表白情書范文
時間：2023-03-29 23:49:16
導語：如何才能寫好一篇表白情書，這就需要搜集整理更多的資料和文獻，歡迎閱讀由公務員之家整理的十篇范文，供你借鑒。
篇1
清純
請允許我這么稱呼你，凝視著你時，總讓我有種錯覺，四周是朗朗的星空，而你坐在月牙上泛出銀白色的光芒，灑落在每一個角落。來源:
皎潔的月光華麗而明亮，而你舉手投足之間竟是滿地傷感的氣息。
月兒，自從我與你熟識以后我就在心里默念著這個名字，而我的手機里，你所有的來電信息上也赫然顯示著“月兒”
來到這個學校本是父母之命，而我自己是想考美術學院的，可是認識你卻是改變了我最初的想法，來這個學校不再充滿后悔。上天安排我們的相識，對我也是一種眷顧。和你在一起的那段時光，將是我這一生最美的回憶。
大一緊湊的課程把課余時間塞得滿滿的，但課上你也是一道美麗的風景。你的與眾不同讓我對你逐漸留意起來，你從不會不像其他女生那樣嘰嘰喳喳，三五成群地跑來串去，更多時間都是趴在桌子上不停地寫著，課間也很少出去。總是看見別人還你筆記，然后對于別人的感謝你莞爾一笑。第二排最左邊的角落里，那是你的專屬座位，后來才知道你不喜歡第一排，但也不喜歡別人擋住你的視線，真是奇怪女孩的思想。你是個文靜絹雅的女孩，雖然不是班里最漂亮動人的，但卻讓人看得有所悸動。你的性格孤僻，很少與人多語，但我能感受到你笑容里的溫度。
而我，是整個聯(lián)大公認的校草，無論是長相還是學業(yè)，都是佼佼者。可你卻對我視而不見，讓我煩躁不安。不清楚是佯裝不知，還是根本對我漠視。
開學幾個月之久，我們卻從未說一句話，擦身而過的時候，我真的很想不小心把你絆倒，不，那樣我會心疼的，應該不小心撞翻你手中的書籍，那樣我就有借口幫你撿起，有對話的機會就是好的開始啊!可是我卻沒有那么做，我承認我愛面子，平常都是漂亮女生來主動撞我，接著道歉跟我聊天。習慣于做王子的感覺，而今卻只想認識你，了解你，究竟是個怎樣的女孩，目光總?cè)滩蛔℃i定在你的身上。
那天是班里的一個活動，男女混合籃球比賽，很幸運的是我們分到了一組。我的籃球技術是公認的，灌藍高手流行的時候，那群小女生總圍著我轉(zhuǎn)，怎么會有櫻木花道性格的流川楓呢?高中的我就已經(jīng)風靡全校了。這小小的比賽怎么能難得了我呢?我們隊顯勝一籌，我們很自然得說了第一句話!我故意問你的名字，其實很早之前就已經(jīng)了然于心了。那天晚上，我興奮得一夜未眠，因為我終于可以理直氣壯地跟你交談打招呼了。
知道你喜歡籃球，我就經(jīng)常叫上你一起打球，去之前總會讓哥們幫我占個球架，然后喊上班里其他男生女生一起玩，大汗淋漓的樣子真是舒坦。而你很少出汗，也許還是沒有完全放開的緣故。
第一次幫你辦事是退票，班級里統(tǒng)一定的火車票，你由于卻有個外校同學同行，必須及時退掉然后和你同學一起重買。當你問我退票窗口在哪里時，我很肯定地就應下來了，說陪你一起去，其實我很少買票去外地，更沒有退過票，這是難得的與你單獨相處的機會啊!于是我問了哥們，并坐地鐵，親自去了趟，熟悉了路段才給你打電話。陪你乘地鐵，繞到退票處辦事，然后再乘地鐵回校，一路上我們無話不談，突然發(fā)現(xiàn)你的性格并不是想象中那么內(nèi)向自閉。為了答謝我，你是要請我吃麥當勞，而我欣然同意了。不知有沒有人說過，你吃東西真的很淑女，開始我以為你只是在男生面前如此細嚼慢咽，儀態(tài)大方，后來在食堂偶遇以后才真正知曉原來你一直這樣吃飯，而你吃東西的樣子一樣好看。
常常看到荷花池邊你讀書的身影。你那柔弱的纖影，總讓我心隨你動，望著你一汪秋水般靈動閃爍的大眼睛，我似乎可以讀出你是個有故事的女孩。總是打聲招呼，然后一閃而過。
熟識了以后，漸漸發(fā)現(xiàn)你的很多迷糊可愛的一面。原來你是有男朋友的，他在你的家鄉(xiāng)——杭州，當你動容的淡淡地描述起他時，我的心在那一剎那被人狠狠地錘了一下，為什么不早點與你相識?為什么我沒有出生在西湖?可是我依然泰然自若地面對你。做不成男女朋友，還是做好朋友吧，只怪上天沒有安排我們最初的邂逅。
坦然的朋友關系，許多事情來得更輕松自如，但我潛意識里把你放在了好朋友的最上面。
中午的飯?zhí)檬亲顡頂D不堪，人滿為患的時刻，為了讓你可以不用辛苦地站在旁邊看著別人吃完了才有位子，我改變了原先的吃飯時間。我寧愿故作饑餓狀提前閃人跑到食堂打飯占位，然后等你邁進食堂的時候，向你揮手，若無其事地說：“真巧，我剛吃完，你坐這吧!先走一步了!”怕你會引來閑言碎語，我從不與你同桌吃飯。
會有女生托你遞情書給我，可我卻絲毫沒有興趣。我調(diào)侃地笑道：“我不喜歡低俗的女子，與其和她們交往浪費時間，倒不如和哥們一起揮灑在球場上!”于是，你更放心地與我相處，無所顧忌地同我開玩笑，我們度過了一個個陽光燦爛的日子。
你住學校，而我走讀，每逢梅雨季節(jié)，我故意把老媽塞給我的雨傘放在家中，只為下了課向你借傘。在你宿舍樓下等你的片刻，其他女生遞來的雨傘都被我拒絕了，我向你嘟囔著：“我可不想欠那些小女生的人情!”
漸漸地，我們更加默契起來。一些大課是幾個班合在一起在一個偌大有回音的階梯教室進行的，我會發(fā)短信提醒你幫我占座位。其實我心里清楚你一定不會忘記的，但是那樣就可以順便詢問你在做什么，然后引出其他話題。
也許我們太親密了，超出了友情，變得稍有曖昧。
這都是周圍人給予的壓力，終于有一天你忍不住發(fā)短信問我：“你不會喜歡我吧?”
在反應了三分鐘以后，我打下了那一行違心的字：
“當然不了，我們是好哥們啊!只要你不喜歡我就行，哈哈……”
“那我就放心啦~~~”你肯定的回復幾乎同步發(fā)來，讓我大失所望。
而我內(nèi)心最真實的聲音是：當然喜歡了，從第一眼見到就注定了對你情有獨鐘。對你一見傾心，但是和你現(xiàn)在的關系我很滿足，至少可以看著你笑，看著你哭。我明了如果這樣發(fā)給你，會給你帶去困擾，不是我對自己不自信，而是我明白你不是一個對感情說變就變的女子。
你很少哭，偶爾遇到很感人的事情你會眼眶紅潤，而后堅強的隱忍過去。而那一次，讓我無法忘懷，他傷了你的心，而我的心也如刀割一般疼痛。
對于你們的愛情，我很少過問，你偶爾不經(jīng)意地提到他的名字，看到你嫵媚的笑容我的心竟隱隱作痛。但我反復安慰著自己，你幸福就好!然而，你和他的愛情始終是無法延續(xù)下去的，從你一次次跟我提起他的頻率中就能察覺出來，高中的單純青澀情感脆弱稚嫩，經(jīng)不起時間與空間的阻隔。他在城市那邊有了新的女朋友，而你們自然而然地成了最熟悉的陌生人。
偶爾看見你眼泛淚光，我真的很想攔你入懷。但我是君子，不能乘人之危，唯一做的只是在網(wǎng)上搜索一些冷笑話，逗你開心，看見你的笑容越來越多，我的心里那塊大石頭漸漸有了著落。
一切來得太突然，讓對感情本來就迷糊不清的你更加惶然，而我在這個時候是你最好的傾訴者。我知道不能乘虛而入，所以遲遲沒有表白。
篇2
我愛你！
每天我的動力就是見到你，并和你說說話。
你快回來，好嗎？沒有你我一人承受不來。你快回來，把我的思念帶回來，別讓我的心空如大海，好嗎？
因為我相信真愛是經(jīng)得起考驗的。
那天我們相識，是在秋雨纏綿的季節(jié)里，秋色灑滿山間，我在山間欣賞秋葉如血，欣賞秋的豐碩，秋高氣爽。
有一座山，名字叫心情，心情種滿了相思的樹，我的心里種下了對你永不變的愛！
不論天涯海角，只要你需要我的時候，我就會“飛”回你的身邊。
我永遠愛你。
我愛你，可我不敢說，我怕說了，我馬上就會死去，我不怕死，我怕我死了，再沒有人像我一樣愛你，這首詩是我在一本雜志上抄的，它是那么的吸引人，它的每一句都那么的浪漫，而又那么的簡單。每當我想起著首詩時，我就情不自禁地想起了你，你的美麗吸引著我，你的歡笑想是雨后?
炙熱之后，心中一片淡漠，瞬間的輝煌并不能帶給我刻骨銘心的向往；
好喜歡你揉我頭發(fā)的感覺，好懷念你那雙手的溫暖，卻不知什么時候，你才會再揉我的頭發(fā)，再握我的手……
常常想你，在每個深夜里；從沒忘記，你和我的約定；依然愛你，在冰天雪地里；永不分離，不管多少世紀。思念著你，我時刻想著你，深愛著你！
世界上絕對沒有人比我更愛你了。
你的身影越來越頻繁地出現(xiàn)在我的眼前，漸漸地，意如呼吸一般，一秒鐘也不中斷，弄得我吃不好飯，睡不好覺。
天知道地知道，我愛你。
篇3
我愛你！
當我走進網(wǎng)絡的時候，我的心跳加快，當我看到你的出現(xiàn)，我激動萬分，當我走出網(wǎng)絡，我感覺失意，沒有你的日子，我無法度過！
記得那個下雨天/向天空邂逅了閃電/你站在人群中/長發(fā)飄呀飄/玫瑰般的臉/心中有了愛的箭……
看著我的眼睛/你不要懷疑我的感情/不是說愛你/就代表了真心/看著我的眼睛/把一切都已經(jīng)說明/初戀的心情/為你永遠不停……
每一次望見你那輕盈的雙眼，每一次聽到你那美妙的聲音，每一次……我愛你！是那么深！你喲永遠在我夢里！
在電話中，你純純的聲音讓我幻想我真的是有了可以牽掛可以愛戀的女友了，幻想可以真的有一天見到你，可以在現(xiàn)實中象網(wǎng)上那樣隨意而自然的交談說笑，甚至幻想我真的開始了一種幸福。
我找到了可以讓我去洗滌心靈的一方凈土，可以讓我把壓抑在現(xiàn)實中的也是最真實的情緒無所顧忌地表白出來，就象大家常說的那樣，找到一個寄托，那就是——你！
第一次哭是因為你不在，第一次笑是因為遇到你，第一次笑著流淚是因為擁有你！
假如你是愛的港灣，當所有的小船最終休整好，都要起航的時候。我寧愿放棄遠航的收獲，飄蕩在你的岸邊，陪伴你暫時孤寂。
親愛的，請聽我說： "為了你，我可上九天攬月，可下五洋捉鱉！"因為：那"月"是你，那"鱉"也是你！
我渴望黑夜中我睜大雙眼，耳邊有你溫柔的話語在回響；我渴望思念里我丟手在空中，能牽到你跨越千里的深情！
我知道你就是我今生要等的人，所以我要用我的今生來愛你！
在你抑郁的時候，我就是你的開心果。在你憂傷的時候，我愿作你的忘憂樹！
愛一個人好辛苦，不知被愛的你是否有心有靈犀？哪怕一句普通話語、一絲安慰動作對我來說倍加珍惜難忘，使我牽腸掛肚！
不知道你今天好不好，我的情況可不妙。只覺得前前后后，左左右右，腦子里里外外，嗡嗡的都是你，你想我嗎？
當歲月燃燒我的一切時，不能忘記的是你那一眼的風情；當我合上雙眼時，我渴望的仍是你那一眼的風情！
路遙千里，難斷相思；人雖不至，心向往之（表白情書 fanwen.chazidian.com）。
篇4
給女朋友表白的情話
1、你離我遠嗎?一點也不，藏在我的心里呢。
2、看著你的眼，我看見了大海，藍天;更看到了美麗的未來。
3、縱世間百媚千紅，卻獨愛一種;奈何落花流水情，惟嘆相逢恨晚!
4、我有所念人，隔在遠遠鄉(xiāng)。我有所感事，結在深深腸。
5、人生無常，最重要的不是你處的位置，而是你所朝的方向。
6、今天是我們認識的第天，在一起的第天。希望我們能長長久久的。
7、愛上一個人也就愛上了，不需要解釋理由。
8、你瘦的時候在我心里，胖了就在里面卡著出不來了。
9、我希望你永遠記得我，永遠記得我這個人，我曾經(jīng)在你身邊。
10、那些以前說著永不分離的人，早已經(jīng)散落在天涯了。
11、當你對著我笑的那一刻，我真的很想把全世界都給你!
12、我一覺醒轉(zhuǎn)，你一定就在彼岸沏一壺茶，等一樹桃花。
13、兩個人在一起就已經(jīng)很幸福了，別強求太多。
14、聽說結婚很便宜，民政局9塊錢搞定，我請你吧!
15、愛的真是深，愛的真是真，愛你直到終點是永遠不會分。
16、不是除了你，我就沒人要了。只是除了你，我誰都不想要。
17、你的眼睛像一顆恒星，撐著黑夜照亮我的生命。
18、一輩子和你在一起，才叫將來;換了別人，那叫將就。
19、你本無意穿堂風，偏偏孤倨引山洪。
20、愛情讓我變笨，但是笨一點才顯得無比快樂。
21、一花一世界，一葉一追尋，一曲一場嘆，一生為一人。
22、對你我一如往昔，對我你今非比。我仍深情似海，你卻一變千里。
一天一句告白短情話
1、你在身邊 春夏秋冬 你不在身邊 四季輪回。
2、我將目不斜視 而且永遠如此。
3、我對未來的諸多期待中當然也包括你。
4、我心切慕你如鹿切慕溪水。
5、我一走向你，就感到無限溫柔吶。
6、輕輕地，不驚你夢;只愿你，夢中有我。
7、我本來是要行走江湖的，但遇見你我覺得可以先停一停。
8、想見你，在吞云吐月的疾風后，在日復一日的尋常里。
9、你是我一時的沖動，也是我良久的喜歡。
10、何止是野心，我預謀了一輩子的念想，從遇見你開始，不到黃土不死心。
戀愛情話大全短句
不會了解，你不經(jīng)意的一句話可以影響我一天的心情。
不是我喜歡的樣子你都有，而是你所有的樣子我都喜歡。
春風十里不如你，夢里夢外來愛你。
此生，你不來，我不老，你若不離我便不棄。
對于世界而言，你是一個人；但是對于我而言，你是我的整個世界。
將你心再加上我的心，就算痛苦滋味也愿意嘗。
篇5
記得那個下雨天/向天空邂逅了閃電/你站在人群中/長發(fā)飄呀飄/玫瑰般的臉/心中有了愛的箭……
看著我的眼睛/你不要懷疑我的感情/不是說愛你/就代表了真心/看著我的眼睛/把一切都已經(jīng)說明/初戀的心情/為你永遠不停……
每一次望見你那輕盈的雙眼，每一次聽到你那美妙的聲音，每一次……我愛你！是那么深！你喲永遠在我夢里！
在電話中，你純純的聲音讓我幻想我真的是有了可以牽掛可以愛戀的女友了，幻想可以真的有一天見到你，可以在現(xiàn)實中象網(wǎng)上那樣隨意而自然的交談說笑，甚至幻想我真的開始了一種幸福。
我找到了可以讓我去洗滌心靈的一方凈土，可以讓我把壓抑在現(xiàn)實中的也是最真實的情緒無所顧忌地表白出來，就象大家常說的那樣，找到一個寄托，那就是——你！
第一次哭是因為你不在，第一次笑是因為遇到你，第一次笑著流淚是因為擁有你！
假如你是愛的港灣，當所有的小船最終休整好，都要起航的時候。我寧愿放棄遠航的收獲，飄蕩在你的表白的話岸邊，陪伴你暫時孤寂。
親愛的，請聽我說：“為了你，我可上九天攬月，可下五洋捉鱉！”因為：那“月”是你，那“鱉”也是你！
我渴望黑夜中我睜大雙眼，耳邊有你溫柔的話語在回響；我渴望思念里我丟手在空中，能牽到你跨越千里的深情！
我知道你就是我今生要等的人，所以我要用我的今生來愛你！
在你抑郁的時候，我就是你的開心果。在你憂傷的時候，我愿作你的忘憂樹！
篇6
評書大師劉蘭芳的大弟子,在全國首創(chuàng)個人表演品牌――情景書。
跟劉朝電話溝通采訪事宜,剛一聲“喂”,就讓人渾身為之一震。聲音飽滿、中氣十足,字字清晰有律動――不愧是劉蘭芳大師的大弟子。而劉朝本人,卻如她的名字一樣朝氣蓬勃。一雙靈動的杏眼,高興了還會擺幾個可愛造型,說話手舞足蹈,心態(tài)極為年輕。活潑的性格雖然跟武警身份有點距離,卻是一個極好的藝術基礎。
劉朝是天生的舞臺表演藝術家。
最受歡迎的女演員
劉朝出身于藝術世家,父母均是資深話劇表演藝術家,師從著名劇作家和戲劇表演藝術家、教育家歐陽予倩。劉朝從小受到很多藝術門類的熏陶,歌舞團、雜技團、京劇團都居住在那個大院。這樣的耳濡目染,讓劉朝從小對藝術有著濃厚的興趣。
學了8年芭蕾,跳了段舞劇《白毛女》里面的“喜兒”,劉朝順利考入昆明軍區(qū)國防文工團。后來,為了發(fā)展曲藝事業(yè),劉朝又調(diào)入四川曲藝團。當兵那幾年,劉朝在成都、湖南、云南等很多少數(shù)民族的地方生活很久,打下了很好的少數(shù)民族藝術基礎。在成都,劉朝還拜著名聲樂教授劉崇義為師,在劉老師的指導下,進行了8年專業(yè)的聲樂學習。劉朝藝術天分很高,學習聲樂的第二年,就受四川音樂學院院長的邀請,在四川音樂學院開了個人音樂會,并成功駕馭了民族、歌劇、曲藝、戲曲四大藝術板塊。
在四川的時候,劉朝參加中央電視臺的“全國青年歌手電視大賽”,在四川賽區(qū)連續(xù)三年第一名。劉朝是那種天生吃舞臺飯的人,往舞臺上一站,自有一股抓人的氣場,她的演出總是最受觀眾歡迎。上世紀80年代,劉朝在四川攀枝花演出,第一天在電廠演出完,第二天轉(zhuǎn)戰(zhàn)到煉鋼廠。電廠的工人們坐著拖拉機集體追到煉鋼廠看劉朝演出,辦公室的人跟劉朝說:“劉老師,你看你整的人家跟著你搬遷。”
劉朝在西昌衛(wèi)星發(fā)射基地說《岳云傳》,這一錘砸下去,“欲知后事如何,咱們下回再講。” 下面觀眾不干了,拍著手齊聲喊:“劉朝!來一個!劉朝!來一個!”把同臺的演員氣得不行,西昌發(fā)射基地都是高層次的軍官,文化程度特別高,“劉朝怎么那么火?我們十多分鐘一個炮都沒出。”在四川康定海拔2000多米的高原上演出,缺氧,氣都喘不勻,聚精會神地演出完畢,累得快虛脫了。好不容易到后臺休息一下,接到觀眾遞來的條子,“請這個演員再返場。”硬咬牙上場,一邊唱一邊喘,劉朝覺得特別對不住觀眾,觀眾卻依然報以熱烈的掌聲。這大概就是所謂的觀眾緣吧。
不會假唱的女歌手
1994年,劉朝到北京報考剛成立不久的武警北京第二總隊文工團,監(jiān)考人是著名歌唱家李雙江,他當場給了劉朝一個簡短但分量很重的評語:“這個演員可取。”
同年,中央電視臺現(xiàn)場直播“郭蘭英舞臺生涯60周年大型演唱會”,郭蘭英親自給劉朝發(fā)出邀請函。劉朝唱了一首《八月十五月兒明》,第一嗓子出去,立刻掌聲雷動。劉朝說她壓根兒不能假唱,有時候需要電視還聲,她就關著麥克風唱,“我就想現(xiàn)場唱,過癮。不讓出聲可急死我了!”所以她只會“假假唱”。
劉朝在武警二總隊擔任了3年團長,經(jīng)常帶兵下部隊演出,業(yè)務基本荒廢了。熱愛藝術的劉朝心里很焦急。有一次她聽說一個故事,3個男特警去墨西哥參加國際射擊比賽,在機場因為攜帶槍支被攔下來。后來好不容易轉(zhuǎn)機來到了墨西哥,誰知道人到了,槍卻托運丟了。報到截至時間在即,3個男特警決定借槍報到。可是槍支等于是自己的孩子呀!天天擦卸維護,已經(jīng)用慣了手。射擊場上失之毫厘差之千里,到了墨西哥才知道比賽規(guī)則有變。3個男特警翻越半個地球代表中國參加比賽,時差還沒有倒過來,連夜熟悉槍支,裝卸,瞄準,掏槍,練習新規(guī)則,最終比賽獲得第二名。
劉朝立刻去男特警體驗生活,隨后創(chuàng)作出一個本子《目標正前方》。這個作品獲得了全軍比賽的最高獎。劉朝因此被調(diào)入中國武警總部。在總部干了3年,劉朝依然深深惦記著她的藝術夢想。部隊給了劉朝發(fā)展的空間,這些年劉朝把全國全軍的曲藝金獎統(tǒng)統(tǒng)收入囊中。但她是一個不安于安逸的人,朋友說她“藝術張力比較大”。47歲的時候,劉朝提前退伍,準備開始放開腳步追尋她多年的夢想。
退伍后,劉朝創(chuàng)作并演播了《雙槍老太婆》《女子特警隊》《歡喜蟲》《野火春風斗古城》《東廠與西廠》,配樂評書《女神》6部長篇作品。而這僅僅是劉朝退伍生涯的序幕。她還有一個更大的夢想:創(chuàng)立自己的曲藝品牌――情景書。
開創(chuàng)新式評書“情景書”
劉朝是在部隊成長起來的文藝兵,她有著無限的藝術創(chuàng)新想象力,她想創(chuàng)“情景書”這個品牌已是多年的夢想了。以往傳統(tǒng)評書的表演是一身大褂、一張桌子、一塊手帕、一塊醒木。但劉朝更渴望能張開藝術想象的翅膀,調(diào)動多方面表演元素為觀眾服務。她要將自己多年來積累的形體、聲樂、說唱表演,甚至各種音色的打擊樂等姊妹藝術巧妙地融入作品和人物中去。劉朝現(xiàn)在的表演已由一臺專業(yè)電子演奏琴代替了書桌,一身迷彩服和她自己設計的服裝替代了大褂。由劉朝一人表演、演奏并演唱的歌曲、背景音樂、各種音效聲在作品中恰當?shù)仄鸬胶嫱凶饔谩Ｏ嘈庞^眾一定能在豐富多彩的講述意境中達到全新的視聽效果。
劉朝正在創(chuàng)作的情景書《多彩女警》就是這種嘗試――女特警隊長說:“同志們,總部馬上要搞一臺春晚,要求我們趕排一個反映女特警的節(jié)目,來!展示展示!”有的女特警就“我來表演一段山東快書,當里個當,當里個當……”接著就說開了;有的說:“我是四川的,我給大家唱一段四川青衣吧……”正當大家都踴躍表現(xiàn)的時候,隊長發(fā)現(xiàn)一個湖南湘西的小戰(zhàn)士,特別文靜地坐在角落,也不說話。隊長問她:“湘妹子你怎么回事?你在練武場上那么虎虎生威,到這種場合怎么一言不發(fā)了呢?”她說:“我不會跳舞,唱歌五音又不全。”隊長說:“聽說你的苗族銅鼓打得非常好啊,你打給我們看看嘛!”劉朝順手演奏起電子琴,用鼓的音效來了一段精彩的打擊樂。
情景書可以說完全建立在劉朝的多才多藝上,在她評書的語言、吐字、氣息等功底上,插入其他藝術元素,創(chuàng)造出更加豐富生動的人物形象。在樂器的選用上,劉朝用了電子琴。電子琴的音色非常豐富,可以模擬出很多種音效,為場景的擬定提供了很好的條件。想起以前演出的時候,劉朝皺起了眉頭,“我把本子標得清清楚楚,跟音響師商量:‘我剛說完這句話,音樂立刻起。’但音響師往往配合不好。演員在臺上講究一個節(jié)奏,你停兩秒鐘都難受,整個氣氛就干了。所以我很愿意一個人把音效都搞定。”
情景書還是個暫定名,有一次劉朝跟奇志吃飯,奇志說:“你這個想法非常好啊!要叫情景故事有點兒直白,叫‘情景龍門’怎么樣?”劉朝覺得“龍門”有地域性,北方人可能不懂,就暫定為“情景書”的名字了。
劉朝說,情景書是她18年前的一個夢想。但是一直囿于各種想法的桎梏,比如傳統(tǒng)藝術的傳承等。情景書的想法也引起了一些老藝術家的討論。但劉朝認為藝術爭議很正常,“18年前我沒有做,我已經(jīng)很后悔了。我浪費了18年的光陰,因為給自己設限。現(xiàn)在到了一定的年齡,藝術視角是不一樣的。我想該到時候了,成不成是一回事,做不做是一回事。”
藝術積淀厚積薄發(fā)
情景書充分地發(fā)揮出劉朝幾十年積累的舞臺經(jīng)驗。因為兼任北大語言和表演的教授,劉朝經(jīng)常接觸正在學習藝術的學生,她對這些學生常有深深的憂慮。現(xiàn)在條件好了,學生們都去追求學歷,而舞臺經(jīng)驗貧瘠,有的學生研究生畢業(yè)只有幾場演出經(jīng)驗。浮躁,沉不下心來刻苦也是一大現(xiàn)象。劉朝說起《我的丑娘》的演員張少華老師,“我跟張少華老師配過戲。看看人家的藝術精神,她在后臺什么時候都在默戲、看臺詞,就跟我父親那代人很像,飯不吃茶不喝覺不睡,首先把這個作品拿下。唐國強老師有句話說得特別好:拼藝術拼到最后拼的是文化。”
的確,藝術積淀不深厚,藝術道路走不遠。而劉朝好像正相反,是那種特別沉得住氣的人。別人都替她著急,這么好的舞臺功底,為什么一直在沉寂?劉朝卻說:“十年磨一劍,著什么急?”不把情景書研究到幾近完美,劉朝是不會輕易拿出手的。這是劉朝對藝術的嚴謹。
篇7
[關鍵詞] 肺纖維化；基質(zhì)金屬蛋白酶-2；基質(zhì)金屬蛋白酶-9
[中圖分類號] R285.5 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2012）05（c）-0014-03
肺纖維化是多種慢性肺疾病的共同結局，表現(xiàn)為肺間質(zhì)細胞大量增殖、細胞外基質(zhì)（ECM） 異常增生及肺組織結構的重構，疾病早期表現(xiàn)為彌漫性肺泡炎，肺泡結構破壞，肺泡上皮細胞和基底膜的損傷是肺間質(zhì)纖維化病理過程的特征性改變，MMP-2和MMP-9可以降解肺泡壁基底膜的重要成分Ⅳ型膠原，因此，MMP-2和MMP-9在肺纖維化的發(fā)生過程中起著重要的作用。清肺化痰通絡方是全國名老中醫(yī)邱幸凡教授的臨床經(jīng)驗方，在臨床應用中取得了較好療效。本實驗借鑒博萊霉素A5（BLMA5）誘發(fā)的大鼠肺纖維化模型，利用免疫組化法檢測肺內(nèi)MMP-2和MMP-9的表達，以探討清肺化痰通絡方防治肺纖維化的作用及可能機制。
1 材料與方法
1.1 實驗動物
雌性Wistar大鼠72只，SPF級，體重（200±20）g，購于武漢大學試驗動物中心。
1.2 試驗藥物
清肺化痰通絡方由黃芩、瓜蔞、桃仁、地龍、黃芪、當歸、魚腥草（購于湖北省中醫(yī)院）組成；常規(guī)水煎后，水浴濃縮藥液至每1 mL含生藥2 g，4℃保存。將BLMA5（8 mg/支，天津太和制藥有限公司，批號：030705）制成5 mg/mL的生理鹽水溶液。MMP-2單克隆抗體（產(chǎn)品編號：ZM-0330）、MMP-9單克隆抗體（產(chǎn)品編號：ZM-0335）及Sp試劑盒（產(chǎn)品編號：SP-9000）由北京中杉金橋生物技術有限公司提供。
1.3 肺纖維化模型制作
參照文獻[1]，將大鼠麻醉，趁動物吸氣瞬間，在額鏡的直視下迅速將焊錫制成圓頭的12號腰穿針頭，通過聲帶插入氣管約3~4 cm，緩慢注入BLMA5生理鹽水溶液1 mL/kg。立即將大鼠直立旋轉(zhuǎn)。
1.4 動物分組及處理方法
將72只大鼠隨機分為三組：① 模型組（24只）：造模2 h后，生理鹽水灌胃，15 mL/（kg·d）；② 干預組（24只）：造模2 h后，清肺化痰通絡方水煎劑灌胃，15 mL/（kg·d）；③對照組（24只）：不造模，生理鹽水灌胃，15mL/（kg·d），灌胃前禁食4 h，不禁水。以上各組動物分別在實驗第3、7、14、28天各處死6只。
1.5 標本采集及處理
經(jīng)0.5%戊巴比妥鈉溶液腹腔內(nèi)注射麻醉后，稱重；頸動脈放血處死，10％甲醛溶液固定右肺上葉，制作石蠟切片，用于HE染色和Masson染色及肺組織MMP-2和MMP-9表達檢測。
1.6 指標檢測
1.6.1 病理染色分析 依據(jù)Szapiel等[2]方法，確定肺泡炎及肺纖維化程度。①肺泡炎分級，0分：無明顯病變；1分：輕度肺泡炎，病變占全肺20%以下；2分：中度肺泡炎，病變局限在全肺20%~50%；3分：彌漫性肺泡炎，病變范圍超過50%。②肺間質(zhì)纖維化分級，0分：無肺間質(zhì)纖維化；1分：輕度肺間質(zhì)纖維化，病變范圍局限在全肺20%以下；2分：中度肺間質(zhì)纖維化，病變范圍占全肺20%~50%；3分：重度肺間質(zhì)纖維化，病變范圍超過50%，肺泡結構消失，肺組織結構紊亂。
1.6.2 免疫組織化學分析 Sp法測定肺組織的MMP-2和MMP-9表達，采用HUMIAS-2000醫(yī)學圖文分析系統(tǒng)，對免疫組織化學結果定量分析。每張切片在高倍視野（×400）下隨機選擇不相重疊的5個視野，細胞核為藍色，MMP-2和MMP-9陽性細胞為棕黃色，陰性對照片以PBS替代MMP-2和MMP-9。測定陽性細胞的積分光密度，觀察MMP-2和MMP-9免疫陽性細胞的分布，以反映各組肺組織中MMP-2和MMP-9表達的變化。
1.7 統(tǒng)計學方法
采用SPSS 12.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差（x±s）表示，三組間比較采用單因素方差分析，用q檢驗進行不同組間的兩兩比較，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
2 結果
2.1 清肺化痰通絡方對肺纖維化大鼠肺組織的影響
2.1.1 肉眼觀察 對照組可見大鼠肺呈粉紅色，表面光滑，彈性良好。模型組第3、7天可見大鼠雙肺呈鮮紅色，有數(shù)個的散在出血點，體積增大，第14天雙肺可見暗紅色陳舊出血，第28天時雙肺蒼白、表面凸凹不平、體積縮小、彈性較差，硬度增加。干預組與模型組病變基本一致，但程度稍輕，肺體積略增大，彈性稍差。
2.1.2 鏡下觀察 對照組大鼠肺組織結構清晰，肺泡壁完整，肺泡上皮細胞形態(tài)正常，均未見明顯病變。模型組第3天時肺內(nèi)出現(xiàn)肺泡間隔增寬、炎性細胞浸潤等急性肺泡炎改變；第7天時炎癥表現(xiàn)更明顯，鏡下見大片炎性細胞浸潤，成纖維細胞開始增殖；第14天時肺泡炎持續(xù)加重，纖維組織開始增生；第28天肺泡炎較前有所減輕，部分肺泡腔消失，被大量成纖維細胞、增生的膠原纖維所取代，已基本呈現(xiàn)肺纖維化改變。干預組大鼠肺部病理表現(xiàn)的變化規(guī)律與模型組基本一致。三組間同時段的肺泡炎程度，差異有統(tǒng)計學意義（P ＜ 0.05）；干預組和模型組同時段肺泡炎程度差異有統(tǒng)計學意義（P ＜ 0.05），特別是第7天和第14天干預組肺泡炎程度較模型組輕，兩組間差異有高度統(tǒng)計學意義（P ＜ 0.01）。干預組和模型組在第3天肺纖維化程度差異無統(tǒng)計學意義（P ＞ 0.05），三組在第7、14、28天的肺纖維化程度，差異有統(tǒng)計學意義（P ＜ 0.05）；第28天干預組肺纖維化程度較模型組輕，差異有高度統(tǒng)計學意義（P ＜ 0.01）。見表1。
2.2 三組MMP-2和MMP-9蛋白表達比較
對照組肺組織中可見MMP-2少量陽性表達，主要分布在肺泡巨噬細胞、肺泡上皮細胞、成纖維細胞和氣道上皮細胞胞漿內(nèi)。模型組、干預組第3天時，肺內(nèi)MMP-2陽性表達細胞均多于對照組，肺泡間隔內(nèi)可見少量成纖維細胞呈陽性反應，血管、支氣管周圍及肺泡腔鏡下內(nèi)可見大量單核巨噬細胞呈強陽性反應，三組間比較，差異有統(tǒng)計學意義（P ＜ 0.05）；第7天模型組和干預組MMP-2表達明顯增強，可見大量肺泡巨噬細胞和間質(zhì)內(nèi)的成纖維細胞呈陽性表達； 第14天模型組和干預組肺內(nèi)陽性細胞表達最強，與第3、7、28天比較，差異有統(tǒng)計學意義（P ＜ 0.05）；第28天時，模型組和干預組陽性細胞較同組第14天時明顯減少，但仍高于對照組。見表2。
對照組肺內(nèi)可見MMP-9少量弱陽性表達，表達主要分布于肺胞巨噬細胞和支氣管上皮細胞。第3天時模型組、干預組大鼠肺內(nèi)血管、支氣管周圍及肺泡腔內(nèi)的單核巨噬細胞呈強陽性反應，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P ＜ 0.05）；第7天模型組和干預組肺內(nèi)MMP-9表達增強，除支氣管上皮細胞、肺泡上皮細胞外，還見大量間質(zhì)內(nèi)的成纖維細胞和肺泡巨噬細胞呈陽性表達，與同組第3、14、28天比較，差異有高度統(tǒng)計學意義（P ＜ 0.01）；第14天模型組和干預組肺內(nèi)陽性細胞略有減少；第28天模型組和干預組MMP-9表達較第7天時明顯減弱，但仍高于對照組（P ＜ 0.05）。干預組陽性細胞明顯少于同時段模型組，兩組間差異有統(tǒng)計學意義（P ＜ 0.05）。見表2。
3 討論
現(xiàn)代醫(yī)家根據(jù)肺纖維化臨床表現(xiàn)及病機變化將其歸為咳嗽、肺脹、喘證、氣短、肺痿、肺痹、痰飲等范疇，正氣虧虛為本，血瘀內(nèi)阻為標，正虛邪實為其基本病機，其中，痰阻肺絡、肺陰不足、瘀血阻滯、內(nèi)閉喘脫為臨床多見的病變類型。消腫化痰通絡方中黃芩、瓜蔞為君藥，黃芩味苦寒主入肺經(jīng)，可瀉火解毒，治肺熱所致咳吐黃痰；瓜蔞藥味甘、微苦，性寒，歸肺、胃、大腸經(jīng)，清熱化痰，寬胸散結、痛瘡腫毒，兩者相伍則肺之熱清痰化而氣機調(diào)暢；魚腥草味辛，性微寒，歸肺經(jīng)具有清熱解毒、消癰排膿功效，肺萎之人久咳入絡，必兼氣虛血瘀，故以地龍、桃仁活血化瘀、通絡，且地龍性寒味咸，善下行可平抑上逆之肺氣而止咳平喘；佐以黃芪、當歸養(yǎng)血補氣，與君藥相配，苦寒、甘溫并用，使肺熱得清而不傷肺津，共奏清熱化痰、止咳平喘、活血益氣之功。
實驗結果顯示，造模大鼠均有不同程度的聳毛、活動減少、嗜睡，少吃等癥狀。造模初期可見大鼠體重明顯下降，約3 d后逐漸緩解，其中，干預組體重恢復較快，第28天時體重已與空白對照組相近，而模型組體重恢復較慢，第28天時仍明顯低于對照組。通過HE光鏡觀察模型組早期即出現(xiàn)肺泡炎，14 d后以肺纖維化病變?yōu)橹鳎?8 d出現(xiàn)典型的肺纖維化改變，符合肺纖維化的病理改變過程[3]，提示造模成功。干預組肺泡炎程度明顯的輕于模型組，提示清肺化痰通絡方可以減輕早期肺泡炎的改變，第14、28天干預組肺纖維化程度輕于同時段的模型組。提示清肺化痰通絡方可以減輕模型動物的癥狀，并在肺組織結構上減輕和延緩纖維化的發(fā)生。
組織纖維化的發(fā)生是由于ECM代謝失衡，打破了臟器原有的組織結構，纖維結締組織大量增生的結果[4]。ECM包括纖維性成分、連接蛋白和間質(zhì)成分，主要為糖胺聚糖等，其對細胞增殖和分化發(fā)揮重要調(diào)控作用，合成和降解這些蛋白質(zhì)的ECM代謝酶可分為基質(zhì)金屬蛋白酶類 （MMPs）和基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制物（TIMP）。MMPs的明膠酶（MMP-2、MMP-9）主要降解Ⅳ膠原纖維、纖維連接蛋白、肺基膜等成分，由于肺基膜及結構支架的損傷與肺纖維化密切相關，因此，MMPs在肺纖維化發(fā)生中的作用日益受到重視[5]。有報道MMP抑制劑巴馬司他等能降低MMP-9活性，抑制TNF-α和TGF-β1釋放，減輕動物模型的肺纖維化[6-7]。Lemjabbar等[8]測定了肺間質(zhì)纖維化患者支氣管肺泡灌洗液中蛋白和MMP-2 mRNA的表達，顯示激素及免疫抑制劑治療可以降低肺內(nèi)MMP-2表達。上述研究均表明損傷肺組織可能通過持續(xù)性高表達MMPs，使基膜不可逆性損傷斷裂，阻礙新生上皮組織重構正常肺泡腔，最終導致肺纖維化。
本實驗研究顯示，第3天開始模型組和干預組肺內(nèi)MMP-2、MMP-9的表達均開始增加，模型組和干預組MMP-9在第7天時已經(jīng)達到高峰，然后干預組快速下降，到第28天時MMP-9水平基本接近正常，模型組在第7天出現(xiàn)MMP-9表達高峰，第14、28天也出現(xiàn)明顯的下降，但是28天時MMP-9的水平仍高于對照組。肺纖維化大鼠在造模的第3~14天以肺泡炎的病理改變?yōu)橹鳎崾綧MP-9可能與早期上皮基底膜損傷有關，參與了細胞外基質(zhì)和基底膜的降解。干預組的MMP-9明顯下降，且在第14天時MMP-9的表達明顯低于模型組，推測清肺化痰通絡方可能是通過抑制MMP-9表達，從而延緩、減輕早期肺泡炎的發(fā)生。模型組和干預組MMP-2在第14天時達到高峰，然后緩慢下降，第28天時，模型組和干預組仍高于對照組。第14、28天時以肺纖維化為主要病變，提示MMP-2則可能在肺泡上皮細胞的再生與肺組織的異常修復中起重要作用。第14、28天MMP-2在干預組的表達低于模型組，且干預組肺纖維化程度比模型組輕，提示清肺化痰通絡方通過延緩或者抑制MMP-2表達，達到延緩以及抑制肺纖維化的目的。
綜上所述，本實驗結果提示，BLMA5誘導的肺纖維化模型在不同時期MMPs的表達不同，早期病變肺組織以MMP-9的增加為主，晚期則以MMP-2增加為主，與有關報道一致[9]。清肺化痰通絡方可能通過抑制MMP-9在肺纖維化大鼠肺內(nèi)的表達，減輕早期的肺泡炎，抑制MMP-2的表達，延緩和抑制后期肺纖維化的發(fā)生。
[參考文獻]
[1] 陳佰義.博萊霉素致大鼠肺纖維化肺泡巨噬細胞氧化和抗氧化損傷的動態(tài)研究[J].中國醫(yī)科大學學報，1995，24（3）：240.
[2] Szapiel SV，Elson NA，F(xiàn)ulmer JD. Bleomycin induced interstitial pulmonary disease in thende，athymice mouse [J]. Am Rev Respir Dis，1979，120：893.
[3] 柴文戍，李永春，劉玉玲，等.博來霉素致肺纖維化大鼠形態(tài)學變化的實驗研究[J].中國實驗動物學報，2003，11（2）：77-80.
[4] 盧韶華，王岫南，譚云山，等.基質(zhì)金屬蛋白酶與彌漫性肺間質(zhì)纖維化[J].國外醫(yī)學：呼吸系統(tǒng)分冊，2004，24（z1）：31-34.
[5] 朱禮星，鐘南山，徐軍，等.基質(zhì)金屬蛋白酶與肺纖維化[J].現(xiàn)代臨床醫(yī)學生物工程學雜志，2001，7（5）：382-385.
[6] Corbe MS，Caulet-Maugendre N，Germain S，et al. Inhibition of bleomycin-induced pulmonary fibrosis in mice by the matrix metalloproteinase inhibitor batimastat [J]. J Pathol，2001，193（4）：538-545.
[7] Underwood DC，Osborn RR，Bochnowicz S，et al. SB 239063，a p38 MAPK inhibitor，reduces neutrophilia，inflammatory cytokines，MMP-9，and fibrosis in lung [J]. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol，2000，279（5）：895-902.
篇8
【關鍵詞】肺結核;基質(zhì)金屬蛋白酶-9;血管內(nèi)皮細胞生長因子
Investigation of the serum MMP-9 and VEGF and its role in active pulmonary tuberculosis patients
HE QinWei
【Abstract】Objective To study the relationship between the serum expression of MMP-9 and VEGF with the clinical characteristics in active pulmonary tuberculosis patients. Methods Expression of MMP-9 and VEGF were detected by ELISA method in 42 patients with active pulmonary tuberculosis and with a control of 42 health cases. Results The serum levels of MMP-9 and VEGF in active pulmonary tuberculosis patients were significantly higher than that of healthy group(P
【Key words】Pulmonary tuberculosis;Matrix metalloproteinase-9;Vascular endothelial growth factor
【中圖分類號】R521 【文獻標識碼】A 【文章編號】1006-1959(2009)08-0045-02
結核是威脅人類健康的重要疾病之一。目前全世界每年結核發(fā)病率以大于1%的速度增長,即全世界每年有800萬的新增結核病例,而每年有200萬人直接死于結核病[1]。結核發(fā)病率的增加除與現(xiàn)在流行的結核菌株抗菌性增加有關外,對結核感染機制可能由T淋巴細胞介導的細胞免疫反應,多種炎癥性細胞因子和血管生成因子參與了該過程[1]。本研究即利用雙抗體夾心ELISA法檢測活動性肺結核患者血清中MMP-9及VEGF的表達,探討其在肺結核發(fā)生發(fā)展中的作用及與臨床特點的關系。
1 病例與方法
1.1病例:
活動性肺結核患者42名。近2個月內(nèi)無其它感染性疾病,其中男性20名,女性22名,年齡20～56歲(平均33.4歲)。42例患者中痰結核分枝桿菌涂片陽性22例,陰性20例;42例均經(jīng)高分辨CT區(qū)分為空洞型肺結核18例和無空洞型肺結核24例;病變局限23例,病變廣泛19例。健康對照者42例,其中男性21名,女性21名,年齡20～50歲(平均32.9歲)。
1.2 方法:①儀器:Dynatech MR5000酶標儀。②試劑:MMP-9和VEGF定量ELISA試劑盒為美國PBM公司產(chǎn)品。③ 標本收集:采患者和健康對照者靜脈血5ml,立即離心機離心,2 500rpm離心10min,吸取血清-70℃保存待測。④ 操作方法:首先以標準品/標本稀釋液將凍干標準品復溶,靜置15min后混勻(濃度為2000pg/ml);進行倍比稀釋成7個濃度。取出所需板條,除空白孔外,分別將標本或不同濃度標準品(100ul/孔)加入相應孔中,用封板膠紙封住反應孔,溫室(20~25℃)孵育120min,洗板4次;除空白孔外,加入檢測劑工作液(100ul/孔),封住板孔,溫室20~25℃)孵育60min;洗板4次;加入底物(50ul/孔),避光室溫25min。加入終止液(50ul/孔)均勻后即刻測量OD450值(5min內(nèi))。
1.3 統(tǒng)計學分析:采用SAS 8.01 for windows 進行統(tǒng)計分析, 實驗數(shù)據(jù)以(x±s)表示,組間比較采用秩和檢驗。
2 結果
2.1 肺結核患者及健康志愿者血清中MMP-9、VEGF表達水平的比較:活動性肺結核患者組血清中兩種因子水平顯著高于健康志愿者組 (P
2.2 痰結核涂片陽性組與痰結核涂片陰性組血清中MMP-9、VEGF表達水平的比較:痰結核涂片陽性組血清中兩種因子水平顯著高于痰結核涂片陰性組 (P
2.3 肺內(nèi)空洞病變組與肺內(nèi)無空洞病變組血清中MMP-9、VEGF表達水平的比較:肺內(nèi)空洞病變組血清中兩種因子水平顯著高于肺內(nèi)無空洞病變組 (P
2.4 肺內(nèi)廣泛病變組與肺內(nèi)局限病變組血清中MMP-9、VEGF表達水平的比較:肺內(nèi)廣泛病變組血清中兩種因子水平顯著高于肺內(nèi)局限病變組 (P
3 討論
MMP是一組在結構與功能上極為相似的含鋅內(nèi)肽酶,依其結構與底物特異性分為5個亞型:膠原酶(MMP-1、-8、-13)、明膠酶(MMP-2、-9)、間質(zhì)溶素(MMP-3、-7、-10、-11、-12)、膜型MMP(MT1-、MT2-、MT3-、MT4-MMP或稱MMP-14、-15、-16、-17)和其它MMP[2,3]。MMP不僅參與正常組織的發(fā)生、塑形及修復過程,而且在許多病理過程中起重要作用,如急性與慢性炎癥、紫外線誘導的皮膚損傷、血管生成、自身免疫性大皰病、類風濕性關節(jié)炎及腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移等[4]。MMP-9是一類依賴鋅粒子的蛋白水解酶,能夠降解細胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)的主要成分Ⅳ 、V型膠原和明膠,其中Ⅳ型膠原對維持正常組織的結構和功能意義重大,MMP-9能夠與其特異性位點結合,使其降解[5]。在慢性炎癥過程中,MMP-9能誘導炎性細胞如中性粒細胞、淋巴細胞等通過基底膜[6],而被降解的ECM蛋白產(chǎn)生的趨化因子又使更多的炎性細胞聚集。在促血管生成的各種調(diào)節(jié)因子中,VEGF是一種主要調(diào)節(jié)因子,它通過血管內(nèi)皮生長因子受體轉(zhuǎn)導其促血管生成的信號,促使血管通透性增加及血管內(nèi)皮細胞增生、遷移,促進血管構建,最終導致新生血管形成[7]。此外,VEGF參與細胞外蛋白水解和基底膜的降解,利于血管內(nèi)皮細胞的遷移和增生,并增加血管的通透性,使血漿蛋白包括纖維蛋白外滲,形成纖維素網(wǎng)絡,為毛細血管延伸生長提供良好條件, 而且它能誘導MMP-9的表達[8]。MMP-9及VEGF均參與了組織的修復和重建、血管的生成、腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移、慢性炎癥反應等許多重要的生理病理過程。有研究表明結核桿菌細胞壁中的糖脂以及其他多種成分能促使單核/巨噬細胞分泌產(chǎn)生MMP-9及VEGF[6,9]。
本實驗結果顯示,肺結核患者血清MMP-9及VEGF表達水平明顯高于健康對照組,空洞型肺結核患者血清MMP-9及VEGF表達水平明顯高于非空洞型患者組,廣泛病變患者MMP-9及VEGF表達水平明顯高于局限患者組,表明肺結核患者過度表達的MMP-9及VEGF加速肺組織中EMC的降解,促進新生血管形成,反之,而新生血管形成進一步促使病灶結核桿菌播散。近期的研究表明MMP-9導致的蛋白水解可能是形成肺結核空洞的原因之一[10],本研究結果亦顯示了空洞型患者MMP-9的表達水平明顯高于無空洞型患者,較多量的MMP-9導致更強的蛋白水解作用,結核桿菌更容易形成空洞。綜上所述,MMP-9及VEGF水平與其臨床特點密切相關,推測阻斷MMP-9及VEGF表達可能為肺結核的治療提供新的思路。
參考文獻
[1] Chakrabarti B, Calverley PM, Davies PD. Tuberculosis and its incidence, special nature, and relationship with chronic obstructive pulmonary disease. Int J Chron Obstruct Pulmon Dis. 2007,2(3):263-272
[2] Airola K, Fusenig NE. Differential stromal regulation of MMP-1 expression in benign and m alignant keratinocytes. J Invest Dermatol, 2001, 116(1): 85-92
[3] Kerkel E, Ala-aho R, Jeskanen L, et al. Differential patterns of stromelysin-2 (MMP-10) and MT1-MMP (MMP-14) expression in epithelial skin cancers. Br J Cancer, 2001, 84(5): 659-669
[4] Johansson M, Airola K, Grénman R, et al. Expression of collagenase-3 (matrix metalloproteinase-13) in squamous cell carcinomas of the head and neck. Am J Pathol, 1997, 151(2): 499-508
[5] Kleiner DE, Stetler-Stevenson WG. Matrix metalloproteinases and metastasis. Cancer Chemother Pharmacol. 1999,43:Suppl:S42-51
[6] Jin HY, Lee KS, Jin SM, et al. Vascular endothelial growth factor correlates with matrix metalloproteinase-9 in the pleural effusion. Respir Med, 2004,98(2):115-22
[7] Alatas F, Alatas O, Metintas M, et al. Vascular endothelial growth factor levels in active pulmonary tuberculosis. Chest, 2004, 125(6):2156-2159
[8] Brekken RA, Thorpe PE. Vascular endothelial growth factor and vascular targeting of solid tumors. Anticancer Res, 2001,21(6B):4221-4229
[9] Rivera-Marrero CA, Schuyler W, Roser S, et al. Induction of MMP-9 mediated gelatinolytic activity in human monocytic cells by cell wall components of Mycobacterium tuberculosis. Microb Pathog, 2000, 29(4):231-244
篇9
【關鍵詞】 心肌再灌注損傷；nf-κb；血管緊張素ⅱ；葛根素
preconditioning of puerarin reduce the myocardial ischemia/reperfusion injury by inhibiting the transcription of nf-κb/wu liming，jiang ting，yei rong,jin ting,yang rui,wang fenzhen//chinese journal of cardiovascular rehabilitation medicine,2009,18(2):185
abstract：objective:to investigate whether preconditioning of puerarin could inhibit both nf-κb 65protein activation and circulatory or cardiac local ras in rat with myocardial ischemia/reperfusion injury(i/r).methods:thirtysix healthy male sd rats were randomly divided into shamoperated group (sham group)， i/r model group and puerarin preconditioning group (n=12).myocardial infarct size was measured by ttc.serum myocardial enzymes were measured and light microscopic study was performed; the localization of nf-κb was detected by immunohistochemistry and the quantitation of activated nf-κb was detected by enzymelinked immunosorbent assay(elisa); the plasma and myocardium angⅱ content was measured by radioimmunoassay method. results:compared with i/r group, infarction area was significant smaller in the puerarin pretreatment group (p<0.05) and myocardial enzyme levels were significantly lower (p<0.05 all).the angⅱ content in circulation and cardiac myocyte significantly decreased(p<0.05 all).conclusion:preconditioning of puerarin could reduce i/r by inhibiting nf-κbp65 protein activity and reducing the levels of angⅱ both circulation and local heart.
author′s address：department of cardiology,union hospital,fujian medical university,fuzhou,fujian,350001,china
key words：myocardial reperfusion injury；nf-kappa b ；angiotensinⅱ ；puerarin
核因子－κb （nf-κb）是一組多向性核轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，參與炎癥、免疫反應、細胞凋亡和腫瘤發(fā)生等多種生物進程。心肌缺血再灌注損傷（miri，i/r）時可激活對氧化還原敏感的nf-κb，并同時迅速激活腎素- 血管緊張素系統(tǒng)(ras)。葛根素(puerarin)具多種藥理作用，已報道其抑制nf-κb的活性并延緩抑制型κb（iκb）的降解而降低循環(huán)和組織血管緊張素angⅱ(angⅱ)含量。有報道葛根素預處理可明顯減輕大鼠miri，類似于缺血預處理[1]。本研究旨在初步驗證葛根素預處理對miri的保護作用是否與抑制nf-κbp65蛋白的活性，而減輕ras激活相關。
1 資料與方法
1.1 實驗動物分組
健康雄性清潔級sd大鼠共36只，均分為3組（每組12只）：（1）假手術組；（2）缺血(30min)再灌注(60min )（ir）組；（3）葛根素預處理組：葛根素 100mg/kg，于miri前15 min頸外靜脈緩慢推注。
1.2 實驗材料
（1）tkr-200c小動物呼吸機：江西特力麻醉呼吸設備公司;（2） 組織脫水機: 德國tp 1020；（3） 組織包埋機: 湖北孝感亞光電子技術研究所；（4）組織切片機:德國leica-rm 20259；（5） 數(shù)碼相機: 日本尼康coolpix 2500；（6）心電圖機：rm-6200c型生理記錄儀；（7） 全自動生化分析儀：日本東芝120fr13；（8） 解剖顯微鏡：日本olypus；（9）電子天平：美國al104；（10）葛根素注射液（2ml：0.1g）：浙江康恩貝制藥股份有限公司。
1.3 方法
1.3.1 模型制備：參照文獻報道方法 [2～4]。
1.3.2 標本的采集與處理：每組隨機抽取6只大鼠均于實驗結束相應時間點取材。①取下腔靜脈血4ml，每份2ml，其中一份加入促凝管, 3000 g，25℃離心4min, 吸取上層血清常溫放置，檢測血清心肌酶含量；另一份檢測angⅱ含量；②剪取左室前壁ir心肌組織沖洗，分為3塊, 其中3塊經(jīng)福爾馬林固定、酒精脫水、石蠟包埋后做病理組織切片，光鏡下觀察組織病理學改變，其余組織用于檢測其它指標。
1.3.3 血清心肌酶檢測：東芝120fr全自動生化分析儀檢測。
1.3.4 心肌梗死范圍測定：參照collins等[]方法測定各組心肌梗死范圍。
1.3.5 免疫組織化學分析法
（1）實驗材料：①免疫組化筆：福州邁新生物技術開發(fā)有限公司；②兔抗nf-κbp65多克隆抗體：美國santa cruz sc－109；③羊抗兔maxvisiontm二抗試劑盒(一步法): 福州邁新生物技術開發(fā)有限公司； ④dab顯色試劑盒：福州邁新生物技術開發(fā)有限公司；⑤顯微數(shù)碼成像系統(tǒng)：日本olympus bx－41。按試劑盒說明書操作，顯微鏡下心肌細胞中棕黃色顆粒為陽性表達，定位于細胞核者為nf-κbp65蛋白活化細胞；（2）心肌組織nf-κbp65蛋白活性檢測 ： ①核蛋白提取試劑盒：德國pierce公司 no.78833； ②酶聯(lián)免疫吸附測定（elisa）試劑盒：美國active motif公司 catalog nos 40096；③準蛋白：美國active motif公司 catalog nos 31102；④考馬斯亮蘭蛋白測定試劑盒：南京建成生物工程研究所；⑤高速低溫離心機：德國eppendorf centrifuge 5810r；⑥雪花機：上海f-m-70；⑦漩渦混勻器 ：北京市六一儀器廠；（3）大鼠心肌組織細胞核蛋白提取：① 心肌組織剪碎后加入適量預冷磷酸鹽緩沖液（pbs），勻漿過濾未研磨碎組織，以500 r/min，4℃離心3min，清除上清留下組織細胞； ② 分離約30mg組織加入150μl冰浴的cer1（含蛋白酶抑制劑）；③ 以2 500 r/min渦旋15s，重新懸浮組織團塊，冰上孵育10min；④ 加入8.25μl冰浴的cer2；⑤ 以2 500 r/min渦旋5s，冰上孵育1 min；⑥ 2 500 r/min渦旋5s，微量離心機4℃，14 000 g，離心5min；⑦ 棄上清部；⑧ 加入100μl冰浴ner（含蛋白酶抑制劑），以2 500 r/min渦旋15s重新懸浮未溶解組織，冰上冰浴10min，反復凍融，共40min；⑨ 以2 500 r/min渦旋5s，微量離心機4℃，14 000 g，離心10min；⑩ 立即轉(zhuǎn)上清于干凈預冷的ep管中，儲于-80℃冰箱待用；（4）細胞核蛋白定量 ：按照考馬斯亮蘭蛋白測定試劑盒說明書操作。
1.3.6 酶聯(lián)免疫吸附測定（elisa）：檢測nf-κbp65蛋白的dna結合活性：按transam nf-κbp65蛋白檢測試劑盒說明書操作。
1.3.7 放射免疫分析法測定血漿和心肌組織angⅱ含量：①血漿angⅱ含量測定：放射免疫分析藥盒購自北京北方生物技術研究所, sn-682b－3型放射免疫γ－計數(shù)器，嚴格按試劑盒說明書檢測樣本，試劑盒測定范圍10～2000pg/ml，靈敏度5pg/ml，批內(nèi)變異系數(shù)cvw<10%，批間變異系數(shù)cvw<15%，與血管緊張素i(ang i)交叉反應率<0 .01%；②心肌組織angⅱ含量測定： 根據(jù)文獻報道[6]檢測樣本，同時用考馬斯亮蘭蛋白測定試劑盒測定對應心肌組織總蛋白含量。最終心肌angⅱ含量pg/100mg 表示。
1.4 統(tǒng)計學分析
采用spss 13.0軟件包進行統(tǒng)計分析。兩兩之間比較采用snk-q檢驗。計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示，p<0.05為差異有顯著性。
2 結 果
2.1 葛根素預處理對miri大鼠血清心肌酶和心肌梗死范圍的影響
與ir組比較，葛根素預處理組的血清肌酸激酶（ck）、肌酸激酶-同功酶（ck-mb）含量明顯下降ck（8552.00±47.39）u/l∶（7165.67±83.46）u/l；ck-mb（5071.50±61.54）u/l∶（4226.33±96.11）u/l，p均<0.05；心梗范圍明顯減少，氯化四唑（ttc）為（43.54±1.10）%∶（40.44±0.73）%，p<0.05。
2.2 葛根素預處理對miri大鼠心肌組織學影響
光鏡下葛根素預處理組心肌間質(zhì)血管擴張充血較ir組明顯減輕,肌纖維輕度腫脹,有少量心肌纖維斷裂及中性粒細胞浸潤。
2.3 葛根素預處理對miri大鼠心肌組織nf-κbp65蛋白激活的影響
較之ir組，葛根素預處理組nf-κbp65的蛋白活性明顯受抑（11.93±5.05）ng/μl ∶（8.65±0.24） ng/μl，p<0.01。
2.4 葛根素預處理對miri大鼠血漿及心肌組織angⅱ含量的影響
葛根素預處理組的血漿和心肌組織angⅱ含量雖較假手術組明顯增高，但與ir組比較則顯著降低（p均<0.05），見表1。表1 葛根素對大鼠血漿及心肌血管緊張素ⅱ（angⅱ）含量的影響注：ir：缺血再灌注。與ir組比較 p<0.05；與假手術組比較p<0.05。
3 討 論
nf-κb由多個亞單位組成，靜息細胞nf-κb的p65亞基與其抑制性蛋白（iκb）結合形成復合體，以非激活的形式存在于胞漿中。細胞刺激后iκb降解，nf-κb從iκb釋放，并轉(zhuǎn)移到細胞核，暴露核定位序列，結合到靶基因的啟動子或增強子的κb結構域，引起靶基因轉(zhuǎn)錄[7]。
nf-κb是參與炎癥反應的一個重要轉(zhuǎn)錄因子，參與許多基因表達的調(diào)控，其激活在多種細胞因子、粘附分子、趨化因子釋放中起關鍵性作用[8]；miri激活nf-κb的可能因素包括氧化應激、復氧、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣離子超載、游離基、no和內(nèi)毒素等；其可誘導表達細胞間粘附分子（icam）-1、誘導型一氧化氮合成酶（inos）、腫瘤壞死因子（tnf）α和angⅱ 等，進而造成心肌炎癥反應、損傷、凋亡和壞死，已發(fā)現(xiàn)小鼠胚胎心肌細胞ir模型nf-κbp65與心肌細胞凋亡及壞死有關[9]。
葛根素為豆科多年生落葉藤本植物的干燥根提取物,其有效成份為單體－異黃酮，已知葛根素減輕miri是減少無復流現(xiàn)象、抑制鈣超載、減少白細胞損傷、抗自由基等多種機制的共同協(xié)調(diào)作用的組合[10]，葛根素可抑制過氧化氫誘導的大鼠晶狀體上皮細胞中的nf-κb活化表達和抑制iκb的降解及nf-κb活性表達，抑制腦ir后炎癥反應[11，12]。葛根素預處理可模擬經(jīng)典缺血預處理的保護作用而顯著減輕大鼠miri，但是否與抑制nf-κb p65蛋白表達并減少循環(huán)和局部angⅱ含量而發(fā)揮心肌保護作用，尚未見國內(nèi)外文獻報道。
本試驗于在體大鼠miri模型上觀察了葛根素預處理對心梗面積、心肌酶學及對nf-κbp65蛋白表達的影響，結果顯示,較之ir組，葛根素預處理在明顯縮小在體大鼠心梗面積和明顯降低心肌酶學水平的同時明顯抑制nf－κbp65蛋白的dna結合活性，提示葛根素預處理在明顯改善心肌損傷程度，能與抑制nf-κbp65蛋白表達相關。
已知葛根素可降低急性心梗患者腎素活性和angⅱ水平[13]。本試驗結果進一步顯示，葛根素預處理亦顯著降低循環(huán)及局部的angⅱ含量，推測葛根素預處理此效應可使與血管緊張素受體1（at1r）的angⅱ數(shù)量明顯減少，從而阻滯at1r導致的炎癥性心肌損傷減輕與nf-κb受抑制相關[14]。文獻報道angⅱ誘導炎癥因子的產(chǎn)生是通過nf-κb依賴途徑[15] ；nf-κb也可上調(diào)心肌細胞表面的at1r而在心肌重構中發(fā)揮作用[16]。組織ras激活后, angⅱ可經(jīng)過at1-r/nf-κb通路正反饋地進一步刺激血管緊張素原的產(chǎn)生[17]。另有報道葛根素減輕兒茶酚胺誘導的心肌損傷[18]，并從分子水平證明了葛根素為β-受體阻滯劑[19]，故筆者推測葛根素預處理一方面經(jīng)抑制nf-κbp65蛋白的表達而減少循環(huán)及局部的angⅱ含量和/或下調(diào)at1r，減輕了在體大鼠miri的炎癥反應而呈現(xiàn)心肌保護作用；另一方面減輕心臟交感神經(jīng)末梢兒茶酚胺遞質(zhì)對β受體激活，此兩種作用共同切斷了兒茶酚胺與ras相互促進形成的惡性循環(huán)，但葛根素預處理是否確實具有類似血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑（acei） 的藥理作用，抑制局部組織和循環(huán)中 angⅱ生成，尚待進一步研究。
【參考文獻】
[1]高 翔, 李 濤, 高 全，等．葛根素預處理與缺血預處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用［j］.貴陽醫(yī)學院學報，2006，31（6）：523-526.
［2］masaharu a , hideo o , minoru h , et al. myocardial ischemia induces differential regulation of katp channel gene expression in rat hearts［j］. j clin invest, 1997，100（12）:3053-3059.
［3］覃 數(shù)，陳運貞，王志華．大白鼠實驗性心肌缺血再灌注模型制備與心電圖改變的特點［j］.重慶醫(yī)科大學學報，1998，23（1）：8-11.
［4］劉付平，姚宏偉，李 俊．大鼠心肌缺血再灌注損傷模型的改進［j］.安徽醫(yī)科大學學報，2003，38（3）：234-6.
［5］collins t, read ma, neish as, et al. transcriptional regulation of endothelial cell adhesion molecules: nf-kb and cytokine inducible enhancers［j］.faseb j, 1995，9（10）:899-909.
［6］王華軍，謝良地，晉學慶，等.自發(fā)性高血壓大鼠左心室肥厚與血壓、心肌局部血管緊張素ⅱ的關系［j］.中國實驗動物學雜志，1999，9（3）：133-136.
［7］thompson je,phillips rt,erdjumentbromage h,et al.iκb-regulates the persistent response in a biphasic activation of nf-κb［j］.cell，1995，80:573-582.
［8］timothy s,blackwell,christman jw.the role of nuclear factor-κb in cytokine gene regulation［j］.am j respir cell mol biol，1997，17:3-9.
［9］brar bk，stephanoua a,okosib a,et at.grh-like peptides proctect cardiac myocytes from lethal ischaemic injury［j］.mol cell endocrinol，1999，20：55-63.
［10］孫 鵬，劉金龍.葛根素對組織缺血再灌注損傷保護機制的研究進展［j］.現(xiàn)代中西醫(yī)結合雜志，2006，15(3)：405-407.
［11］陳燕啟,劉德紅,楊光田.葛根素在大鼠全腦缺血再灌注時對核因子κb表達的影響［j］.中國中西醫(yī)結合急救雜志，2004，11（1）：21-25.
［12］趙宏偉,唐羅生,李國棟，等.葛根素對過氧化氫誘導鼠晶狀體上皮細胞nf－κb活化表達的抑制作用［j］.眼科，2004，13（2）：103-108.
［13］李淑梅，劉 斌，陳海芬，等．葛根素注射液對急性心肌梗塞患者血漿內(nèi)皮素及腎素－血管緊張素系統(tǒng)影響［j］.中國中西醫(yī)結合雜志，1997，17(6):339-341.
［14］yamamoto k, shioi t，uchiyama k, et al.attenuation of virusinduced myocardial injury by inhibition of the angiotensin ⅱ type 1 receptor signal and decreased nuclear factor-kappa b activation in knockout mice［j］.jacc，2003，42（11）：2000-2006.
［15］tsuchiya k, yoshimoto t, hirono y, et al.angiotensin ⅱ induces monocyte chemoattractant protein-1 expression via a nuclear factor-b-dependent pathway in rat preadipocytes［j］. am j physiol endocrinol metab，2006，291: 771-778.
［16］cowling rt, gurantz d, peng j,et al. transcription factor nf-kappa b is necessary for up-regulation of type 1 angiotensin ⅱ receptor mrna in rat cardiac fibroblaststreated with tumor necrosis factor-alpha or interleukin-1 beta［j］.j biol chem，2002，277:5719-5724.
［17］nagai n，izuminagai k，oike y,et al. suppression of diabetesinduced retinal inflammation by locking the angiotensin ⅱ type 1 receptor or its downstream nuclear factor-κb pathway［j］.invest ophthalmol vis sci,2007,48( 9):4342-4350.
篇10
媒體調(diào)查發(fā)現(xiàn)，七夕之前網(wǎng)購情書銷售火爆，一些淘寶店家的月銷量已經(jīng)破千。雖然大多數(shù)店家的服務口號是――只要你說出故事，我們就能寫到你滿意，但實際上這些情書還是東拼西湊、粗制濫造的比較多。而這樣的情書，又有多少人能接受呢？
七夕網(wǎng)購情書 織女讀不懂牛郎的愛
不知道S先生的這封情書到了女友的手里，女友會作何反應。但是，有一點可以想見，女友可能會看出情書不是男友所寫。這是因為，兩人之間已經(jīng)很熟悉，她知道以身為理工男的男友的文學水平，寫不出如此優(yōu)美的情書。那么，當女友知道這封情書是花錢買來的時候，她又會作何感想呢？
七夕是愛情的節(jié)日。在這個廣為流傳、感動人間的愛情故事里，牛郎無疑是木訥的、笨拙的、不善表達的。因為他就是一個普普通通的凡人，也沒有多少文化知識。要說對愛情的表白，天上的神仙哪一個不超過牛郎千百倍？可是，織女沒有看上那些巧舌如簧的神仙，偏偏看上了凡人牛郎。而且為了這段愛情付出了慘痛的代價，哪怕一年只見一次面，也要和牛郎相守相牽。這是為何？織女看上的恰恰是牛郎沒有那么多的花花腸子。即使牛郎不善表達，也不影響他們之間的純美愛情。
假如說，牛郎也到網(wǎng)上購買了一封情書，或許也就沒有這段凄美的愛情了。因為織女喜歡的就是牛郎的真情、真心。即使牛郎的表達是最笨的表達，是語無倫次的表達，但這也是最真心的表達。遺憾的是，選擇“七夕網(wǎng)購情書”的男士很多，在網(wǎng)上已經(jīng)成為火熱的生意。而有的情書卻會在上網(wǎng)搜索的時候露出了馬腳，很多優(yōu)美的句子都是別人使用過的。這是何等的尷尬？七夕網(wǎng)購情書，牛郎的真情織女讀不懂。須知愛情中，最珍貴的不是華麗辭藻，而是一顆真心。
網(wǎng)購情書讓七夕節(jié)變了味