導(dǎo)語：如何才能寫好一篇高效液相色譜，這就需要搜集整理更多的資料和文獻(xiàn)，歡迎閱讀由公務(wù)員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

摘要：目的制定柴胡藥材中柴胡皂苷a、d的含量測(cè)定方法。方法用高效液相色譜蒸發(fā)光散射檢測(cè)法（HPLCELSD）,AlltimaC18色譜柱,流動(dòng)相甲醇水（80∶20）,速度0.8ml・min1；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器參數(shù)：漂移管溫度40℃，氣壓3.5bar。結(jié)果柴胡皂苷a和柴胡皂苷d分別在1.908~19.08μg（r=0.9996）和1.804~18.04μg（r=0.9992）范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,平均回收率分別為98.35%（RSD=1.26%）和97.64%（RSD=1.58%）。結(jié)論該方法簡便、靈敏、可靠、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好,可作為柴胡藥材的質(zhì)量控制方法。

關(guān)鍵詞：柴胡；高效液相色譜蒸發(fā)光散射檢測(cè)法；柴胡皂苷

DeterminationofSaikosaponina,dinRadixBupleuribyHPLCELSD

Abstract：ObjectiveTodeterminesaikosaponina,dinRadixBupleuribyHPLCELSD.MethodsHPLCELSDwasusedinthequantitativeanalysisbyusingAlltimaC18chromatographycolumnandmethanolwater(80∶20)asamobilephase.Theflowrateofmobilephasewas0.8ml・min1.Thetubetemperatureofthedetectorwas40℃.Thepressofpureairwas3.5bar.ResultsThelinearrangesforsaikosaponinaanddwere1.908~19.08μg（r=0.9996）and1.804~18.04μg（r=0.9992）,theaveragerecoverieswere98.35%(RSD=1.26%)and97.64%(RSD=1.58%),respectively.ConclusionThismethodiseasy,sensitive,reliable,accurate,reproducibleandcanbeusedasthequalitycontrolmethodofRadixBupleuri.

Keywords：RadixBupleuri;HPLCELSD;Saikosaponin

柴胡藥材來源于傘形科植物柴胡BupleurumchinenseDC.或狹葉柴胡BupleurumscorzonerifoliumWilld.的干燥根。為常用中藥,在我國已有2000多年藥用歷史,具有和解表里、疏肝、升陽之功效［1］。其主要有效成分為柴胡皂苷,其中柴胡皂苷a，d的活性較強(qiáng),具有抗炎、保肝、降低血中膽固醇等藥理活性［2］。應(yīng)用高效液相色譜法測(cè)定柴胡皂苷a，d含量的報(bào)道較多［3，4］。但由于檢測(cè)波長在210nm,雜質(zhì)峰干擾十分嚴(yán)重,檢測(cè)靈敏度低,影響了含量測(cè)定的準(zhǔn)確性。本文應(yīng)用HPLCELSD法同時(shí)測(cè)定柴胡皂苷a，d的含量,其雜質(zhì)峰干擾小,分離度好,靈敏度高,出峰時(shí)間短,便于操作。

1儀器與試藥

高效液相色譜儀：Agilent1100系統(tǒng)，SEDEX75型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器；超聲波清洗機(jī)（中國華南超聲波設(shè)備廠），工作頻率25kHz，功率250w。柴胡皂苷a，d對(duì)照品購自中國藥品生物制品檢定所，含量測(cè)定用,批號(hào)分別為110777200303和110778200402；甲醇為色譜純（CALEDONLABORATORIESLSD.），水為重蒸水，其它試劑均為分析純；柴胡藥材經(jīng)鑒定為柴胡BupleurumchinenseDC.的根。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱為AlltimaC18(250mm×4.6mm,5μm);流動(dòng)相：甲醇水（80∶20）；速度0.8ml・min1，柱溫25℃；檢測(cè)器參數(shù)：漂移管溫度40℃，氣壓3.5bar。在選定的條件下，柴胡皂苷a、d對(duì)照品與樣品中其它組分色譜峰可基線分離，峰形好。按柴胡皂苷d峰計(jì)算，理論板數(shù)為3000以上。柴胡皂苷a，d對(duì)照品，供試品的高效液相色譜圖見圖1。

1.柴胡皂苷a2.柴胡皂苷da供試品圖譜b對(duì)照品圖譜

圖1高效液相色譜圖（略）

2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取柴胡皂苷a9.54mg和柴胡皂苷d9.02mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得。

2.3供試品溶液的制備取柴胡藥材粉末（過60目篩）約1g，精密稱定，置25ml量瓶中，加入5%氨水甲醇20ml，超聲處理40min，放置至室溫，加5%氨水甲醇至刻度，搖勻，靜置，精密吸取上清液20ml置蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，加甲醇溶解，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4線性關(guān)系考察分別精密吸取柴胡皂苷a和d的混合對(duì)照品溶液2，5，10，15，20μl注入高效液相色譜儀中，分別測(cè)定柴胡皂苷a和d的峰面積。以峰面積自然對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量的自然對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。柴胡皂苷a在1.908~19.08μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，回歸方程為Y=5.89721.5336X，r=0.9996；柴胡皂苷d在1.804~18.04μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，回歸方程為Y=5.86191.4965X，r=0.9992。

2.5精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液10μl，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積，結(jié)果柴胡皂苷a和d的RSD分別為1.18%和1.53%，表明儀器的精密度良好。

2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取樣品溶液,按含量測(cè)定方法及色譜條件分別置0，2，4，6,8h測(cè)定，結(jié)果柴胡皂苷a和d的RSD分別為1.29%和1.68%，表明樣品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)精密稱取同批號(hào)樣品6份，按含量測(cè)定方法及色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果樣品中柴胡皂苷a和d的平均含量分別為11.4541，8.3612mg・g1，RSD分別為1.34%和1.82%。

2.8回收率實(shí)驗(yàn)采用加樣回收法，，取已知柴胡皂苷a，d含量的樣品6份，每份約0.5g，精密稱定，分別加入柴胡皂苷a對(duì)照品6.0544mg和柴胡皂苷d對(duì)照品4.4621mg，按含量測(cè)定方法及色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果柴胡皂苷a和d的平均回收率分別為98.35%（RSD=1.26%）和97.64%（RSD=1.58%）。

2.9樣品測(cè)定取不同批號(hào)的藥材，按上述供試液的制備方法制備供試液。精密吸取對(duì)照品溶液5，20μl及供試品溶液10μl，分別注入液相色譜儀，按外標(biāo)兩點(diǎn)法測(cè)定柴胡皂苷a，d含量，結(jié)果見表1。

3討論

3.1柴胡皂苷a，d為柴胡的主要有效成分,但在提取過程中其結(jié)構(gòu)易發(fā)生變化,因此，嚴(yán)格控制提取條件十分重要。本實(shí)驗(yàn)比較了甲醇、5%吡啶甲醇、5%氨水甲醇的提取效果。結(jié)果表明，5%氨水甲醇溶液超聲提取效果最佳。

表1樣品含量測(cè)定結(jié)果（略）

3.2采用5%氨水甲醇溶液超聲處理，分別測(cè)定了不同提取時(shí)間（20，30，40，50min）樣品中柴胡皂苷a，d的含量，結(jié)果在40～50min內(nèi)樣品中柴胡皂苷a、d的含量基本不變。故文中采用超聲40min的方法。

3.3本文采用HPLCELSD法測(cè)定柴胡中柴胡皂苷a，d的含量,較采用紫外檢測(cè)器檢測(cè),能明顯減少雜質(zhì)峰的干擾,峰形好,出峰時(shí)間短,有利于提高檢測(cè)的準(zhǔn)確度和工作效率。

參考文獻(xiàn)：

［1］國家藥典委員會(huì).中國藥典，Ⅰ部［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：198.

［2］張本.柴胡屬植物藥理作用研究概況［J］.吉林中醫(yī)藥，1983，3(1):39.

篇2

關(guān)鍵詞：高效液相 鄰苯二甲酸酯類 殘留

當(dāng)今社會(huì)食品安全問題愈來愈受到廣大百姓的關(guān)心 ,食品安全的范圍很廣,它不僅僅指食品本身 ,還涉及到與食品相關(guān)的諸多方面 ,如食品所用原材料、食品加工工藝過程污染控制、食品放置與儲(chǔ)存、食品包裝所用材料等方面。

鄰苯二甲酸酯（PAEs）也稱為酞酸酯，主要用作塑料增塑劑，隨著塑料工業(yè)的發(fā)展和塑料制品的大量使用，鄰苯二甲酸酯已成為環(huán)境中無所不在的污染物，極為普遍地存在于土壤、底泥、大氣、水體和生物體等環(huán)境樣品中，酞酸酯類物質(zhì)是一類環(huán)境雌激素，它可以擾亂內(nèi)分泌, 對(duì)人體健康危害巨大。世界衛(wèi)生組織（WHO）1995年公布的必須控制的[5]。其中有6種商品化的鄰苯二甲酸酯被美國EPA列為重點(diǎn)控制的污染物（鄰苯二甲酸二甲酯 DMP 、二乙酯 DEP 、二丁酯 DBP 、鄰苯二甲酸二 2-乙基己 酯 DEHP 、二辛酯 DOP 、丁基芐基酯 BBP）,3種被我國列為優(yōu)先控制污染物（DMP、DBP和 DOP）,8種被列在世界野生動(dòng)物基金會(huì)(WWF)的環(huán)境激素名單中。本文針對(duì)食品用塑料包裝中添加的增塑劑鄰苯二甲酸酯類化合物展開研究 ,建立一種方便、快捷、準(zhǔn)確的檢測(cè)方法。

1實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器與試劑

高效液相色譜儀(Waters Allance 2695-2996),Empower2色譜工作站,PDA檢測(cè)器； SunFire C18 ,15cm×4.6mm×5μm色譜柱；吉爾森GX271全自動(dòng)固相萃取儀。固相萃取小柱，Waters公司的 OASIS.HLB（6mL,200mg）小柱；分析天平：感量0.1mg；美國Organomation N-EVAP112型氮吹儀；IKAR werke T25型均質(zhì)機(jī)；離心機(jī)；溶劑過濾裝置；0.45μm有機(jī)濾膜；Milli-Q超純水機(jī)。

甲醇、乙腈為HPLC級(jí)（美國Fisher公司）；丙酮、氯化鈉、無水硫酸鈉無為分析純?cè)噭?/p>

鄰苯二甲酸酯類標(biāo)準(zhǔn)品：鄰苯二甲酸二甲酯（DMP）、鄰苯二甲酸二乙酯（DEP）、鄰苯二甲酸二丁酯（DBP）、鄰苯二甲酸二戊酯（DPP）、鄰苯二甲酸二己酯（DHXP）、鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）、鄰苯二甲酸二辛酯（DNOP）。標(biāo)準(zhǔn)品純度均在97%以上,美國進(jìn)口,購于百靈威化學(xué)品部。

1.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制[4，7，8]

準(zhǔn)確稱取上述標(biāo)準(zhǔn)品各0.1000g,分別用甲醇定容至100mL容量瓶中,配成100mg/mL的單標(biāo)儲(chǔ)備液。分別移取上述單標(biāo)儲(chǔ)備液各10mL，放置到100mL容量瓶中。用甲醇定容，配制成100mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液每6個(gè)月更換一次，或與標(biāo)準(zhǔn)品比較，發(fā)現(xiàn)問題時(shí)，必須立即更換。

混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的制備：取一定量的100mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用甲醇分別稀釋成質(zhì)量濃度為0.16、1.60、16.00、40.00mg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列，置于4℃冰箱中保存。混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液每1～2個(gè)月進(jìn)行更換，或與標(biāo)準(zhǔn)品比較，發(fā)現(xiàn)問題時(shí)，必須立即更換。

1.3樣品前處理[6]

1.3.1 食品

（1）油脂類固體或半固體樣品：稱取均勻樣品2g(精確至0.1mg)置于離心管中，加入10mL正己烷，均質(zhì)2min，2500r/min離心3min，己烷層轉(zhuǎn)入125mL分液漏斗中，再用10mL正己烷重復(fù)提取一次，己烷層并入125mL分液漏斗中。用90ml乙腈分三次提取，合并三次乙腈提取液于500mL分液漏斗中，加入250mL10%氯化鈉溶液，用200mL正己烷分兩次提取，經(jīng)裝有10g無水流酸鈉的漏斗收集于梨形瓶中，40℃下蒸發(fā)近干。殘留物用5mL正己烷溶解，待過柱用。

（2）油脂類液體樣品：稱取均勻樣品1g(精確至0.1mg)于小燒杯中，加入20mL正己烷充分溶解，轉(zhuǎn)入125mL分液漏斗中，用30mL乙腈洗燒杯后也轉(zhuǎn)入分液漏斗中，其余處理同（1）進(jìn)行。

（3）不含油脂的固體或半固體樣品：稱取混勻試樣5.00g，置于50mL離心管中，加適量水（使總水量約10mL），加入20mL丙酮+正己烷混合液（2+3），均質(zhì)2mim，2500r/min離心3min，取上層清液經(jīng)裝有5g無水硫酸鈉的漏斗收集于梨形瓶中。再用20mL正己烷提取一次，合并提取液于40℃下蒸發(fā)近干（若含色素較多按（1）過柱凈化），用正己烷定容至2mL,待分析。

(4) 不含油脂的液體樣品（不含啤酒）：稱取均勻樣品20g，置于100mL具塞量筒中，加入10mL飽和食鹽水，再加入30mL正己烷劇烈振搖，靜止分層，上清液經(jīng)裝有5g無水硫酸鈉的漏斗收集于梨形瓶中，再用30mL正己烷重復(fù)提取一次，合并上清液，40℃下蒸發(fā)近干（若含色素較多按（1）過柱凈化），用正己烷定容至2mL,待分析。

（5）啤酒：稱樣20g，置于100mL具塞量筒中，加入10mL飽和食鹽水，再加入20mL乙腈、20mL正己烷劇烈振搖，靜止分層，上清液經(jīng)裝有5g無水硫酸鈉的漏斗收集于梨形瓶中，再用20mL 、20mL正己烷重復(fù)提取兩次，合并上清液，40℃下蒸發(fā)近干，用正己烷定容至2mL,待分析。

1.3.2．食品包裝材料：稱取經(jīng)粉碎混勻的試樣0.2g(精確至0.1mg)于三角瓶中，加入50mL正己烷，超聲提取30min，取上清液直接進(jìn)行分析（視含量作相應(yīng)的稀釋或濃縮）。

1.3.3凈化

(1)．層析柱的制備：玻璃層析柱底部放入少許脫脂棉，加入1cm高的無水硫酸鈉，然后依次干法裝入2g弗羅里硅土（層析用，200℃烘3h后備用），0.5gPSA（硅膠鍵合氨基吸附劑），上部再加入1cm高的無水硫酸鈉。使用前依次用10mL丙酮、10mL正己烷預(yù)淋洗。

(2)．凈化與濃縮：待淋洗液下降至無水硫酸鈉層時(shí)，將試樣提取液加入，再用5mL正己烷洗梨形瓶，洗液加入層析柱中，待其下降至無水硫酸鈉層時(shí)，用25mL丙酮+正己烷（2+98）混合液洗脫，將洗脫液收集于合適的容量瓶中，用正己烷定容，待分析。

1.4測(cè)定

1.4.1．色譜條件：

色譜柱：SunFire C18 ,15cm×4.6mm×5μm

波長:224nm

柱溫度:30℃

進(jìn)樣量:10μL

流速：1.0mL/min

流動(dòng)相：A-水；B-乙腈 ，梯度配比如表1。

Empower色譜工作站

檢測(cè)器:PDA檢測(cè)器

定量方法 ： 取10μL進(jìn)樣，根據(jù)保留時(shí)間定性，以峰面積計(jì)算，以外標(biāo)法定量。

1.4.3．結(jié)果計(jì)算

食品及食品包裝物中鄰苯二甲酸酯類化合物的含量（mg/kg）

式中：x―試樣中某種鄰苯二甲酸酯的含量（mg/kg）；

v―試樣定容體積（mL）；

m―試樣質(zhì)量（g）；

c1--試樣中某種鄰苯二甲酸酯峰面積對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品組分的濃度（mg/L）；

c0―空白試樣中某種鄰苯二甲酸酯峰面積對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品組分的濃度（mg/L）

2．實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論

2.1 樣品前處理：由于食品包裝材料及部分樣品中成分比較復(fù)雜，含有一定量的蛋白、脂肪和纖維等成分，處理不好將直接影響進(jìn)樣，對(duì)液相色譜柱損害較大，所以應(yīng)將樣品充分混勻提取后，過凈化柱，最后再經(jīng)高速離心，可較好的去除大分子雜質(zhì)物質(zhì)，得到進(jìn)樣溶液。

2.2 波長的選擇[3-4]:通過對(duì)幾種鄰苯二甲酸酯標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行210～400nm掃描,發(fā)現(xiàn)在220～240nm之間,吸收峰較強(qiáng),本實(shí)驗(yàn)選擇224nm作為方法的固定波長。

2.3標(biāo)準(zhǔn)及樣品：在本方法的實(shí)驗(yàn)條件下，七種鄰苯二甲酸酯類均得到了較好的分離，能夠滿足實(shí)驗(yàn)要求。

2.4 加標(biāo)回收率：向5份樣品中分別加入不同量的鄰苯二甲酸二丁酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，按本法處理、測(cè)定并計(jì)算回收率，結(jié)果見表2：

2.4 檢出限：本方法檢出限0.50mg/kg。

3.結(jié)論

實(shí)驗(yàn)表明，本方法所用乙酸銨流動(dòng)相濃度低，樣品進(jìn)樣量少，對(duì)分析柱的損害較小；樣品加標(biāo)回收率在78.00%～114.80%之間；線性系數(shù)R>0.9999；檢出限為0.50mg/kg；能夠滿足一般食品等樣品中鄰苯二甲酸酯類殘留量的分析要求。另外本方法具有簡便快速、準(zhǔn)確靈敏、成本低、可靠性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用前景廣泛。

參考文獻(xiàn)

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[2] 中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn), GB/T18932.5-2002.

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[7]GB/T5009-2003,食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法[M].中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn).

篇3

【摘要】 【目的】建立丹參藥材中水溶性成分丹酚酸類和脂溶性成分丹參酮類的超高效液相(UPLC)指紋圖譜方法，為丹參的質(zhì)量控制提供快速、科學(xué)的方法。【方法】以Acquity C18 BEH(21 mm×100 mm，17 μm)色譜柱，乙腈(A)體積分?jǐn)?shù)04%甲酸溶液(B)梯度洗脫，90%~50%A，0~10 min;75%A，15 min。檢測(cè)波長280 nm，柱溫30℃，流速05 mL/min。【結(jié)果】在15min內(nèi)得到丹參藥材水溶性和脂溶性成分的指紋圖譜，峰容量85。并采用液質(zhì)連用技術(shù)(HPLCDADESI/MSn) 鑒定了其中的20個(gè)特征峰。【結(jié)論】UPLC指紋圖譜方法具有靈敏、快速、簡便、準(zhǔn)確等特點(diǎn)，適合于丹參藥材及其制劑的指紋圖譜研究和質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 丹參/化學(xué);丹酚酸類/分析;丹參酮類/分析;指紋圖譜;色譜法，超高效液相;液質(zhì)連用

丹參是我國應(yīng)用最廣泛的中藥品種之一，臨床上有很好的療效，以丹參作為原料藥或君藥的單一或復(fù)方制劑種類繁多。丹參藥材指紋圖譜的研究主要集中在分別研究丹參的水溶性成分和脂溶性成分指紋圖譜[1-6]，這些方法基本均是將水溶性與脂溶性成分分開，分別建立指紋圖譜。作為一種藥材中的兩大類成分，若能將兩者結(jié)合起來，在同一張譜圖上得到表征，直觀地比較其化學(xué)成分的差異，將是一項(xiàng)十分有益的工作。目前也有一些報(bào)道采用高效液相色譜—二極管陣列檢測(cè)器(HPLCDAD)或高效液相色譜—質(zhì)譜檢測(cè)器(HPLCMS)連用的方法建立同時(shí)表征丹參藥材中水溶性與脂溶性成分的指紋圖譜，但是采用HPLC 技術(shù)，尚難以兼顧和保證兩類成分都具有良好的分離度，而且耗時(shí)較長。因此，本課題組嘗試采用快速色譜技術(shù)——超高效液相色譜(UPLC)建立丹參的指紋圖譜，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與試劑

11實(shí)驗(yàn)材料共收集了12個(gè)省、市(區(qū))的丹參商品藥材13份(表1)。藥材經(jīng)上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥研究所吳立宏博士鑒定為唇形科植物Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根莖。

12儀器與試藥Waters ACQUITY UPLCTM超高效液相色譜儀，包括Acquity Binary Solvent Module 二元可選四溶劑高壓梯度泵，含在線真空脫氣機(jī)、Acquity Sampler Module 低擴(kuò)散自動(dòng)進(jìn)樣器、Acquity TUV Detector高速紫外檢測(cè)器及Empower II色譜管理軟件(Milford，Boston，MA，USA)。MilliQ system超純水制備器(Millipore，Bedford，MA，USA)，KQ250DB數(shù)控超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)，BP211D型電子天平(Satorius Co.Ltd.，德國)。甲醇、乙醇、甲酸均為分析純(上海國藥集團(tuán)試劑有限公司)，乙腈為色譜純(Merck公司)，超純水為MilliQ處理水(Millipore Co.)。對(duì)照品丹參素鈉、原兒茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A、二氫丹參酮I、丹參酮I、隱丹參酮和丹參酮IIA均由上海中藥標(biāo)準(zhǔn)化研究中心提供。

2方法與結(jié)果

21 色譜條件與質(zhì)譜參數(shù)

211超高效液相色譜條件 Acquity C18 BEH(21 mm×100 mm，17 μm)色譜柱，乙腈(A)-體積分?jǐn)?shù)04%甲酸溶液(B)梯度洗脫，90%~50%A，0～10 min;75%A，15 min。檢測(cè)波長280 nm，柱溫30℃，流速05 mL/min，進(jìn)樣量2 μL，運(yùn)行時(shí)間15 min。表1不同產(chǎn)地丹參藥材

212超高效液相色譜—質(zhì)譜連用(LCMS)條件 流動(dòng)相為乙腈(A)—體積分?jǐn)?shù)04%甲酸溶液(B)，洗脫程序與上述條件相同。柱后分流，分流比為1∶50，進(jìn)樣量10 μL，柱溫30℃，電噴霧離子源(ESI)，源電壓-32 kV，負(fù)離子模式，霧化氣(GAS1)：233 Pa，簾氣(CUR)：16 psi，去簇電勢(shì)(DP)：-20V，聚焦電勢(shì)(FP)：-80 V，去簇電勢(shì)2(DP2)：-20 V。質(zhì)譜掃描質(zhì)量范圍質(zhì)荷比(m/z)100～800。

22樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備

221樣品溶液的制備取丹參粉末05 g(過40目篩)，精密稱定，精密加入體積分?jǐn)?shù)10%甲醇20 mL，浸泡30 min后，超聲提取30 min，放冷，3 000 r/min離心10 min，取上清液5 mL置25 mL量瓶中。殘?jiān)蛹状?0 mL，浸泡30 min后，超聲提取60 min，放冷，3 000 r/min離心10 min，取上清液將上述25 mL量瓶補(bǔ)足至刻度，即得。

222標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備取對(duì)照品丹參素鈉、原兒茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A、二氫丹參酮I、丹參酮I、隱丹參酮、丹參酮IIA適量，精密稱定，置同一容量瓶中，用甲醇溶解，制成含上述對(duì)照品102、126、113、106、137、118、762、100、114、122、119 μg/mL的溶液，作為對(duì)照品溶液。

23方法學(xué)考察

231精密度實(shí)驗(yàn)取同一份供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次測(cè)定，以丹酚酸B為參照峰，分別計(jì)算20個(gè)特征色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積sR值，均小于3%。說明儀器精密度良好。

232穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一份供試品溶液，分別于1、3、5、7、9、12、24、48 h進(jìn)樣測(cè)定，以丹酚酸B峰為參照峰，分別計(jì)算20個(gè)特征色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積sR值，均小于3%，說明樣品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

233重復(fù)性實(shí)驗(yàn)同一樣品粉末分別精密稱取5份，按照上述樣品制備方法制成供試品溶液，進(jìn)樣檢測(cè)。以丹酚酸B峰為參照峰，分別計(jì)算色譜中20個(gè)特征色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的sR值，均小于3%。說明該方法的重復(fù)性良好。

24結(jié)果與分析

241丹參高效液相指紋圖譜主要色譜峰的LCMS鑒定以13個(gè)產(chǎn)地丹參藥材的共有模式作為丹參藥材的指紋圖譜(圖1)。在該指紋圖譜中，20個(gè)色譜峰被選為特征峰。通過與對(duì)照品比較相對(duì)保留時(shí)間(tR)，紫外光譜(UV)和液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用(LCMS)質(zhì)譜數(shù)據(jù)(見表2)，結(jié)合對(duì)照品和文獻(xiàn)[7-12]對(duì)照，確定了19個(gè)色譜峰的歸屬為1號(hào)峰丹參素，2號(hào)峰原兒茶醛，3號(hào)峰咖啡酸，4號(hào)峰丹酚酸D，5號(hào)峰丹酚酸G，6號(hào)峰丹酚酸E，7號(hào)峰丹酚酸C，9號(hào)峰迷迭香酸，10號(hào)峰紫草酸，11號(hào)峰丹酚酸B，12號(hào)峰丹酚酸A，13號(hào)峰異丹參酮IIA，14號(hào)峰羥基丹參酮IIA，15號(hào)峰丹參新醌A，16號(hào)峰丹參酮IIB，17號(hào)峰二氫丹參酮I，18號(hào)峰隱丹參酮，19號(hào)峰丹參酮I，20號(hào)峰丹參酮IIA。11號(hào)峰(丹酚酸B)既是該指紋圖譜中的最強(qiáng)峰，又是有效成分。故以其為參照峰，計(jì)算各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間(tR)和相對(duì)峰面積(ARP)，結(jié)果見表3。表2丹參藥材中化學(xué)成分質(zhì)譜數(shù)據(jù)及鑒定表313批不同產(chǎn)地藥材中20個(gè)特征峰的相對(duì)峰面積值

242丹參藥材UPLC指紋圖譜分析采用上述已建立的指紋圖譜方法，對(duì)13批丹參藥材進(jìn)行指紋圖譜分析，得不同產(chǎn)地丹參藥材指紋圖譜，結(jié)果見圖2(彩圖頁第616頁)。為了說明丹參藥材之間的差異，引入總差異率pTD(%)的概念。差異率的定義是以每個(gè)特征指紋峰與相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)特征指紋峰的面積歸一化值間的差與標(biāo)準(zhǔn)特征指紋峰面積歸一化值的比值來表示兩者間的差異程度，總差異率則是將每個(gè)特征指紋峰的差異率求和即得。計(jì)算公式：

pTD=ΣniAs′-Ai′As′×n

其中，pTD 為總差異率，As′為標(biāo)準(zhǔn)特征峰面積歸一化值，Ai′為待比較藥材特征峰的面積歸一化值，n為特征峰個(gè)數(shù)。以pTD代表樣品圖譜與標(biāo)準(zhǔn)圖譜之間的相似度，當(dāng)pTD>1時(shí)，表明待測(cè)樣品與標(biāo)準(zhǔn)樣品之間差異較大，說明待測(cè)樣品有可能非欲鑒定品種。當(dāng)pTD

在本實(shí)驗(yàn)中，選取13批丹參藥材樣品的特征峰面積歸一化值的平均值作為標(biāo)準(zhǔn)特征峰面積歸一化值(表4)，結(jié)果顯示：(1)這些丹參藥材的化學(xué)成分的分布具有相似性，每批藥材被檢測(cè)的色譜峰的數(shù)目幾乎相等。(2)丹酚酸B的色譜峰占非常高的比例，最高達(dá)6313%，最低有3598%，說明該化合物是藥材中主要成分之一。(3)水溶性成分中，丹參素的含量均較低，脂溶性成分以5個(gè)色譜峰為主(平均占總脂溶性成分的80%以上)。(4)就每一個(gè)化學(xué)成分來說，藥材之間的相互差異比較大，13批藥材統(tǒng)計(jì)處理，所有成分的sR均在20%以上。(5) 根據(jù)pTD值來看，13個(gè)產(chǎn)地或收集地的丹參藥材pTD值均小于1，說明13個(gè)樣品與標(biāo)準(zhǔn)樣品之間的相似度均較高。表4不同產(chǎn)地13批丹參藥材指紋圖譜共有峰面積歸一化值

3討論

丹參中的兩大類化學(xué)成分極性差異較大，文獻(xiàn)報(bào)道顯示采用HPLC對(duì)這兩類成分進(jìn)行指紋圖譜分析，通常耗費(fèi)時(shí)間長而且色譜峰之間并不能達(dá)到理想的分離度，較難在一張圖譜上直觀地比較這兩種成分之間的差異[1-6]。本課題在大量實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上優(yōu)選出合適的UPLC色譜條件，建立丹參的指紋圖譜，只需運(yùn)行15min就可以將丹參的水溶性與脂溶性成分在同一張色譜圖上表征，且色譜峰之間有較好的分離度，達(dá)到了高分離度兼顧快速的目的，適合于大量復(fù)雜樣品的分析。

中藥的指紋圖譜研究中，HPLC法是最常用的分析技術(shù)，但是對(duì)于一些復(fù)雜體系如中藥的指紋圖譜研究，HPLC相對(duì)來說也是一種慢速技術(shù)，由于中藥中所含化學(xué)組分多，化學(xué)差異較大，為保證目標(biāo)組分的分離度，需要較長的運(yùn)行時(shí)間，有時(shí)也可得到理想的色譜參數(shù)如分離度、對(duì)稱因子和容量因子等。如何在得到理想的色譜參數(shù)的情況下，盡可能地縮短分析時(shí)間是科研人員比較關(guān)注的問題。UPLC的色譜柱采用了17μm的小顆粒填料，增加了分析的通量、靈敏度及色譜峰容量，能顯著提高分離的效率從而達(dá)到縮短分析時(shí)間的目的。

本實(shí)驗(yàn)中采用了UPLC技術(shù)建立丹參藥材的指紋圖譜。結(jié)果顯示，在15min中內(nèi)即可獲得丹參水溶性成分和脂溶性成分的指紋信息。丹參藥材的UPLC指紋圖譜與HPLC指紋圖譜比較，色譜峰的個(gè)數(shù)、整體分布和峰形基本一致，但增加了最難分離物質(zhì)對(duì)的分離度，增加了峰容量，減少了分析時(shí)間，說明UPLC比HPLC的分離能力強(qiáng)。

UPLC與HPLC具有相同的分離原理，因此UPLC色譜條件在HPLC條件的基礎(chǔ)上稍加優(yōu)化即可得到理想的色譜圖結(jié)果。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)上述UPLC的色譜條件獲得了丹參藥材及其制劑的指紋圖譜，且與HPLC色譜指紋圖譜一致的結(jié)果，因此，采用UPLC 指紋圖譜方法具有靈敏、快速、簡便、準(zhǔn)確等特點(diǎn)，適用于丹參藥材及其制劑的指紋圖譜研究和質(zhì)量控制，值得推廣和應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

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篇4

5 μm),柱溫30 ℃,甲醇-0.5%醋酸(體積比為35∶65)為流動(dòng)相,流速1.0 ml/min,檢測(cè)波長254 nm。結(jié)果 小薊中蘆丁的含量為0.580 8 mg/g。結(jié)論 經(jīng)過系統(tǒng)的方法學(xué)考察,該方法具有簡便、專屬、穩(wěn)定、可重復(fù)的特點(diǎn),可用于小薊中蘆丁的含量測(cè)定。

【關(guān)鍵詞】  小薊；蘆丁；含量測(cè)定；高效液相色譜法

     abstract：objective  hplc was used to establish a method for determination of rutin in herba crisii. methods lichrospher c18 column (4.6 mm×200 mm, 5 μm) was used with methoanol-acetic acid (35∶65) as mobile phase, flow rate being 1.0 ml/min, column temperature at 30 ℃, detection wavelength at 254 nm. results the content of rutin in herba crisii was 0.580 8 mg/g. conclusions the method is proved to be simple, rapid, and accurate. it can be applied to content determination of rutin in herba crisii.

    key words：cirsium setosum (willd.) mb.；rutin；content determination；hplc

小薊為菊科植物小薊[cirsium setosum(willd.)mb.]的干燥地上部分或根,具有涼血止血、祛瘀消腫的功能,可用于治療衄血、吐血、尿血、便血、崩漏、外傷出血、癰腫瘡毒等。小薊中所含有機(jī)酸中有蘆丁、咖啡酸等,文獻(xiàn)記載蘆丁、咖啡酸為其止血活性成分。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法測(cè)定小薊中蘆丁的含量,方法穩(wěn)定、快速、重現(xiàn)性好。

1  實(shí)驗(yàn)材料

1.1  儀器

    lc-10at高效液相色譜儀,spd-10a檢測(cè)器,class-lc10色譜工作站；sartorius bp211d電子天平；shimadzu ay220電子天平；kq-500型超聲波清洗器。

1.2  試劑與藥物

   

甲醇為色譜純,水為重蒸餾水,其它試劑均為分析純。蘆丁購自中國藥品生物制品檢定所(批號(hào)0080-9705)。小薊藥材分別購自江蘇(南京醫(yī)藥股份有限公司,批號(hào)020313)、安徽(安徽省亳州市永剛飲片有限公司,批號(hào)031205)、上海(上海華宇藥業(yè)有限公司,批號(hào)040802),經(jīng)本院藥用鑒定教研室陳建偉教授鑒定為小薊正品[cirsium setosum(willd.)mb.]。

1.3  色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

1.3.1  色譜條件的選擇 

色譜柱：lichrospher c18(4.6 mm×200 mm,5 μm),柱溫30 ℃,流動(dòng)相：甲醇-0.5%醋酸(體積比為35∶65),流速1.0 ml/min；檢測(cè)波長：254 nm。對(duì)照品、樣品的高效液相色譜圖見圖1。

1.3.2  提取溶劑的考察

 

取本品2份,各1.0 g,精密稱定,置2個(gè)50 ml具塞錐形瓶中,分別加入50 ml甲醇和50 ml 40%甲醇,稱重,浸置1 h,超聲處理(功率500 w,頻率50 khz)40 min,補(bǔ)足稱重,濾過；微孔濾膜(0.45 μm)濾過,即得。分別吸取上述2份溶液各10 μl,注入高效液相色譜儀,按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。結(jié)果表明,以體積分?jǐn)?shù)為40%甲醇為提取溶劑效果較好。

2  方法與結(jié)果

2.1  溶液制備

2.1.1  對(duì)照品溶液的制備 

精密稱取蘆丁對(duì)照品0.98 mg,置25 ml容量瓶中,加40%甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得。

2.1.2  供試品溶液的制備 

各取3個(gè)產(chǎn)地藥材粉末(過2號(hào)篩) 1.0 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,分別加入50 ml 40%甲醇,稱重,浸置1 h,超聲處理(功率500 w,頻率50 khz)40 min,補(bǔ)足稱重,過濾,微孔濾膜(0.45 μm)濾過,即得。

2.2  線性關(guān)系考察

   

分別精密吸取對(duì)照品溶液1、2、3、4、5 ml稀釋10 ml,依次精密吸取稀釋的對(duì)照品溶液10 μl注入液相色譜儀,測(cè)定其峰面積值,以蘆丁的濃度(g/l)為橫坐標(biāo),峰面積積分值為縱坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸。得回歸方程為：y＝25 845 255x－28 716, r＝0.999 6。結(jié)果表明,蘆丁在0.003 92～0.019 6 g/l范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.3  精密度試驗(yàn)

   

吸取3號(hào)對(duì)照品溶液10 μl,重復(fù)進(jìn)樣5次,測(cè)定其峰面積積分值,rsd＝1.503%。表明本法精密度較好。

2.4  穩(wěn)定性試驗(yàn)

   

分別于0、1、2、4、6、12、24 h精密吸取同一份供試品溶液20 μl進(jìn)樣,測(cè)定其峰面積積分值,計(jì)算6 h內(nèi)rsd＝1.972%。結(jié)果表明,供試品溶液在6 h內(nèi)常溫保存基本穩(wěn)定。

2.5  重復(fù)性試驗(yàn)

   

取同一批號(hào)小薊樣品共5份,每份1.0 g,精密稱定,按供試品溶液的制備方法平行制備5份,分別進(jìn)樣10 μl,每份測(cè)定2次,平均含量為0.703 5 mg/g,rsd＝1.129%。

2.6  回收率試驗(yàn)

   

精密稱取小薊樣品6份,各1.0 g,分別精密加入蘆丁對(duì)照品適量,按供試品溶液的制備方法制備,每次進(jìn)樣10 μl,每份測(cè)定2次,取平均值,計(jì)算加樣回收率,平均加樣回收率為98.70%,rsd＝2.88%。見表1。表1  蘆丁加樣回收率測(cè)定結(jié)果(略)

  

2.7  樣品測(cè)定

    取3個(gè)產(chǎn)地的小薊樣品,按供試品溶液的制備方法制備,分別精密吸取對(duì)照品溶液和樣品溶液,注入液相色譜儀,測(cè)量峰面積,按外標(biāo)法計(jì)算,結(jié)果總平均值為0.580 8 mg/g。見表2。表2  小薊中蘆丁含量測(cè)定結(jié)果(略)

3  小結(jié)

   

對(duì)于小薊中蘆丁的含量測(cè)定,有人曾采用聚酰胺薄層掃描法[1],此法受薄膜表面光潔度、均勻度、厚薄等因素影響而不太穩(wěn)定,張氏等[2]采用hplc法測(cè)定苦蕎麥中蘆丁含量。查閱文獻(xiàn),還未曾有人用過hplc法測(cè)定小薊中蘆丁含量。本實(shí)驗(yàn)采用hplc法測(cè)定蘆丁含量,具有簡便快速、結(jié)果準(zhǔn)確可靠的特點(diǎn),可以作為小薊藥材及飲片質(zhì)量控制方法。

【參考文獻(xiàn)】

 

篇5

【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法 刺五加 藥品檢測(cè)

中圖分類號(hào)：R927 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B 文章編號(hào)：1005-0515（2012）1-343-02

高效液相色譜法（high perfornance liquid chromatography）是被納入我國藥典的主要色譜分析法其固定相均勻規(guī)則，分辨率高，傳質(zhì)阻抗小，多用于藥品檢驗(yàn)，尤其是其對(duì)中藥類成分的定性和定量檢測(cè)被廣泛應(yīng)用于中藥領(lǐng)域[1]，本文采用高效液相色譜法對(duì)刺五加的主要活性成分刺五加甙B的含量進(jìn)行了檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)告如下：

1 儀器與材料

SPD10A型紫外檢測(cè)儀，四元泵，高速離心機(jī)，電子秤量分析天平（上海市化學(xué)儀器廠），HP1100型HPLC色譜儀。

用于檢測(cè)的刺五加產(chǎn)地為吉林省長白山，其對(duì)照品刺五加甙B由中國生物藥品制品檢定所提供，產(chǎn)品編號(hào)為111498-201004。

以乙腈為色譜純（江蘇化學(xué)制劑廠），水為重蒸水，甲醇（山東省禹王藥物制劑有限公司），0.1%磷酸水溶液為分析純（中國藥科大學(xué)制藥廠）。

2 方法與結(jié)果

2.1 HPLC色譜條件 以Kromasil ODS為色譜柱（4.6mm×250mm），以濃度0.1%磷酸水溶液/乙腈（80/20）為流動(dòng)相，波長為230nm，在25℃，流速為0.8mL/min的條件下進(jìn)行HPLC檢測(cè)。

2.2 配制待測(cè)樣品溶液 將待測(cè)的刺五加（吉林長白山）洗凈，取其莖部和根部組織，切成長約1cm的薄皮，置入干燥箱行高溫烘干（75℃），待失去水分后碾成粉末狀，使用電子分析天平精確秤量莖部和根部的樣品各0.5g，加濃度為50%的甲醇溶液20mL于100mL燒杯，連同樣品一起混合，經(jīng)1h回流提取，取得樣品濾液由50%濃度甲醇進(jìn)行溶解轉(zhuǎn)移，并用25mL容量瓶進(jìn)行定容，取適量濾液進(jìn)行高速離心機(jī)離心（12000r/min）,用時(shí)為5min，待靜置后，其上清液即為待測(cè)樣品溶液。

2.3 配制對(duì)照溶液 使用電子分析天平精確秤量刺五加甙B（中國生物藥品制品檢定所）5.65mg，加濃度為50%甲醇溶液于5mL容量瓶中，與對(duì)照品混合溶解進(jìn)行定容，制成對(duì)照儲(chǔ)備溶液，取儲(chǔ)備溶液1mL于25mL容量瓶進(jìn)行稀釋，加濃度為50%甲醇溶液至刻度，得到刺五加甙B濃度為44.31μg/mL的對(duì)照品溶液，放入冰箱5℃儲(chǔ)存待用。

2.4 HPLC檢測(cè)

2.4.1 HPLC色譜圖分析

在波長為230nm，柱溫為25℃，流速為0.8mL/min的條件下進(jìn)行HPLC檢測(cè)，可見刺五加甙B對(duì)照品的保留時(shí)間為11.7min，并在色譜圖上表現(xiàn)出很好的與其他成分進(jìn)行了分離。

2.4.2 HPLC線性關(guān)系分析

取制備好的刺五加甙B對(duì)照品溶液，分別稀釋配制成濃度為44.31μg/mL，35.55μg/mL，

26.78μg/mL，14.50μg/mL，4.28μg/mL，2.98μg/mL，對(duì)HPLC色譜儀加樣20μL進(jìn)行檢測(cè)，記錄不同濃度對(duì)照品溶液色譜圖，以峰值面積為縱軸，樣品濃度為橫軸，制得PHLC標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，分析其線性關(guān)系，計(jì)算刺五加甙B的線性方程為y=62.337x+2.4316，濃度范圍值為2.98μg/mL～44.31μg/mL ，r為0.9997。

2.4.3 測(cè)試加樣回收率

用電子分析天平稱取制備的待測(cè)刺五加粉末0.5g，稱取5次后，均混入對(duì)照品溶液，使用HPLC色譜儀進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)得刺五加甙B的5次測(cè)樣的回收率平均值為99.6%，測(cè)得其RSD為1.9%。

2.4.4 HPLC檢測(cè)刺五加甙B穩(wěn)定性

采用HPLC色譜儀加樣測(cè)試待測(cè)樣品液，濃度為2.98μg/mL，加樣量每次為20μL，共加樣5次，每次間隔2h，測(cè)算樣品液的峰值面積和刺五加甙B的RSD，經(jīng)HPLC測(cè)得其RSD為1.7%，在8h內(nèi)樣品具有很好的穩(wěn)定性。

2.4.5 HPLC測(cè)定的重現(xiàn)性

電子分析天平稱量樣品粉末0.5g，稱樣5次后，再次制備待測(cè)樣品溶液，重復(fù)測(cè)定刺五加甙B的RSD值，實(shí)驗(yàn)測(cè)得其樣品的RSD值為1.8%，證明HPLC檢測(cè)樣品含量有很好的重現(xiàn)性。

2.5 待測(cè)樣品的刺五加甙B測(cè)定

采用HPLC對(duì)制成的待測(cè)根部樣品和莖部樣品進(jìn)行刺五加甙B含量的測(cè)定，共進(jìn)行3次加樣，具體數(shù)據(jù)見表1。

表1 吉林長白山刺五加根部和莖部的刺五加甙B含量

3 討論

據(jù)《中華國家藥典》有關(guān)記載刺五加的主要活性成分是刺五加甙B和刺五加甙E[2]，該兩種成分主要存儲(chǔ)于刺五加的根部和莖部[3]，本文通過對(duì)吉林長白山的刺五加樣品的測(cè)定證明其莖部的刺五加甙B含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于根部，采用高效液相色譜法以乙腈為色譜純（江蘇化學(xué)制劑廠），水為重蒸水，甲醇（山東省禹王藥物制劑有限公司），0.1%磷酸水溶液為分析純（中國藥科大學(xué)制藥廠），測(cè)得在濃度為2.98μg/mL～44.31μg/mL的范圍內(nèi)，其峰值面積分值RSD為為1.9%，回收率為99.6%，r為0.9997，這表明高效液相色譜法在測(cè)定刺五加甙B的含量上準(zhǔn)確有效，重現(xiàn)性好，穩(wěn)定性高。

參考文獻(xiàn)

[1] 孫會(huì)敏，田頌九，高效液相色譜法簡介及其在藥品檢驗(yàn)中的應(yīng)用[J]，齊魯藥事，2011，30（1）：38―42.

篇6

【關(guān)鍵詞】 芹菜籽；，，3-正丁基苯酞；，，高效液相色譜法

摘要：目的高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定芹菜籽中3-正丁基苯酞的含量。方法采用YMC ODS C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相為乙腈酯酸鈉（45∶55），酯酸鈉0.05 mol?L-1，冰酯酸調(diào)節(jié)pH4.6；檢測(cè)波長為228 nm；流速為1.0 ml?min-1；柱溫：40℃。結(jié)果3-正丁基苯酞在0.044 1 ~0.161 7μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r= 0.999 7，方法的回收率為98.19%，RSD為1.38%（n=5）。結(jié)論 該方法能夠準(zhǔn)確可靠地測(cè)定3-正丁基苯酞的含量，可作為芹菜籽的質(zhì)量控制指標(biāo)之一。

關(guān)鍵詞：芹菜籽； 3-正丁基苯酞； 高效液相色譜法

Determination of 3-n-Butylphthalide in Celery Seed by HPLC

Abstract：ObjectiveTo establish a method for determining 3-n-butylphthalide in Celery Seed by HPLC.MethodsYMC C18 column(250 mm×4.6 mm，5 μm) was used. The mobile phase consisted of acetonitrile-sodium acetate(45∶55) with flow rate 1.0 ml?min-1. The detection wavelength was set at 228 nm and the column temperature was 40℃. ResultsThe linear range of 3-n-butylphthalide was at the range of 0.044 1 ~0.161 7 μg (r=0.999 7，n=5) ，the average recovery was 98.19%，and RSD was 1.38%(n=5). ConclusionThe method is rapid， highly accurate and precise. It can be used to control the quality of Celery Seed.

Key words：Celery Seed; 3-n-butylphthalide; HPLC

芹菜籽是傘形科旱芹屬植物芹菜Apium graveolens L.的種子。在我國維吾爾醫(yī)藥中主要用于治療高血壓病、關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、氣滯性子宮炎、腹水、腎臟等疾病［1］。3正丁基苯酞（3nbutylphthalide）是從芹菜籽中提取的藥理活性成分，目前已經(jīng)被開發(fā)成腦血管病領(lǐng)域的國家一類新藥，具有抗腦缺血、減輕腦損傷等作用［2，3］。因此有必要對(duì)芹菜籽征性成分進(jìn)行定性、定量研究。本實(shí)驗(yàn)以HPLC法測(cè)定芹菜籽中3-正丁基苯酞，為科學(xué)評(píng)價(jià)芹菜籽的藥材質(zhì)量，制定規(guī)范、合理、可行的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

Waters公司MICROMASS ZQ液質(zhì)聯(lián)用儀（Waters 996型二極管陣列檢測(cè)器，Waters 2690液相分離系統(tǒng)）； METTLER TOLEDO DELTA 320 pH計(jì)。乙腈（色譜純，USA Tedia公司）；Triton X-100（Sigma公司）；三水乙酸鈉（C2H3NaO2?3H2O，優(yōu)級(jí)純，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所）；冰乙酸（分析純，北京化工廠）。 3正丁基苯酞對(duì)照品（自制，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99%）。芹菜籽經(jīng)中科院新疆生態(tài)與地理研究所克力木副研究員鑒定。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件YMC C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈酯酸鈉（V∶V=45∶55）；酯酸鈉0.05 mol?L-1，冰酯酸調(diào)節(jié)pH 4.6；體積流量1.0 ml?min-1；檢測(cè)波長228 nm；柱溫40℃。

2.2 對(duì)照品溶液的制備取標(biāo)準(zhǔn)品14.7 mg，置于10 ml容量瓶中，加入1 ml 10% Triton X-100振搖使溶解后用流動(dòng)相定容，搖勻，作為貯備液；移取貯備液1 ml置于100 ml容量瓶中，用流動(dòng)相定容，搖勻，制成3正丁基苯酞質(zhì)量濃度為0.014 7 mg/ml的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備稱取干燥的芹菜籽10 g，分別用100，80 ml和60 ml的70%乙醇回流3，2 h和1 h，總共提取3次，合并濾液，濃縮得到的粗提物水分散后用8倍體積的石油醚萃取5次，得到石油醚萃取的樣品。取38.7 mg樣品， 置于25 ml容量瓶中，加入2 ml 10% Triton X-100振搖使溶解后用流動(dòng)相定容，搖勻，作為貯備液；移取貯備液1 ml置于10 ml容量瓶中，用流動(dòng)相定容，搖勻，作為供試品的溶液（0.155 mg/ml）。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密吸取對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣3，5，7，9，11 μl，記錄各樣品的色譜圖。以對(duì)照品溶液進(jìn)樣量C為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明3-正丁基苯酞在0.044 1 ~0.161 7μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程：A =21 734 000 C + 23 475，r= 0.999 7。空白對(duì)照、對(duì)照品和供試品的色譜圖分別見圖1~3。

圖1 空白對(duì)照色譜圖（略）

圖2 對(duì)照品色譜圖（略）

圖3 供試品色譜圖（略）

2.5 精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取0.014 7 mg/ml 3正丁基苯酞對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，5μl/次，按上述色譜條件測(cè)定，峰面積分別為1 647 597，1 626 279，1 645 968，1 665 844，1 639 422，1 614 002，RSD=1.10%，表明儀器的精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取供試品溶液（0.155 mg/ml）5 μl，分別在0，2，4，6，8，10 h進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定，峰面積分別為1 568 873，1 622 012，1 588 530，1 615 787，1 600 297，1 622 424，RSD為1.33%，表明供試品溶液在10 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)取同一批的樣品5份，按上述樣品溶液的制備操作和色譜條件測(cè)定，RSD=0.77%（n=5）。結(jié)果顯示，該方法具有較好的重現(xiàn)性。

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn)取已知含量的樣品，精密加入一定量的對(duì)照品，平行操作5份，按上述條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)（略）

2.9 樣品的測(cè)定按2.3方法制備樣品，按2.1色譜條件對(duì)3批樣品進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果見表2。

表2 樣品測(cè)定結(jié)果（略）

3 討論

3.1 本實(shí)驗(yàn)考察冷浸和熱提萃取處理兩種提取方式，結(jié)果采用乙醇提取石油醚萃取得到的含量比冷浸處理得到的含量高，提取更完全，故采用熱提萃取法。

3.2 對(duì)照品和供試品均為油狀物，所以加入表面活性劑Triton X-100促其溶解，為保證基線平穩(wěn)，Triton X-100的加入量控制在1%。

參考文獻(xiàn)

［1］ 新疆維吾爾自治區(qū)衛(wèi)生廳.維吾爾藥材標(biāo)準(zhǔn)（上冊(cè)）［S］.1993：8.

篇7

關(guān)鍵詞：超高液相色譜技術(shù)；藥物分析；應(yīng)用研究

1 概述

超高效液相色譜技術(shù)在藥物分析領(lǐng)域具有分析速度快、靈敏度高、藥品的分離效率高、適用范圍更廣等特點(diǎn)，其測(cè)試全自動(dòng)化，藥品成分容易吸收且處理方法簡單的特點(diǎn)，使得它在市場中占有一定的主導(dǎo)地位。隨著社會(huì)的不斷發(fā)展以及不斷更新的科學(xué)技術(shù)，超高效液相色譜儀逐漸出現(xiàn)在人們的視野中。它擁有高效液相色譜技術(shù)的所有優(yōu)勢(shì)，而且還具有超高速、超高靈敏度和極高分辨率的性能，被人們稱為現(xiàn)代液相色譜法的另一個(gè)發(fā)展方向。研究表明，超高液相色譜技術(shù)在藥物分析領(lǐng)域的能力已經(jīng)令人信服，其卓越的性能也已被證明。在文章中，筆者從超高液相色譜技術(shù)的技術(shù)點(diǎn)本質(zhì)出發(fā)，對(duì)什么是超高效液相色譜法，超高效液相色譜技術(shù)有哪些優(yōu)勢(shì)和缺點(diǎn)進(jìn)行描述，對(duì)超高效液相色譜法在藥物分析的應(yīng)用做出了詳細(xì)的介紹。

2 什么是超高效液相色譜技術(shù)

2.1 超高效液相色譜技術(shù)的原理

超高液相色譜技術(shù)是以范德米特方程作為理論基礎(chǔ)，和高效液相色譜法的原理相同。具體公式為HETP=Ad P+B/v+Cd P2v，式中HETP代表理論塔板高度，A是渦流擴(kuò)散系數(shù)，dP代表填料顆粒的尺寸半徑，B表示分子的擴(kuò)散系數(shù)，C表示傳質(zhì)因子，v表示移動(dòng)相線速度。該公式的含義是：顆粒的粒徑越小，色譜的柱效率將更高。顆粒的粒徑不同，其最佳色譜的效果就不一樣；粒子的粒徑越小，最高柱流速將會(huì)向流速大的方向移動(dòng)；顆粒尺寸越小，其線速度的范圍就更廣泛。由此可以得出結(jié)論：降低粒徑的尺寸大小，不但可以提高色譜柱的效率，而且還可以提高速度。也就是說色譜分辨率同填料顆粒的粒徑大小成反比關(guān)系。經(jīng)過有關(guān)人員的研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)填料顆粒的粒徑小于2N，m時(shí)，理論塔板高度的最低范圍將被擴(kuò)大，即小于2N，m的粒徑相比于較大的微粒能夠獲得更大的流速范圍，色譜柱的效果也會(huì)增加，可以在沒有損失的前提下增加微粒的流速和粒子的分析速度。

2.2 超高效液相色譜技術(shù)的原理的優(yōu)點(diǎn)

超高效液相色譜的分離原理與高效液相色譜技術(shù)相同，但相對(duì)來說，超高效液相色譜技術(shù)的性能較好且具有更高的速度、靈敏度和分辨率。超高效液相色譜技術(shù)在線速度較大或者高壓下環(huán)境下依然可以實(shí)現(xiàn)良好的效果，對(duì)樣品進(jìn)行高效的分離。超高效液相色譜技術(shù)使用的粒徑為1.7N，m，它比粒徑為5N，m的色譜柱提高了三倍的長度。與此同時(shí)，其柱不變，就可以使得分析是在提高3倍流速下進(jìn)行的，大大縮短了分析時(shí)間。超高效液相色譜技術(shù)主要是通過減少顆粒的粒徑的方法，讓顆粒的色譜峰變窄，從而可以提高檢測(cè)的靈敏度。超高效液相色譜法與高效液相色譜法相比大大地提高了分辨率，更有利于對(duì)雜質(zhì)樣品進(jìn)行離子化，有助于對(duì)基質(zhì)雜質(zhì)進(jìn)行分離，提高檢測(cè)靈敏度。

2.3 超高效液相色譜技術(shù)的原理的缺點(diǎn)

超高效液相色譜技術(shù)雖然具有很多優(yōu)勢(shì)，但在實(shí)際的應(yīng)用過程中，也仍然存在一些問題和不足。比如說：超高效液相色譜儀器在性能方面雖然要高于高效液相色譜儀器，但是價(jià)格也會(huì)隨著大大地增長，這就會(huì)限制該儀器和技術(shù)的推廣，不能達(dá)到普及應(yīng)用的目的；由于超高效液相色譜法技術(shù)對(duì)藥物分析具有較高的要求，這就使得加工精度很難把握。生產(chǎn)該機(jī)器的廠家少，進(jìn)樣的數(shù)量也少，而且還使用半環(huán)的方式注入，這就會(huì)導(dǎo)致其峰值面積的重復(fù)性較差。與此同時(shí)，因?yàn)樯V的顆粒半徑非常細(xì)微，為了避免色譜柱被樣品堵塞，對(duì)樣品的要求也比較嚴(yán)格。

3 超高效液相色譜技術(shù)在藥物分析領(lǐng)域的應(yīng)用

3.1 制劑藥物分析

在進(jìn)行藥物分析時(shí)，往往樣品的含量非常少，在進(jìn)行分析分離時(shí)非常困難，所浪費(fèi)的時(shí)間也比較多。因此，我們迫切需要一個(gè)能夠提高分析速度，提升分離效率的技術(shù)，其應(yīng)該具有靈敏度高、精確度高的特點(diǎn)。超高效液相色譜技術(shù)在解決這些問題時(shí)，就提供了強(qiáng)有力的支持，逐步顯示出其具有良好的發(fā)展前景。對(duì)A1z、AzZ和A3z這三種化合物的研究分析中，在保證分析效果相同的前提下，使用超高效液相色譜技術(shù)可以大大地縮短分析時(shí)間，其精度和靈敏度也相比于其他技術(shù)要好很多。超高效液相色譜技術(shù)適合用于常規(guī)藥物的分析，使用混合模式的固相萃取和超高效液相色譜技術(shù)同時(shí)使用測(cè)定相應(yīng)的藥物成分。其最終的分析結(jié)果可以達(dá)到美國食品和藥物管理局在精度和準(zhǔn)確度方面的要求。

3.2 生物基質(zhì)中藥物的分析

藥物代謝涉及到藥物人體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄，包括對(duì)藥物及其在復(fù)雜基質(zhì)中的代謝物的分離，以及對(duì)痕量分析的結(jié)構(gòu)鑒定。目前，生物體的體液系統(tǒng)中含有非常多的相對(duì)分子質(zhì)量相同、保留時(shí)間相同的復(fù)雜成分。與此同時(shí)，藥物正在向著低劑量的方向發(fā)展，這就會(huì)給現(xiàn)有技術(shù)提出難度，使得常規(guī)的分離技術(shù)和痕量成分的檢測(cè)難以滿足在精度方面的要求。能否在許多具有相同保留時(shí)間的干擾組分影響下，快速識(shí)別出代謝產(chǎn)物依賴于高效的色譜分離和敏感度極高的分辨質(zhì)譜技術(shù)。超高效液相色譜技術(shù)在藥物代謝產(chǎn)物分析中，就充分體現(xiàn)了高敏感性和專屬性特性，并且可以在同一時(shí)間段內(nèi)對(duì)多種組分濃度進(jìn)行測(cè)定，可以達(dá)到樣品分析測(cè)量高效率的要求。

3.3 中藥質(zhì)量控制

中藥中含有多種復(fù)雜結(jié)構(gòu)的化學(xué)成分，使用超高效液相色譜技術(shù)進(jìn)行分析時(shí)，能夠迅速地檢測(cè)多種化學(xué)成分，具有速度快、靈敏度高的特點(diǎn)，因此在中國傳統(tǒng)醫(yī)藥化工分析和質(zhì)量控制中具有良好的應(yīng)用前景。通過對(duì)比超高效液相色譜技術(shù)和高效液相色譜技術(shù)對(duì)羊藿、冬蟲夏草、三七、丹參等中藥的藥物分析結(jié)果，超高效液相色譜技術(shù)不僅體現(xiàn)在速度更快的分析時(shí)間，更重要的是超高效液相色譜技術(shù)可以使得小顆粒填料后的分離度也得到了提高。使用超高效液相色譜技術(shù)測(cè)定羊藿黃酮類成分時(shí)，與高效液相色譜技術(shù)相比分離程度得到了大大的改善。在中國中醫(yī)藥的多種組分分析過程中，其化合物種類多、數(shù)量不明確、含量差異也比較大的特點(diǎn)一直是技術(shù)分析的瓶頸問題。現(xiàn)在將超高效液相色譜技術(shù)引入多組分的中國醫(yī)藥分析中，可以建立一個(gè)更有利的分析平臺(tái)。

4 結(jié)束語

超高效液相色譜技術(shù)是近年來一種新型的技術(shù)。在近幾年的使用過程中，人們發(fā)現(xiàn)超高效液相色譜技術(shù)在藥物分析領(lǐng)域正在發(fā)揮著越來越大的優(yōu)勢(shì)，廣泛開闊了現(xiàn)代色譜技術(shù)的應(yīng)用前景。其注射體積小、耗電少、快速分離的特點(diǎn)被廣泛應(yīng)用于天然和合成藥物組合物的分析技術(shù)、藥物的代謝產(chǎn)物分析等，是一種更有效、更準(zhǔn)確、更精細(xì)的一種分析技術(shù)。盡管超高效液相色譜的儀器成本高，樣本量也較少，容易出現(xiàn)色柱堵塞，對(duì)使用技術(shù)的要求也更高等缺點(diǎn)和不足，但是隨著技術(shù)的發(fā)展和填料注入技術(shù)的不斷改進(jìn)，藥物分析的方法也在逐步變化中。我們相信超高效液相色譜技術(shù)將會(huì)在藥物的分析中扮演越來越重要的角色，不斷推動(dòng)藥物分析的發(fā)展，更好地造福人類。

參考文獻(xiàn)

[1]印成霞.超高效液相色譜法在藥物分析中的應(yīng)用研究[J].中國實(shí)用醫(yī)藥，2013，23.

篇8

【關(guān)鍵詞】 靛玉紅； 青黛； 高效液相色譜法

Abstract:ObjectiveTo establish the method of determination of indirubin from Indigo Naturalis. Methods HPLC was employed， which chromatographic column was spherisorb C18 (4.6 mm×200 mm)， mobile phase was methanol0.1 mol/L of ammonium acetate， flow rate was 1 ml/min， detection wavelength was 280 nm and column temperature was 35℃. ResultsA good linear correlationship was obtained when indirubin content ranged from 5.98 μg/ml to 59.8 μg/ml(r=0.999 5). Average recovery was 99.87%， RSD was 1.31%. ConclusionThis method is simple， rapid， reliable and suitable for assay of indirubin from Indigo Naturalis.

Key words: Indirubin; Indigo Naturalis;

HPLC

青黛為十字花科植物菘藍(lán)Isatis indigotica 、爵床科植物馬藍(lán)Baphicacanthus cusia 、豆科植物木藍(lán)Indigoferas tinctoria 、蓼科植物蓼藍(lán)Polygonum tinctorium等的葉或莖葉，經(jīng)加工制得的干燥藍(lán)色粉末或團(tuán)塊，是常用中藥。近年來研究發(fā)現(xiàn)， 靛玉紅是青黛中的抗癌有效成分，主要抑制白血病細(xì)胞的DNA合成。為了有效控制其質(zhì)量，制定科學(xué)的質(zhì)量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，確保療效，本文采用高效液相色譜法測(cè)定其活性成分靛玉紅的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器Shimadzu HPLC儀 ，LC10ATVP溶液輸送泵， SPD10AVP紫外可見檢測(cè)器，SLC10AVP控制器，CTO10ASVP控溫箱，LcSolution工作站。

1.2 試藥青黛(福建仙游)，靛玉紅對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，717200204，供定量測(cè)定用)，甲醇為色譜醇；乙酸銨、醋酸乙酯為AR）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件色譜柱為Spherisorb C18 (4.6 mm×200 mm)；流動(dòng)相為甲醇0.1 mol/L乙酸銨(65∶35)；流速為1 ml/min；檢測(cè)波長為280 nm；柱壓為5.4 MPa；柱溫35℃ ，Shimadzu SPD 10AV 紫外檢測(cè)器。進(jìn)樣量10μl。理論板數(shù)按靛玉紅色譜峰計(jì)算不低于2200，靛玉紅色譜峰與相鄰峰之間的分離度均大于1.5。

2.2 對(duì)照品溶液的制備精密稱取靛玉紅標(biāo)準(zhǔn)品2.99 mg， 加適量醋酸乙酯超聲溶解，并定容于25 ml容量瓶中，配制成濃度為119.6 μg/ml的對(duì)照液。

2.3 供試品溶液的制備準(zhǔn)確稱量青黛1.3 g，置索氏提取器中，用醋酸乙酯提取，然后移到50 ml容量瓶中，用醋酸乙酯定容，混勻后用微孔濾膜過濾，作為供試品溶液。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密吸取對(duì)照品溶液0.5，1，2，3，4，5 mI 置于l0 ml量瓶中，用醋酸乙酯定容，搖勻并用微孔濾膜濾過。依次進(jìn)樣10 μl，按上述色譜條件操作，以峰面積分值為縱坐標(biāo)，相應(yīng)濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)樣線性回歸，得回歸方程y=4 786.5x +31 185(r=0.999 5)，結(jié)果表明靛玉紅在5.98～59.8 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn)取同一靛玉紅對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，10 μl/次，根據(jù)峰面積計(jì)RSD=0.5%。

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一樣品溶液分別在制備后12，24，36，48，60，72，84，96 h分別測(cè)定1次峰面積，結(jié)果RSD=0.8%，表明樣品至少在4 d內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)取同一批樣品(批號(hào)20060401)3份，按上述色譜柱條件測(cè)定其含量，結(jié)果平均含量為3.0 %，RSD＝0.9% 。

2.8 加樣回收實(shí)驗(yàn)在已知含量的樣品(同批號(hào)20060401)供試液中，加人不同量的靛玉紅對(duì)照品，按照含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果見表1。表1 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）

2.9 樣品測(cè)定

按上述方法，對(duì)樣品中靛玉紅的含量進(jìn)行測(cè)定。靛玉紅對(duì)照品溶液及批號(hào)20060601樣品的HPLC見圖1～2，測(cè)定結(jié)果見表2。表2 樣品測(cè)定結(jié)果（略）

3 討論

流動(dòng)相的選擇：曾實(shí)驗(yàn)多種流動(dòng)相，結(jié)果發(fā)現(xiàn)以甲醇－0.1 mol/L乙酸銨(65∶35)，樣品中靛玉紅與其它成分可達(dá)到基線分離，空白對(duì)照液亦無干擾。

溶劑的選擇：曾選用氯仿［1］和醋酸乙酯作溶劑實(shí)驗(yàn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)以醋酸乙酯作溶劑靛玉紅與靛藍(lán)可完全分離，分離效果與峰形均好。

本文用HPLC法測(cè)定青黛中靛玉紅的含量，實(shí)驗(yàn)證明，本法具有操作簡便、快速、結(jié)果可靠、易于掌握的特點(diǎn)，是較理想的靛玉紅質(zhì)量控制方法。至于靛玉紅含量的控制范圍，有待進(jìn)一步研究。

篇9

【關(guān)鍵詞】 咪達(dá)唑侖高效液相色譜法血藥濃度

【中國分類號(hào)】R969【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1044-5511（2011）11-0491-01

咪達(dá)唑侖（咪唑安定）是一個(gè)短效的水溶性苯二氮卓類藥物，是咪唑苯二氮卓衍生物之一。與地西泮的油溶液相比，水溶性可將注射疼痛及血栓性靜脈炎的發(fā)生降低到最小，咪達(dá)唑侖常于手術(shù)局麻時(shí)作為鎮(zhèn)靜催眠藥，較高劑量則用于全身麻醉誘導(dǎo)劑［1］由于其較短的消除半衰期（1.5~2.5h）［2］,并且臨床上缺乏理想的長效制品，這就使咪達(dá)唑侖更適合作為鎮(zhèn)靜劑長時(shí)間推注。值的注意的是，在使用高劑量作誘導(dǎo)麻醉時(shí)，在反應(yīng)上有個(gè)體差異，有資料顯示，給予咪達(dá)唑侖0。3mg.kg-1iv，從開始給藥致意識(shí)喪失的時(shí)間存在著個(gè)體差異，50a以上患者意識(shí)喪失比年輕人快［1］，本文采用高效液相色譜法測(cè)定血漿中咪達(dá)唑侖的方法，為臨床進(jìn)一步研究其血藥濃度與藥效學(xué)之間的關(guān)系，探索合理有效的給藥劑量提供一定幫助。

1 材料與方法

1．1儀器與試藥waters515HPLC pamp；waters2487紫外檢測(cè)器；杭州英譜HS色譜數(shù)據(jù)工作站；80-2離心沉淀相，咪達(dá)唑侖水針劑（江蘇恩華制藥有限公司，批號(hào)B363MFD191998）；地西泮（北京益民制藥廠，批號(hào)9801017）甲醇（HPLC，上海吳涇化總廠）；二乙胺（上海化學(xué)試劑總廠附屬上海試劑三廠）乙腈（HPLC級(jí)，上海方可唯寄生物化學(xué)技術(shù)有限公司）；乙醚、磷酸均為分析純。

1．2溶液配制：咪達(dá)唑侖溶液精取咪達(dá)唑侖水針劑1mL，量100mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制成0.05mg.mlL1的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用，地西泮內(nèi)標(biāo)溶液，精稱地西泮10mg置100ml容量瓶中，加甲醇至刻度，制成0.1 mg.mL-1的內(nèi)標(biāo)溶液備用。

1.3色譜條件: 色譜柱：waters Nov-pak G18（4um.3.9mm×150mm）；Alltech保護(hù)柱C1830μn。檢測(cè)波長：225nm。靈敏度：2AUFS。流動(dòng)相：甲醇一水（60：40，V/V）,含乙腈1%、二乙胺0.1%、磷酸0.05%。流速：0.6 mL.min-1。

1.4樣品預(yù)處理：取含有咪達(dá)唑侖的人血清0.5mL。置于10mL具塞試管中，加地西泮內(nèi)標(biāo)溶液5uL，渦旋混和加3mol.L-1Naoh溶液0.5mL，渦旋振蕩，加提取液乙醚3mL，渦旋振蕩2min，以4000r. min-1轉(zhuǎn)速離心分離2 min，取上層提取液重復(fù)提取一次，合并提取液，以40℃氮?dú)獯蹈桑蛹状?0μL回提，取回提取液20μL進(jìn)樣。

2、結(jié)果

2．1咪達(dá)唑侖及內(nèi)標(biāo)色譜，用上述提取方法及色譜條件得到血清色譜圖見圖1顯示咪達(dá)唑侖與內(nèi)標(biāo)峰完全分離，保留時(shí)間分別為（11.21±0.58）min和（9.41±0.39）min見圖Ⅰ

2．2標(biāo)準(zhǔn)曲線取人血清0.5mL,加適量標(biāo)準(zhǔn)液，配成濃度為0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、2. 0ug.mL-1的標(biāo)準(zhǔn)血清，加地西泮內(nèi)標(biāo)液5μL，按上述提取方法及色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以咪達(dá)唑侖濃度為χ軸，以測(cè)定的咪噠唑侖與地西泮的峰面積比為Y軸進(jìn)行線性回歸。結(jié)果表明，樣品在0.1~0.2 ug.mL-1范圍內(nèi)線性良好，回歸方程為：Y=P×10-4X－9.17×10-2，r=0.9998。最低檢測(cè)濃度為0.05 ug.mL-1。

2.3精密度及回收率.日內(nèi)精密度及回收率:在同1d內(nèi)配置3種不同濃度咪達(dá)唑侖的血清樣品,按上述方法提取,分別測(cè)定5次,計(jì)算的內(nèi)平均濃度,RSD及相對(duì)回收率,結(jié)果見表Ⅰ。 日間精密度及回收率：取3種不同濃度的咪達(dá)唑侖血清樣品分別在3d內(nèi)提取，測(cè)定結(jié)果見表Ⅰ

3 討論

咪達(dá)唑侖的化學(xué)名為8-氯-6-（2-氟苯）-1-甲基-4H-咪唑［1.5-a］［1.4］苯丙二氮卓，以鹽酸或馬來酸鹽形式存在。本方法根據(jù)其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，先堿化使其以分子形式存在，再用有機(jī)溶劑提取，揮干后以甲醇回提。用分析純的乙醚提取，雜質(zhì)峰多選用蒸溜乙醚提取后，減少了雜質(zhì)峰的干擾，而且乙醚來源易的，價(jià)廉毒性較低。流動(dòng)相的摸索過程中，先后選用了不同配比的甲醇和水作為流動(dòng)相，發(fā)現(xiàn)甲醇一水（60：40V/V）含乙腈1%，磷酸0.05%的比例較好,但咪達(dá)唑侖和內(nèi)標(biāo)峰分離不太理想,峰型稍有拖尾,加入二乙胺期望改善峰形。經(jīng)比較含二乙胺0.1%流動(dòng)相能使內(nèi)標(biāo)峰和咪達(dá)唑侖峰完全分離,且峰形致改善。

堿化過程中,先后對(duì)不同濃度的Na oH及不同用量作了比較,發(fā)現(xiàn)無明顯差別為保證咪達(dá)唑侖堿化完全,我們選用了3mol.L-1NaoH,,用量以0.5mL為宜.。

本文用高效流相色譜法測(cè)定血清中咪達(dá)唑侖的濃度,提取方法簡便,提取溶劑,流動(dòng)相價(jià)廉易的,毒性低,方法線性良好重現(xiàn)性理想,適合臨床進(jìn)行誘導(dǎo)麻醉劑量的探索研究及藥動(dòng)學(xué)的研究.

參考文獻(xiàn)

［1］Dandee jn,Haliday Nj Harper KW et al Midaxolam;areview of its Pharmacological properties and therapeutic use［1］Drags 1984.28 519

篇10

【關(guān)鍵詞】流動(dòng)相配制 體積比 質(zhì)量比 高效液相色譜法

【中圖分類號(hào)】O657.72 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1674-4810（2013）33-0172-01

高效液相色譜法中的流動(dòng)相主要用水性溶劑、有機(jī)溶劑或它們的混合液，另外水性溶劑也常用于緩沖液。常因資料上表示的內(nèi)容和實(shí)際的配制方法不同，而產(chǎn)生流動(dòng)相的差異，影響了色譜圖和分析結(jié)果。本文以具體的事例研究流動(dòng)相調(diào)制方法對(duì)分析結(jié)果的影響。

一般來說，溶劑的混合按體積比（V/V）或重量比（W/W）進(jìn)行。溶液的體積因溫度而變化，所以按重量比混合可調(diào)制再現(xiàn)性較好的混合溶劑，但由于操作較麻煩，通常多用體積比混合。因此，只要沒有特別標(biāo)明，就可按體積比進(jìn)行混合。但在特殊情況下，如胺類粘度高的溶液混合時(shí)，有時(shí)用重量—體積比（W/V）的方法。

一 有機(jī)溶劑和水性溶劑的混合方法

有機(jī)溶劑和水性溶劑的混合液作為流動(dòng)相是經(jīng)常的，但由于混合方法不同，有時(shí)分析結(jié)果相差很大。如20mM磷酸鈉緩沖液（pH 2.5）90%與乙腈10%的混合液，混合比為9∶1時(shí)，20mM磷酸鈉緩沖液（pH 2.5）90%與乙腈10%的體積比為9∶1，也就是可以解釋為各自按體積比例的相當(dāng)量稱取后進(jìn)行混合。另外，按10%乙腈解釋，用20mM磷酸鈉緩沖液（pH 2.5）將乙腈稀釋調(diào)制也可以成立。在后者情況下，產(chǎn)生混合體積減少部分，余下的添加20mM磷酸鈉緩沖液。兩者雖然沒有太大的差別，但由于混合方式不同，分析結(jié)果，特別是保留時(shí)間，也會(huì)有顯著的差別，這點(diǎn)必須注意。

二 50%或（V/V=1/1）乙腈水溶液的配制方法

對(duì)于用V/V=1/1的表示配制乙腈水溶液，多按這種方法進(jìn)行：用量筒測(cè)定乙腈500ml，用另一量筒測(cè)定水500ml，兩種液體在瓶內(nèi)充分搖晃混合。

不過50%乙腈水溶液的表示時(shí)，同樣也多是按上述方法配制，但查化學(xué)辭典時(shí)，實(shí)際上是按這種方法進(jìn)行配制：首先將500ml乙腈，注入1L的量瓶中，量瓶邊攪拌邊加水，等待液溫達(dá)到室溫，用全量水，使溶液到1L。

這樣一來，用%表示和“V/V”體積比表示，最終得出的流動(dòng)相組成不同。也就是說，混合溶劑的密度，與由原溶劑密度計(jì)算的單純平均值不相同，所以用上述兩種方法調(diào)制的流動(dòng)相組成差異。如在室溫（25℃）附近水50ml和乙腈50ml混合時(shí)體積不是100ml，而有所減少，約為96ml。在一般情況下，多用操作簡便的第一種方法。

三 溶劑體積的溫度影響

如前所述，溶液的密度受周圍溫度的影響。剛從溶劑冷藏箱拿出來的溶液溫度與實(shí)驗(yàn)室的室溫相比，要低不少，乙腈和水混合液因發(fā)熱反應(yīng)，溶液溫度升高。因此，為能調(diào)制再現(xiàn)性好的流動(dòng)相，建議在使用前用水浴（或熱水浴）將液溫調(diào)到接近室溫。

四 用兩臺(tái)泵進(jìn)行溶劑混合