財政每年將縣內跨鄉流動人口計生經費列入年初預算，作為調控鄉鎮專項經費。戶籍地鄉鎮按以下規定給付現居住地服務經費：自覺落實查環查孕每人每季支付經費30元、上環每例150元、人流每例400元、結扎每例600元、引產每例800元。另由市財政按人流100元/例、結扎150元/例、引產200元/例標準給予現居住地獎勵。同時，市財政配套補助現居住地鄉鎮縣內跨鄉流動人口計生工作經費2元/人?月。

四、創新責任體系

一是實行政策外生育“流動軌跡倒查”制度。凡妊娠期間在流入地居住1個月以上且妊娠在14周以上的，追究流入地責任，有多個流入地的，追究多個地方責任。二是實行風險責任金制度。市直計生綜治部門、鄉鎮、企業每年向市政府分別交納5000元、15000元、5000元風險責任金。對年內未出現違法生育或未被“一票否決”、“黃牌警示”的，風險責任金返回責任單位，作為計生工作人員獎金，否則轉為違約金。三是實行統計責任認定制度。凡在現居住地居住3個月以上且3個月內未通報戶籍地的，由現居住地承擔統計上報責任；在現居住地購（建）房有固定住所且年內在固定住所累計生活6個月以上，或從業生活三年以上的出生上報統計由現居住地負責。

五、創新服務平臺

一是打造便捷服務平臺。以服務企業及員工為宗旨，以宣傳和服務進小區、進工廠、進礦山為手段，聘請臨床經驗豐富的醫生，定時定點為小區和企業育齡對象免費開展生殖健康檢查、治療等服務，把政府的關懷送到每個外來務工人員身邊。二是打造親情服務平臺。將計生服務向企業、住宅小區、商貿市場等薄弱部位滲透，由單純的避孕節育服務拓展到便民維權、生殖保健、技能培訓、就業與再就業等領域。全方位開展市民化、親情化服務，通過發放宣傳資料和慰問金，幫助他們解決生產生活等問題，使流動人口工作更安心，生活更舒適。

篇8

關鍵詞 哈維弧菌；紅鰭東方；單克隆抗體；特性分析

中圖分類號 S941.4 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2016）08-0239-01

Abstract In this paper， 6-week-old BALB/c mice were immunized with Vibrio harveyi 2SYX002 （isolated from dermal ulcer of Fugu rubripes） for monoclonal antibody preparation. After cell fusion，，screening， sub-cell clone， and so on， 19 hybridoma cell lines were obtained and named（1B6、1D6、1A4、5B4、6C6、2E7、4A7、5B2、4E12、1G3、7D7、8E10、4D12、2B9、7D6、6E6、1G2、6G6 and 2C1）.ELISA results showed that the MAb 1B6、1D6、1A4、5B4、6C6、7D6、6E6 and 6G6 had positive reaction with all of the standard and isolated strains.The mAb of 4A7、4E12、7D7、8E10、4D12 and 2B9 had no crossreaction with other 11 standard bacterial strains， only specific reaction with the immuned bactria. MAb 2E7、5B2，、1G2，、2C1 and 1G3 had cross-reacted with tested strains， such as Vibrio.parahaemolyticus， Vibrio.damsela and so on. Among them， MAb 2C1 only had positive reaction with all strains of Vibrio.harveyi and Vibrio.alginolyticus（the titer was 1：256）， without other 11 standard bacterial strains. The present results provided the basis for the preparation of immunochromatographic test strip to rapid detection Vibrio. harveyi.

Key words Vibrio harveyi；Fugu rubripes；monoclonal antibodies；characteristic analysis.

哈維弧菌（Vibrio harveyi）又稱哈氏弧菌，廣泛存在于海洋環境中，是海水養殖業中一種常見的致病菌。其宿主十分廣泛，是對蝦發光病的主要致病菌[1-2]，還可引起多種海水養殖魚類潰瘍病[3-5]，其中紅鰭東方皮膚潰爛病，具有傳染性較強，死亡率較高的特點。哈維弧菌是該病主要病原菌之一，患病魚體出現表皮潰爛，伴隨全身性出血，病灶處肌肉組織嚴重液化，肝臟等器官嚴重損傷，給養殖業帶來嚴重的經濟損失。由于哈維弧菌遺傳特征和生理生化特征復雜多樣，并且與其近緣種在表型上有很高的相似性，依靠傳統的檢測方法檢出率低，而且需依賴專業的技術和設備，耗時長、操作復雜，難以實現對疾病的及時診斷與防治。因此，發展哈維弧菌的快速檢測技術在致病性弧菌診斷中有重要意義。基于免疫學原理的熒光抗體技術及酶聯免疫吸附技術可以實現快速、特異的檢測哈維弧菌。目前，Robertertson等制備了哈維弧菌的多克隆抗體[9]，但多抗血清具有明顯的異質性，特異性較差。與之相比，單克隆抗體特異性高，其檢測結果更準確可靠。本試驗利用滅活的紅鰭東方“皮膚潰爛病”病原――哈維弧菌2SYX002作為抗原免疫小鼠，制備了抗哈維弧菌的單克隆抗體，并對其進行了特性分析，為哈維弧菌的快速檢測技術的發展提供了物質基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗材料及試劑

哈維弧菌Vibrio.harveyi（ATCC35084）、燦爛弧菌Vibrio.splendidus（ATCC33125）、副溶血弧菌Vibrio.parahaemolyticus（KCTC2471）、溶藻弧菌Vibrio.alginolyticus（KCCM40513）、創傷弧菌Vibrio.vulnificus（ATCC2126）、美人魚弧菌Vibrio.dams-ela（ATCC33539）、鰻弧菌Vibrio.anguillarum（KCTC2711）、希瓦氏菌Shewanella oneidensis（KCCM41821）、河豚鏈球菌Streptococcus iniae（KCTC3657）、殺鮭氣單胞菌Aeromonas salm-onicida（MT004）、遲緩愛德華菌Edwardsiella tarda（ATCC15-947）均由韓國釜慶大學疾病預防實驗室贈送。

免疫用哈維弧菌2SYX002由大連海洋大學王斌老師惠贈。其他5株哈維弧菌分離株2SYX001、2SYX003、2HWM001、2HWM002和2SYX005均由實驗室保存。

試驗用Balb/C小白鼠購自大連醫科大學SPF實驗動物中心。聚乙二醇（PEG1500）、弗氏完全佐劑、弗氏不完全佐劑、堿性磷酸酶（AP）標記的羊抗小鼠Ig、對硝基苯磷酸鹽（pNPP）均購自Sigma公司。RPMI-1640培養液、胎牛血清購自HYCLONE公司。

1.2 單克隆抗體的制備

以哈維弧菌2SYX002為抗原，免疫6周齡Balb/C小鼠后取其脾細胞與SP2/0細胞在PEG作用下融合。采用間接ELISA篩選出陽性雜交瘤后，再用有限稀釋法獲得單克隆細胞株。具體操作方法參照文獻[10]。

1.3 單克隆抗體的特性分析

1.3.1 特異性分析。采用間接ELISA法，分別用哈維弧菌2SYX002和 11株參考菌株作為包被抗原，濃度為5×107 cells/mL，單克隆抗體作為一抗，SP2/0上清為陰性對照，具體操作步驟參見文獻[11]。

1.3.2 適用性分析。采用間接ELISA法，分別用哈維弧菌

2SYX002和5株哈維弧菌分離株作為包被抗原，濃度為5×107（下轉第260頁）

（上接第239頁）

cells/mL，單克隆抗體作為一抗，SP2/0上清為陰性對照，具體操作步驟參見文獻[11]。

1.3.3 效價測定。采用棋盤滴定法對單克隆抗體的效價進行測定。哈維弧菌2SYX002包被濃度為5×107 cells/mL，10倍梯度稀釋至5×105 cells/mL。將所得的抗哈維弧菌單克隆抗體原液以2倍比進行稀釋至210，進行間接ELISA試驗。具體操作步驟參見文獻[11]。

2 結果與分析

2.1 雜交瘤細胞株

經篩選和克隆后共獲得19株穩定分泌抗哈維弧菌2SYX002單克隆抗體的雜交瘤細胞株，分別命名為1B6、1D6、1A4、5B4、6C6、2E7、4A7、5B2、4E12、1G3、7D7、8E10、4D12、2B9、7D6、6E6、1G2、6G6和2C1。

2.2 單克隆抗體的特異性、適用性及效價

對19株陽性單克隆抗體進行特異性試驗，其中1B6、1D6、1A4、5B4、6C6、7D6、6E6 和 6G6 與所有試驗菌株反應均為陽性；單抗4A7、4E12、7D7、8E10、4D12和 2B9 只與免疫菌株哈維弧菌 2SYX002 反應；其余5株5B2、 2C1 、1G2、1G3和 2E7與副溶血弧菌、溶藻弧菌、美人魚弧菌、鰻弧菌、希瓦氏菌及遲緩愛德華菌有不同程度的交叉反應；2C1可以識別所有哈維弧菌的參考菌株及分離株（表1），且只與溶藻弧菌有交叉反應。單克隆抗體5B2、 2C1 、1G2、1G3 、2E7的效價分別為1∶4、1∶256、1∶64、1∶64、1∶128。

3 討論

本試驗用甲醛滅活的哈維弧菌為抗原，運用雜交瘤技術，成功制備并克隆了19株能夠穩定分泌抗哈維弧菌 2SYX002單克隆抗體的雜交瘤細胞。特異性試驗結果表明，所得的單抗與弧菌屬細菌存在較強的交叉反應，其原因可能是由于弧菌屬的細菌具有較高的相似度，親緣關系較近。使用全菌作為抗原于免疫小鼠，與其他弧菌屬細菌存在相同抗原。陳昌福等[12]用哈維氏弧菌LPS免疫同腹異育銀鯽，發現哈維弧菌、鰻弧菌和溶藻弧菌三者脂多糖有部分相同抗原。在郝貴杰等[13]的研究中，用制得的哈維弧菌單抗的腹水做交叉反應試驗結果表明，哈維弧菌與溶藻弧菌、麥氏弧菌和副溶血弧菌的表面抗原就擁有相似的抗原決定簇。

此外，張元興等在抗遲緩愛德華菌單克隆抗體制備中，分別使用全菌和鞭毛蛋白作為抗原，比較其免疫小鼠效果，發現前者免疫后小鼠抗血清效價較后者低，不適于雜交瘤試驗[14]。因此，今后試驗中可通過以特異性蛋白為抗原免疫小鼠來提高抗體的特異性。

試驗所得的單克隆體的效價與同類文獻相比較低，可能是由于檢測中使用的抗體為雜交瘤細胞培養液上清。郝貴杰等[15]制備的抗哈維氏弧菌脂多糖單克隆抗體雜交瘤細胞株，其細胞培養液上清ELISA效價為1∶1 600，腹水效價為6.4×104，得到大幅度提高。后續試驗中可通過誘生小鼠腹水進一步提高抗體效價。本研究擴充了哈維弧菌單克隆抗體庫，為哈維弧菌單克隆抗體的進一步應用提供更多參考數據。

4 參考文獻

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篇9

活動前，我要求孩子們每人準備一只雞蛋，用紙巾包裹五層，再用塑料袋包裹三層，以防止衣服被雞蛋弄臟。把雞蛋放在口袋里，相當于讓蛋寶寶幸福地睡在搖籃中。活動規則是保護蛋寶寶一天，在下午放學前，蛋寶寶完好無損的就是勝利者，否則淘汰出局。這個指令一發出，孩子們特別好奇，嘰嘰喳喳地議論個不停。有同學大膽地提出要求，讓我也參與其中。嘿嘿！小家伙們還真不好惹！向來都是老師給學生布置作業，這次學生竟然要求我和他們一起做作業！略加思索，我答應了他們的要求。

活動開始當天早上，我在樓道里碰到班上的值日生，左看右看覺得不對勁：這幾個男孩子走路的姿勢怎么都變了樣？他們不再是風風火火的，而是用手護著口袋，側著身體，輕輕行走。哦！想起來了，他們的口袋里有蛋寶寶，他們害怕被淘汰出局。彎腰拖地和掃地的孩子，也都特別小心，不再拿著清潔工具玩耍。教室里，我也沒有發現湊在一起打鬧的學生，他們都在安安靜靜地讀書。我檢查他們準備的蛋寶寶時，他們也要求我展示我的蛋寶寶。在我們一起亮出蛋寶寶的那一刻，大家都笑了。呵呵！護蛋行動正式開始！

大家把蛋寶寶裝進口袋，開心的同時，也都感覺多了一份責任，都下定決心要保護好它們。今天的護蛋行動會有多少人成功？會有多少人被淘汰出局？我們拭目以待。

課間，沒有一個學生向我匯報打架、拍皮球等事件。幾個常常違紀的學生也變得乖起來，安靜地走在長廊上，認真地做操，小心翼翼地玩耍，上廁所都是穩步行走。我總能聽到孩子相互問：“你的蛋寶寶還好嗎？”也看到個別孩子不放心地打開塑料袋看看蛋寶寶，然后再滿意地放回去。我也同樣。辦公室一個同事的孩子得知“護蛋行動”后，也想看看我的蛋寶寶是否完好無損，我就打開讓好奇的他看一看，同時也安安我的心。一整天，大家都輕手輕腳，十分謹慎地保護著蛋寶寶。我們提心吊膽，我們小心翼翼，都是為了保護好蛋寶寶。

篇10

前些天，語文老師給我們布置了一個奇怪的作業，就是要把一個生雞蛋帶到學校并且保證它一整天毫發無損。聽到這個任務，我是既興奮又擔憂。

這天晚上，我就開始為第二天的“護蛋行動”做準備。首先，我從冰箱里找到了一個看上去最結實的雞蛋，然后一層保鮮袋、一層棉花、再一層保鮮袋，給蛋寶寶穿上了一件厚厚的棉襖。最后，我把蛋寶寶放進一個紙盒子中，輕聲說：“安心睡覺吧，明天我帶你去學校哦。”

第二天上學路上，我一直小心翼翼地捧著放蛋寶寶的盒子，生怕它會摔在地上。到了教室，我馬上給蛋寶寶找了一個安全的地方——桌肚的角落。剛放好，只聽到“啪”的一聲，我的心一下子跳到了嗓子眼兒，回頭一看，原來是我同桌小林的蛋寶寶犧牲了，他一臉的遺憾。這之后，我就更加擔心自己的蛋寶寶，每節課下課都把它拿出來看一看，確定它沒事了才安心。終于放學了，回家路上，我雙手不離蛋盒子，避開來往的人群，心想一定要安全將蛋寶寶帶回家。回家后，我忐忑不安的打開盒子一看，蛋寶寶安然無恙，還在軟軟的棉襖里睡覺呢！

耶！護蛋行動圓滿成功！這次任務雖然很辛苦，但它讓我懂得做每一件事情都要盡心盡力，才能取得成功。

三年級:昕蓮心