導(dǎo)語(yǔ)：如何才能寫好一篇液相色譜，這就需要搜集整理更多的資料和文獻(xiàn)，歡迎閱讀由公務(wù)員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

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關(guān)鍵詞：高效液相色譜儀 緩沖液 流動(dòng)相 調(diào)制

液相色譜法的流動(dòng)相主要用水性溶劑、有機(jī)溶劑,或它們的混合液。另外,水性溶劑也常用于緩沖液。有的資料[1]介紹了用于高效液相色譜法的代表性緩沖液的具體調(diào)制方法,但通常對(duì)緩沖液的解釋往往含糊不清。因此,常因資料上表示的內(nèi)容與實(shí)際的配置方法的不同,而產(chǎn)生流動(dòng)相的差異,影響色譜圖和分析結(jié)果。而且,不僅緩沖液,有時(shí)還要考慮到溶劑的混合方法等流動(dòng)相調(diào)制方法方面的漏洞等因素[2]。本文以具體的事例,研究流動(dòng)相調(diào)制方法對(duì)分析結(jié)果的影響。

1)緩沖液的調(diào)制

例如,寫的是“20mM磷酸緩沖液(PH2.5)”在實(shí)際中該怎樣調(diào)制?不妨舉幾個(gè)能想到的情況。首先,可以確定是使用磷酸的緩沖液,但是,是什么離子不明確。即使就以鈉離子而言,“20mM”的濃度弄不清是指磷酸,還是指磷酸鈉的濃度。若認(rèn)為是“20mM”磷酸(鈉)緩沖液,“20mM”可看作是磷酸的濃度。另一方面,若把“20mM”看作是鈉的濃度,也可以認(rèn)為是“20mM磷酸二氫鈉水溶液調(diào)整PH后的緩沖液(而且, 20mM磷酸鈉水溶液的PH在5.0附近,只要稍用一點(diǎn)酸就可以調(diào)到PH2.5)”,這時(shí),由于調(diào)整PH用的酸,產(chǎn)生離子對(duì)的效果,或者也許會(huì)對(duì)分析結(jié)果有影響。從上述考慮,會(huì)產(chǎn)生對(duì)緩沖液有多種解釋的可能性。

上述例,具體有3種解釋。對(duì)分析結(jié)果會(huì)產(chǎn)生多大影響,見(jiàn)圖1所示。上段是“20mM”作為磷酸濃度的解釋,將作為“20mM磷酸(鈉)緩沖液(PH2.5)”調(diào)制的溶液用于流動(dòng)相的結(jié)果。中段和下段“20mM”作為磷酸二氫鈉的濃度解釋,分別加磷酸和高氯酸調(diào)整PH為2.5時(shí)的結(jié)果。像此例中的二氫可待因那樣對(duì)保留時(shí)間有明顯的影響時(shí),給分析方法造成困難。對(duì)緩沖液應(yīng)盡量明確溶液的特性和調(diào)制方法,以免產(chǎn)生不同的解釋。(如圖1）

2)有機(jī)溶劑和水性溶劑的混合方法

有機(jī)溶劑和水性溶劑的混合液作為流動(dòng)相是經(jīng)常的,但是由于混合方法的不同,有時(shí)分析結(jié)果相關(guān)很大。作為一例,20mM磷酸(鈉)緩沖液(PH2.5)90%與乙腈10%的混合時(shí),混合比為9:1的話,20mM磷酸(鈉)緩沖液(PH2.5)與乙腈的體積比為9:1,也就是可以解釋為各自按體積比率的相當(dāng)量稱取后進(jìn)行混合。另外,按10%乙腈解釋的話,解釋為用20mM磷酸(鈉)緩沖液(PH2.5),將乙腈稀釋調(diào)制也可以成立。在后者的情況下,產(chǎn)生混合體積減少部分,余下的添加20mM磷酸鈉緩沖液。兩者雖然沒(méi)有太大的差別,但,如圖2所示,由于混合的方式不同,分析結(jié)果(特別是保留時(shí)間)也會(huì)有顯著 差別,這點(diǎn)必須注意。（如圖2）

在一般情況下,調(diào)制高效液相色譜法用流動(dòng)相時(shí),用A液:B液=3:2(V:V)的表示方法,即A液體積比相當(dāng)于3,B液體積相當(dāng)于2,分別稱取混合(實(shí)際上本溶液混合后的溶液體積比合計(jì)體積比5要少)。

不僅是流動(dòng)相的調(diào)制方法,試樣溶液和其他溶液的調(diào)制也經(jīng)常有上述問(wèn)題。另外,在不同部門(醫(yī)藥部門或化工部門)各自都有自己的常識(shí)習(xí)慣,這也是困惑的原因,在這種情況下,例如,日本藥典、衛(wèi)生試驗(yàn)法、日本工業(yè)規(guī)格等法定書都有各自作為通則和定義涉及溶液的調(diào)制,因此可參考這些書,避免混亂,在日常更好地記住這些表示。

參考文獻(xiàn)

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[關(guān)鍵詞]高效液相色譜；應(yīng)用；發(fā)展現(xiàn)狀；發(fā)展趨勢(shì)

中圖分類號(hào)：O652.63 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1009-914X（2015）27-0349-01

在我國(guó)科技和經(jīng)濟(jì)都在高速發(fā)展的時(shí)代，很多技術(shù)都有了非常明顯的改進(jìn)和提升，同時(shí)在這一過(guò)程中其所發(fā)揮的作用也非常的明顯，所以在這樣的情況下，其應(yīng)用的質(zhì)量和水平也有了非常大的提升，而其經(jīng)過(guò)了長(zhǎng)期的發(fā)展，得到了人們的高度重視，同時(shí)也在更多的領(lǐng)域發(fā)揮其積極的作用，所以對(duì)色譜儀進(jìn)行研究是十分必要的。

1、液相色譜在當(dāng)今時(shí)代的發(fā)展

1.1 新型高效液相色譜

當(dāng)前在物質(zhì)檢測(cè)的過(guò)程中，高效色譜法得到了非常廣泛的應(yīng)用，同時(shí)在其發(fā)展的過(guò)程中也出現(xiàn)了很多新型的色譜，在分配機(jī)制層面，親和色譜通常是按照另外一類分配機(jī)制而操作的一種新型的色譜，這種色譜在對(duì)物質(zhì)進(jìn)行檢驗(yàn)的時(shí)候能夠更好的體現(xiàn)分離的效果，因?yàn)樗抢么蠓肿又g的一些特有的共性去識(shí)別和分離物質(zhì)，在操作方面也非常的溫和，此外其流動(dòng)性也非常強(qiáng)，通常其是以超臨界流體色譜作為介質(zhì)，混合物在臨街流體色譜上的分離原理和氣象色譜和液相色譜都是一致的，但是在應(yīng)用的范圍上，這種液相色譜法要應(yīng)用得更加廣泛。

1.2 液相色譜與其他分析儀器聯(lián)合使用

1.2.1高效液相色譜（HPLC）與其他分析儀器聯(lián)合使用

當(dāng)前，高效液相色譜儀在檢測(cè)的過(guò)程中能夠使用的型號(hào)十分的有限，但是它在運(yùn)行中可以選擇很多種檢測(cè)器，在應(yīng)用的時(shí)候能夠體現(xiàn)出非常好的靈敏度，這樣的情況下也就使得物質(zhì)在這一過(guò)程中可以更好的得到分離，此外儀器自身應(yīng)用的廣泛性也得到了十分顯著的提升。比如在環(huán)境污染分析當(dāng)中，對(duì)水中烴類物質(zhì)的測(cè)定就是非常重要的，海水當(dāng)中有很多烴類的物質(zhì)，其不具備揮發(fā)的性質(zhì)，這樣就可以對(duì)環(huán)境污染分析工作的進(jìn)行提供更多有價(jià)值的參考。從固定相的角度來(lái)說(shuō)高分子固定相也得到了發(fā)展和應(yīng)用。此外高效色譜儀也逐漸增加了紫外線檢測(cè)器，這種檢測(cè)器能夠同時(shí)測(cè)定食品當(dāng)中對(duì)位紅和蘇丹紅等若干可溶性的物質(zhì)，從而也提高了液相色譜儀的應(yīng)用價(jià)值。

1.2.2超高效液相色譜（UPLC）與其他分析儀器聯(lián)合使用

當(dāng)前超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法是一種比較新的液相色譜法，它在使用的過(guò)程中具備非常好的性能，同時(shí)在這一過(guò)程中其也更加的簡(jiǎn)單，速度和效率都有了顯著的提升，在靈敏度上也更好，在實(shí)際的應(yīng)用中可以有效的減少來(lái)自于雜質(zhì)的干擾，定量方面的限制明顯放寬，在定性上更加的準(zhǔn)確。

固相萃取和超高液相色譜法是對(duì)組織中的氯羥吡啶含量進(jìn)行分析的一種非常有效的方法，所以這種方法也經(jīng)常使用在治療禽球蟲病的藥物當(dāng)中。相關(guān)的研究人員使用這種方法建立了一個(gè)靈敏度非常好，同時(shí)檢測(cè)速度也非常快的檢測(cè)8種試劑農(nóng)藥殘留量的方法，在實(shí)際的應(yīng)用中收到了良好的效果。

同時(shí)這種檢測(cè)方法在實(shí)際的應(yīng)用中能夠體現(xiàn)出非常好的分離效果，它能夠幫助目標(biāo)化合物和與其形成競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系的化合物雜質(zhì)分離，這樣也就使得質(zhì)譜檢測(cè)器的靈敏度得到十分有效的提升，所以，UPLC是當(dāng)前質(zhì)譜入口的首選。

2、液相色譜儀的應(yīng)用

2.1 液相色譜儀在食品安全領(lǐng)域的應(yīng)用

2.1.1食品添加劑的檢測(cè)

在食品添加劑當(dāng)中，人們最常使用的有三種，一種是防腐劑，一種是甜味劑，一種是色素。添加劑的檢測(cè)方法有很多，在以往的發(fā)展中經(jīng)常使用的有氣象法和比色法。但是液相色譜法和其他的方法相比有著非常明顯的優(yōu)勢(shì)，所以在當(dāng)今的檢測(cè)工作中這種方法得到了廣泛的應(yīng)用。

在防腐劑檢測(cè)方面，研究人員用HypersilODS色譜柱，流動(dòng)相為0.02mol/LpH5.0乙酸銨甲醇溶液，柱溫35℃，在不同波長(zhǎng)下同時(shí)測(cè)定苯甲酸和山梨酸。

在合成色素的檢測(cè)方面，吳敏等采用Zorbax80AExtend―C8色譜柱，高效液相色譜儀配備紫外檢測(cè)器，同時(shí)測(cè)定食品中對(duì)位紅和蘇丹紅等8種脂溶性燃料。

近幾年隨著色譜柱填充制備技術(shù)的高速發(fā)展，已經(jīng)可以一次性分離糖精鈉、安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸、檸檬黃、莧菜紅、亮藍(lán)這十種食品常用添加劑。其效率之高非其他儀器分析方法可比。

2.1.2食品中危害物質(zhì)的檢測(cè)

食品中有害物質(zhì)主要可分為：農(nóng)藥、獸藥殘留；霉菌毒素；重金屬；加工過(guò)程中高溫或其它特殊條件下形成的致癌物質(zhì)等。

黃曲霉毒素普遍存在于多種谷物類食品當(dāng)中，具有極強(qiáng)的致畸致癌作用，研究人員用HyPersilODS―C18色譜柱，測(cè)定食品中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2含量，該方法方便快捷，定性準(zhǔn)確，較傳統(tǒng)的點(diǎn)板法，酶聯(lián)免疫吸附法更為科學(xué)準(zhǔn)確。

高效液相色譜法在應(yīng)對(duì)2008年奶粉摻入三聚氰胺風(fēng)波的檢測(cè)中發(fā)揮了重要作用，面對(duì)全國(guó)眾多乳制品企業(yè)的樣品進(jìn)行檢測(cè)，盡快出具檢測(cè)結(jié)果給老百姓一個(gè)公正準(zhǔn)確的結(jié)果，檢測(cè)方法必須既要快，又要準(zhǔn)，檢出量還非常微小，能做到完美完成這一任務(wù)的，僅有高效液相色譜法能夠做到。

2.2 液相色譜儀在工業(yè)上的應(yīng)用

以往，在石油化工、農(nóng)藥、環(huán)保等方面，經(jīng)常采用薄層色譜法（TLC）和氣相色譜法（OC）進(jìn)行含量測(cè)定，而液相色譜法（LC）只是用于對(duì)組分標(biāo)樣的測(cè)定和分離的可能性的研究。

從上個(gè)世紀(jì)70年代開始，我國(guó)的很多科研部門和該行業(yè)當(dāng)中的工廠就開始對(duì)液相色譜儀的生產(chǎn)和改進(jìn)進(jìn)行了研究，在這一階段，LC開始出現(xiàn)在我國(guó)眾多的科研領(lǐng)域當(dāng)中，其也體現(xiàn)出了非常高的實(shí)用性，特別是對(duì)于那些熱穩(wěn)定性不是非常好或者是蒸汽氣壓不是很高的樣品具有非常好的檢測(cè)和分析效果，這樣也充分的顯示出了LC方法自身的優(yōu)勢(shì)。

2.3 液相色譜儀在生命科學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用

生命科學(xué)研究工作中，最大的難題就是基因的解密工作，從基因組DNA序列尚不能回答某基因的表達(dá)時(shí)間、表達(dá)量、蛋白質(zhì)翻譯后加工和修飾的情況、以及它們的亞細(xì)胞分布等等。這些在基因組中不能解決的問(wèn)題可望在蛋白質(zhì)組學(xué)（Proteome）研究中找到答案。在所研究的細(xì)胞中會(huì)有3～5萬(wàn)種功能各異的蛋白質(zhì)，目前蛋白質(zhì)組研究所使用的雙向電泳法一般只能分辨到2000～3000個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)。現(xiàn)代蛋白質(zhì)組的分析可嘗試使用第一向是體積排阻色譜的雙向HPLC高效液相色譜作預(yù)分離。高效液相色譜和雙向電泳將會(huì)成為蛋白質(zhì)組學(xué)的重要分離工具。因此，高效液相色譜儀將為深入地揭示生命奧秘作出更大的貢獻(xiàn)。

3、結(jié)語(yǔ)

高效液相色譜法在物質(zhì)檢測(cè)方面有了非常廣泛的應(yīng)用，同時(shí)在這一過(guò)程中其也在不斷的完善，這是因?yàn)槲覈?guó)的科學(xué)技術(shù)在不斷的發(fā)展，在這樣的情況下，其應(yīng)用的范圍也在不斷的拓寬，在更多的領(lǐng)域都能看到高效液相色譜法的身影，這對(duì)我國(guó)藥品行業(yè)和食品行業(yè)的發(fā)展都有著非常重要的意義，因此我們必須要加大對(duì)這種技術(shù)的投入，使其更好的體現(xiàn)出自身的優(yōu)勢(shì)和價(jià)值，從而更好的推動(dòng)我國(guó)相關(guān)行業(yè)的發(fā)展。

參考文獻(xiàn)

[1]鄭和輝，王萍，李潔.超高效液相色譜法檢測(cè)化妝品中的12種磺胺抗生素[J].色譜.2007（02）

[2]李熠，趙靜，薛曉鋒，周金慧.超高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定蜂膠中的12種活性成分[J].色譜.2007（06）

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關(guān)鍵詞　檢測(cè)器　判別液　純度

高效液相色譜法定量的前提是色譜峰由單一組分構(gòu)成，因此色譜峰的純度即一個(gè)色譜究竟是有一種組分構(gòu)成，還是包含兩種以上的成分，這就是我們大家所要關(guān)心的問(wèn)題。二極管檢測(cè)器(DAD簡(jiǎn)稱)的開發(fā)，是過(guò)去20年內(nèi)高效液相色譜峰的定DAD檢測(cè)器可以得到各個(gè)波長(zhǎng)的吸光度值即可以得到樣品在各時(shí)刻的吸收光譜圖。

使用這些方法判別峰純度時(shí)都要求待測(cè)組分色譜峰中洗脫雜質(zhì)的紫外光譜，明顯不同于主組分的紫外光譜。光譜間的差異越大對(duì)于其洗脫雜質(zhì)的檢測(cè)就越低，然而有機(jī)物的紫外光譜一般均顯示曲線變化不明顯的寬帶。缺乏能夠說(shuō)明細(xì)微差別的精神結(jié)構(gòu)，尤其是對(duì)于那些生色團(tuán)相同而結(jié)構(gòu)上的差異部分，由于生色團(tuán)不同的化合物間的結(jié)構(gòu)差異不能夠予以足夠的描述實(shí)際上許多情況下，例如同分異構(gòu)體的雜質(zhì)和主組分的降解或代謝產(chǎn)物與主組分結(jié)構(gòu)上是非常相似的。這是利用組分的紫外光譜信息判別色譜峰純度時(shí)就會(huì)遇到不能檢測(cè)到分析物的共洗脫雜質(zhì)的情況，甚至有時(shí)候會(huì)給出完全錯(cuò)誤的峰純度結(jié)果從而給下一步的定性定量分析很大誤差。

使用DAD可以獲得三維譜圖，進(jìn)而得到等吸收?qǐng)D提取所要檢測(cè)波長(zhǎng)下的色譜圖。本文通過(guò)選擇頭孢拉定作為分析對(duì)象對(duì)DAD用于判別液相色譜峰純度時(shí)的局限性研究。

1　試驗(yàn)部分

儀器和試劑AgilenFechnologiesl200SeriesDAD檢測(cè)器、甲醇(色譜純)其它試劑均為分析純。頭孢拉定、頭孢氨芐對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。

色譜柱：EXSILCl8柱5μm150*406mid，流動(dòng)相：水、甲醇、3.86％醋酸鈉溶液、4％醋酸溶液(1654：400：30：6)流速為0.7ml／min-0.9ml／min進(jìn)樣量10μl柱溫為室溫。

對(duì)照品溶液制備：①取頭孢拉定對(duì)照品約35mg精密稱定置50ml量瓶中加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度搖勻。②取頭孢氨芐對(duì)照品約20mg精密稱定置50ml量瓶中加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度搖勻。供試品溶液的制備實(shí)驗(yàn)用的混合溶液根據(jù)要求按不同的配比使用標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照溶液和流動(dòng)相來(lái)配制。

2　結(jié)果與討論

2.1DAD用于色譜峰純度判別

頭孢拉定和頭孢氨芐其二者在合適的條件下可以被分離。通常頭孢拉定中含有一定量的頭孢氨芐從二者的紫外光譜，可以發(fā)現(xiàn)他們的紫外光譜形狀幾乎完全一致。事實(shí)上二者結(jié)構(gòu)上的相似在實(shí)際工作中由于柱效下降或者分離條件偶爾變化有時(shí)仍然會(huì)遇到二者嚴(yán)重重疊或者其洗脫的情況通過(guò)一根使用過(guò)一段時(shí)間的色譜柱對(duì)供試品的洗脫得到的頭孢氨芐和頭孢拉定的洗脫的色譜峰利用歸一化光譜對(duì)照和吸收比值圖法對(duì)該假單峰的純度進(jìn)行鑒定。結(jié)果頭孢拉定和頭孢氨芐的共洗脫色譜峰前沿峰頂和峰尾提取的紫外光譜柱歸一化后重疊，頭孢拉定中含有微量的頭孢氨芐由于二者結(jié)構(gòu)和性質(zhì)上的相似使得他們保留的時(shí)間也很相近對(duì)流動(dòng)相的配比略作改變后可使頭孢氨芐峰被掩蓋表現(xiàn)上呈單一峰。使用DAD抽取該色譜圖歸一化后重疊和利用吸收比值圖對(duì)該色譜的純度進(jìn)行判別的結(jié)果，認(rèn)為該色譜圖峰是純的。幸運(yùn)的是它們?cè)谶m當(dāng)?shù)臈l件下可以被分離開，從上面選擇的有代表性的分析物或者光譜相似雜質(zhì)組成的體系中可以明顯的看出使用DAD判別液相色譜峰純度有時(shí)可能會(huì)得出錯(cuò)誤的峰純度信息。文獻(xiàn)中也認(rèn)為任何情況下相同的吸收比或者整個(gè)色譜峰歸一化光譜的一致只應(yīng)該被當(dāng)作是峰純度的一個(gè)相對(duì)指示而不是一個(gè)絕對(duì)的證據(jù)，對(duì)于可能存在于主組分結(jié)構(gòu)相似的雜質(zhì)的樣品體系的液相色譜分析方法，峰純度的可靠評(píng)價(jià)最好是通過(guò)收集色譜峰出液，然后更換不同的色譜體系或者是由于對(duì)微小結(jié)構(gòu)差異靈敏的質(zhì)譜等手段來(lái)驗(yàn)證。

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[關(guān)鍵詞]液相色譜技術(shù)；食品；安全；檢驗(yàn)；應(yīng)用；

中圖分類號(hào)：O657.7+2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1009-914X（2016）03-0379-01

高效液相色譜技術(shù)因其具有分離效率高、檢測(cè)速度快、檢測(cè)靈敏度高等特點(diǎn)，已在食品安全檢驗(yàn)領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用，同時(shí)隨著高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的不斷改進(jìn)與發(fā)展，必將發(fā)揮越來(lái)越重要的作用。

1 高效液相色譜法

1.1 高效液相色譜法簡(jiǎn)介

液相色譜技術(shù)（HPLC技術(shù)）是一種起源于西方國(guó)家的先進(jìn)的檢驗(yàn)技術(shù)，在物理分離、化學(xué)分析中都得到了廣泛的應(yīng)用，以高效液相色譜儀為主要代表。液相色譜技術(shù)具有悠久的發(fā)展歷史，經(jīng)過(guò)不斷的發(fā)展與更新而形成，具有時(shí)代性和歷史性。色譜法就是利用色譜技術(shù)來(lái)利用物理性質(zhì)來(lái)使其分離成固定相和流動(dòng)相，進(jìn)而展現(xiàn)出不同的分布特點(diǎn)，達(dá)到分離的目的。色譜法以凝膠色譜、氣象色譜和液相色譜為主，其中液相色譜技術(shù)的應(yīng)用價(jià)值最高。隨著食品安全問(wèn)題的愈演愈烈，食品安全檢測(cè)工作被提上了日程，將液相色譜技術(shù)應(yīng)用于食品安全檢驗(yàn)中，對(duì)食品樣品的在液體與固體或不互溶的情況下進(jìn)行分離與分析，并對(duì)其中的成分進(jìn)行鑒定的過(guò)程，能充分了解食品中所含有的成分并對(duì)其進(jìn)行分析，可明確了解到食品是否具有安全性。

1.2 高效液相色譜法特點(diǎn)

與氣相色譜法、經(jīng)典液相色譜法相比，高效液相色譜法具有如下優(yōu)點(diǎn)：①在小口徑短不銹鋼柱內(nèi)填充顆粒極細(xì)的固定相，降低了傳質(zhì)阻力，有效提高柱效，分離效能高。②采用高壓輸液系統(tǒng)提高流動(dòng)相的流速，縮短分析時(shí)間，分析一個(gè)樣品僅需幾分鐘到幾十分鐘，分析速度高。③采用高靈敏度檢測(cè)器，檢測(cè)靈敏度高，紫外檢測(cè)器可達(dá)0.01ng。④通過(guò)流動(dòng)相可以控制和改善分離過(guò)程，同時(shí)色譜柱

2 液相色譜技術(shù)進(jìn)行食品安全檢驗(yàn)的幾點(diǎn)思考

2.1 實(shí)現(xiàn)對(duì)食品營(yíng)養(yǎng)成分的檢驗(yàn)

高效液相色譜法可對(duì)食品中的營(yíng)養(yǎng)成分進(jìn)行定性、定量分析，即確定營(yíng)養(yǎng)成分的種類及含量，如糖類、脂肪酸類、維生素等人體所必須的營(yíng)養(yǎng)成分。裘立群[1]等用反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定水果中脂溶性維生素。該方法準(zhǔn)確度高，靈敏度好，回收率在88.5%～93.6%之間，適合于水果等低含量脂溶性維生素的測(cè)定。

2.2 實(shí)現(xiàn)對(duì)食品添加劑的檢驗(yàn)

食品添加劑是指為改善食品色、香、味等品質(zhì)，以及為防腐和加工工藝的需要而加入食品中的化合物質(zhì)或者天然物質(zhì)。我國(guó)規(guī)定了食品添加劑的最大使用量或殘留量，但是目前超量使用添加劑的現(xiàn)象非常多，過(guò)量的添加劑對(duì)人體產(chǎn)生潛在的毒害。林海丹等建立了利用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定食品中18種添加劑的分析方法。該方法采用乙腈-6%乙酸溶液作為流動(dòng)相，梯度洗脫程序，檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm。結(jié)果顯示在1.0～25mg/L的濃度范圍內(nèi)18中添加劑的線性良好，相關(guān)系數(shù)均在0.99以上，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.43%～11.7%之間，回收率在88.9%～99.9%之間，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確度高。阿不都外力.吐尼亞孜[3]等利用反高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定食品中14中食品添加劑，包括苯甲酸、山梨酸、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丁酯、尼泊金丙酯、糖精鈉、安賽蜜等添加劑。樣品經(jīng)簡(jiǎn)單處理后，經(jīng)HypersilODS（4.6×200mm，5m，DEAIC）色譜柱分離，采用20mmol/L乙酸銨（pH=6.8）-甲醇為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流速設(shè)置為1mL/min，柱溫控制在30℃，在波長(zhǎng)234nm、254nm處利用紫外檢測(cè)器對(duì)食品中的14種添加劑進(jìn)行檢測(cè)，并在18min內(nèi)完成分析流程。該方法平均加標(biāo)回收率在94%～99%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于4.5%。

2.3 實(shí)現(xiàn)對(duì)殘留農(nóng)藥的檢驗(yàn)

農(nóng)藥殘留是農(nóng)藥使用后一個(gè)時(shí)期內(nèi)沒(méi)有被分解而殘留于生物體、收獲物、土壤、水體、大氣中的微量農(nóng)藥原體、有毒代謝物、降解物和雜質(zhì)的總稱。據(jù)統(tǒng)計(jì)目前世界上化學(xué)農(nóng)藥年產(chǎn)量達(dá)200萬(wàn)t，其中有近1000種人工合成化合物被用作殺蟲劑、殺菌劑、殺藻劑、除蟲劑、落葉劑等類農(nóng)藥。農(nóng)藥尤其是有機(jī)農(nóng)藥的大量施用，造成嚴(yán)重的農(nóng)藥污染問(wèn)題，成為對(duì)人體健康的嚴(yán)重威脅。食用含有大量劇毒殘留農(nóng)藥的食物會(huì)導(dǎo)致人、畜急性中毒事故。長(zhǎng)期食用農(nóng)藥殘留超標(biāo)的農(nóng)副產(chǎn)品，可能引起人和動(dòng)物的慢性中毒，誘發(fā)疾病，甚至影響到下一代。由于農(nóng)藥殘留對(duì)健康的危害極大，各國(guó)對(duì)農(nóng)藥的施用都進(jìn)行嚴(yán)格的管理，并制定了每種農(nóng)藥在食品中的最大殘留限量。目前廣泛使用的農(nóng)藥中以有機(jī)化合物為主，該類化合物的特點(diǎn)是分子量大、揮發(fā)性低、受熱易分解或失去活性，高效液相色譜技術(shù)在此類化合物的定量分析中發(fā)揮著不可替代的作用。楊濤[4]等建立了高效液相色譜法測(cè)定果蔬中防腐殺菌劑的方法，可同時(shí)測(cè)定噻苯咪唑、鄰苯基苯酚、聯(lián)苯、對(duì)苯基苯酚、聯(lián)苯醚、聯(lián)苯胺、多菌靈、乙萘酚、乙氧基喹、抑霉唑10種防腐殺菌劑。該方法固定相采用ZORBAXExtend-C18柱，流動(dòng)相采用不同比例的甲醇和pH8.0的磷酸鹽緩沖溶液，檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）在0.83%～4.71%之間。

2.4 分析霉菌毒素

食品在加工、存儲(chǔ)過(guò)程中，容易存在多種霉菌毒素，如黃曲霉素、玉米烯酮霉素等，有致癌性，嚴(yán)重危害人體健康。應(yīng)用高效液相色譜技術(shù)和免疫親和柱萃取，檢測(cè)限為10ng/kg，可檢測(cè)酸奶等食品中是否含有黃曲霉素；應(yīng)用高效液相色譜與大氣壓化學(xué)電離質(zhì)譜聯(lián)用，檢測(cè)限下降為0.12pg/kg，可檢測(cè)粗提物食品中的玉米烯酮霉素。隨著環(huán)境的日益惡化，像汞、鋅、鉛及其化合物等重金屬也稱為環(huán)境中廣泛存在的一類污染物，對(duì)農(nóng)作物和水產(chǎn)品的生長(zhǎng)造成了危害，常采用化學(xué)法、原子熒光法等測(cè)定其含量，近年來(lái)隨著HPLC技術(shù)的不斷完善和發(fā)展，也出現(xiàn)了以HPLC技術(shù)測(cè)定無(wú)機(jī)離子的的報(bào)道，且效果良好。

3 高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)

高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)是一項(xiàng)新的分離技術(shù)，它利用質(zhì)譜法提供未知物豐富的結(jié)構(gòu)信息，從而克服了高效液相色譜法無(wú)法準(zhǔn)確定性的缺點(diǎn)，該技術(shù)的特點(diǎn)集中表現(xiàn)在具有高分離能力、高靈敏度、應(yīng)用范圍廣和極強(qiáng)的專屬性方面。因其在對(duì)高沸點(diǎn)、難揮發(fā)、熱不穩(wěn)定性化合物的定性定量分析方面有其獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，已被廣泛應(yīng)用于食品安全檢驗(yàn)領(lǐng)域，同時(shí)在藥物分析特別是中草藥分析領(lǐng)域也有極為廣闊的應(yīng)用前景。

4 結(jié)束語(yǔ)

綜上所述，HPLC技術(shù)作為目前市場(chǎng)上進(jìn)行食品安全檢測(cè)的一種行之有效的分析分離手段，得到了廣泛的應(yīng)用，但是任何一種檢測(cè)方法不可能做到面面俱到，因此合理綜合使用多種色譜技術(shù)，實(shí)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果的精確可靠且方便快捷，才能更好的服務(wù)于社會(huì)。另外政府也需加強(qiáng)市場(chǎng)監(jiān)管，建立規(guī)范的市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)秩序，杜絕食品安全問(wèn)題，相關(guān)技術(shù)人員和部門需不斷突破創(chuàng)新，開發(fā)更多、更好、更實(shí)用的食品檢測(cè)方法，造福人類，促進(jìn)社會(huì)和諧發(fā)展。

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關(guān)鍵詞：色譜柱 維護(hù)與保養(yǎng) 高壓液相色譜 應(yīng)用 

        0 引言

        色譜作為一種分離技術(shù)與方法，自本世紀(jì)初起已經(jīng)有100多年的歷史了，現(xiàn)在已經(jīng)成為分析化學(xué)學(xué)科中的一個(gè)重要的分支。在人類進(jìn)入新時(shí)代之際，人們面臨著在信息科學(xué)、生命科學(xué)、材料科學(xué)、環(huán)境科學(xué)等領(lǐng)域的快速發(fā)展的挑戰(zhàn)，在這些領(lǐng)域人才的需求成為國(guó)家高度發(fā)展的至關(guān)重要的因素。而色譜技術(shù)是生命科學(xué)、材料科學(xué)、環(huán)境科學(xué)必不可少的手段和工具。根據(jù)最近的統(tǒng)計(jì)在全世界各類分析儀器中氣象色譜儀和液相色譜儀的營(yíng)銷總額占25%-30%。

        科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，使得色譜技術(shù)也得到進(jìn)一步的發(fā)展，不斷有新的聯(lián)用的技術(shù)得到應(yīng)用。生物醫(yī)學(xué)的發(fā)展，也不斷要求高靈敏和高選擇性的方法對(duì)研究的對(duì)象進(jìn)行定性和定量的研究。

        1 色譜柱的相關(guān)性質(zhì)

        1.1 色譜柱的定義：裝填有固定相用以分離混合組分的柱管。多為金屬或玻璃制作。有直管形、盤管形、U形管等形狀。

        1.2 分類：色譜柱可分為填充柱和開管柱兩大類。液相色譜通常均采用填充柱。色譜柱的分離效果取決于所選擇的固定相，以及色譜柱的制備和操作條件。簡(jiǎn)單而言：常見(jiàn)的分配住填料：碳十八柱（ODS/C18)、碳八柱（Octy了/C8）、碳六柱（Hexyl/C6）、碳四柱（Butyl/C4）、碳一注（Methyl/C1）、陰離子交換柱（SAX)、陽(yáng)離子交換柱（SCX）、苯基柱（Phenyl）、氨基柱（Amino/NH2）、氰基柱（Cyano/CN/Nitrile）。常見(jiàn)的吸附柱填料：硅膠柱

        色譜柱的選擇會(huì)直接影響混合物中組分的分離。舉例來(lái)講：對(duì)于填充柱而言，可選擇的固定相較多，柱容量較大，但是受柱長(zhǎng)的限制，分離能力有限，主要應(yīng)用于簡(jiǎn)單化合物的分離。

        2 色譜柱的維護(hù)與保養(yǎng)

        2.1 色譜柱的維護(hù)。我們?cè)谑褂眯碌纳V柱應(yīng)該在我們自己的液相色譜儀上進(jìn)行性能測(cè)試，即使用色譜柱附帶的檢驗(yàn)報(bào)告上測(cè)試條件和樣品來(lái)測(cè)定該色譜柱的柱效。并且，在以后的使用中，應(yīng)時(shí)常對(duì)色譜柱進(jìn)行測(cè)試。而且在使用的過(guò)程中常常有堵塞的現(xiàn)象，造成這種現(xiàn)象的主要原因是①溶劑中的不溶物②樣品中的不溶物③泵進(jìn)樣器等中的不溶物④柱內(nèi)不溶物的形成等。如果當(dāng)色譜柱堵塞以后我們可以對(duì)色譜柱進(jìn)行修復(fù)，首先，使用含鹽緩沖液后（如離子對(duì)試劑）應(yīng)用溶解性強(qiáng)的溶劑（如水）進(jìn)行沖洗。其次，先斷開檢測(cè)器，然后用對(duì)來(lái)自樣品中的物質(zhì)有強(qiáng)溶解性的溶劑進(jìn)行沖洗，對(duì)于反相色譜柱，可使用甲醇、乙睛、四氫呋喃、氯仿、庚烷等，在此條件下，應(yīng)避免溶劑的pH低于2或高于8。最后如果經(jīng)過(guò)上述還是沒(méi)有修復(fù)，色譜柱壓力還是沒(méi)有下降，則要斷開檢測(cè)器，將色譜柱反方向放置，然后檢查柱壓，若壓力穩(wěn)定下降，則保持色譜柱反方向連接，用低于0.5 ml/min 流速?zèng)_洗一小時(shí)。如果壓力不下降，則要看內(nèi)置過(guò)濾器是否被堵塞，如果被堵塞應(yīng)沖洗或更換，若進(jìn)口端的填料發(fā)生堵塞，柱子將不可能被徹底恢復(fù)，只能通過(guò)去掉進(jìn)口端的部分填料，重新填充進(jìn)行有限的柱效恢復(fù)。而且修復(fù)的厚度是2-5mm。

        2.2 色譜柱的保養(yǎng)。色譜柱在使用前，最好進(jìn)行柱的性能測(cè)試，并將結(jié)果保存起來(lái)，作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測(cè)試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測(cè)試所使用的條件是最佳條件)，只有這樣，測(cè)得的結(jié)果才有可比性。我們?cè)趯?duì)色譜柱使用前進(jìn)行測(cè)試以后，我們要根據(jù)不同的情況對(duì)色譜柱進(jìn)行保養(yǎng)：①反相色譜柱每天實(shí)驗(yàn)后的保養(yǎng)：使用緩沖液或含鹽的流動(dòng)相，實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)用10%的甲醇/水沖洗30分鐘，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗30分鐘。注意：不能用純水沖洗柱子，應(yīng)該在水中加入10%的甲醇，防止將填料沖塌陷。②長(zhǎng)期保存色譜柱：如色譜柱要長(zhǎng)時(shí)間保存，必須存于合適的溶劑下。對(duì)于反相柱可以儲(chǔ)存于純甲醇或乙腈中，正相柱可以儲(chǔ)存于嚴(yán)格脫水后的純正己烷中，離子交換柱可以儲(chǔ)存于水（含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞）中，并將購(gòu)買新色譜柱時(shí)附送的堵頭堵上。儲(chǔ)存的溫度最好是室溫。

  概括起來(lái)就是：①柱子在任何情況下不能碰撞、彎曲或強(qiáng)烈震動(dòng)；②當(dāng)柱子和色譜儀聯(lián)結(jié)時(shí)，閥件或管路一定要清洗干凈；③要注意流動(dòng)相的脫氣；④避免使用高粘度的溶劑作為流動(dòng)相；⑤進(jìn)樣樣品要提純；⑥嚴(yán)格控制進(jìn)樣量；⑦每天分析工作結(jié)束后，要清洗進(jìn)樣閥中殘留的樣品；⑧每天分析測(cè)定結(jié)束后，都要用適當(dāng)?shù)娜軇﹣?lái)清洗柱；⑨若分析柱長(zhǎng)期不使用，應(yīng)用適當(dāng)有機(jī)溶劑保存并封閉。

        3 色譜柱的維護(hù)與保養(yǎng)在高壓液相色譜中的應(yīng)用

        高效液相色譜(HPLC)是20世紀(jì)60年代后期發(fā)展起來(lái)的分離分析技術(shù)，是現(xiàn)代分離測(cè)定的重要手段。問(wèn)世以來(lái)，因其具有分離效能高、分析速度快、檢測(cè)靈敏度好、能分析高沸點(diǎn)但不能氣化的熱不穩(wěn)定生理活性物質(zhì)的特點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、藥物及臨床分析。高效液相色譜柱是消耗品，會(huì)隨使用時(shí)間或進(jìn)樣的次數(shù)增加，出現(xiàn)色譜峰高降低，峰寬加大或出現(xiàn)肩峰，柱效下降。需要定期進(jìn)行徹底清洗和再生，不同的色譜柱清洗方法各不相同比如：

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關(guān)鍵詞：魚藤酮；殘留；液相色譜-質(zhì)譜

中圖分類號(hào)：O657.7+2；O657.63 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2012）21-4868-02

Determination of Rotenone Residue in Cabbage by LC-MS

LIU Jun1，LI Xian-bo1，2，SHEN Jing1

（1.Agricultural Quality Standards and Inspection Technology Research Institute， Hubei Academy of Agricultural Science， Wuhan 430064，China； 2.College of Science， Huazhong Agricultural University， Wuhan 430070，China）

Abstract： A method for determination of rotenone residue in cabbage was established by LC-MS. Rotenone residue was extracted from sample with acetonitrile， cleaned up by ProElut Carbon/NH2 SPE to achieve sample preparation， and separated on the MGШ-C18 column using a mixture of acetonitrile and 0.1% formic acid solution （60∶40） as mobile phase. Determination was performed by using ESI+ and under the mode of SIM. Quantitative detection of ions at m/z 395， the retention time of rotenone was about 4.8 min. Linearities were held in the ranges of 0.001～1.000 mg/L with the correlation coefficient for 0.999 98. The average recoveries of rotenone in cabbage at the spiked amounts of 0.01、0.10、0.50 mg/kg were 70.5%～112.6%， and the relative standard deviation was lower than 20.9%（n=5）. The limit of detectable amount （S/N=10） was 2.5×10-11 g. The accuracy and precision of this method could meet the detection requirements.

Key words： rotenone； residue； LC-MS

魚藤酮是豆科藤本植物魚藤根部的一種天然殺蟲劑，具有高效、低毒、廣譜、殺蟲快、對(duì)農(nóng)作物不產(chǎn)生藥害和不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)防治果樹、蔬菜、茶葉、花卉和糧食作物上的數(shù)百種害蟲及蚊、蠅等衛(wèi)生害蟲有良好效果。但過(guò)量使用會(huì)造成環(huán)境污染，對(duì)人類健康帶來(lái)危害，特別是其對(duì)中樞神經(jīng)的毒性作用日益引起社會(huì)各界的關(guān)注[1]。因此，魚藤酮在得到廣泛應(yīng)用的同時(shí)，開展魚藤酮的殘留檢測(cè)方法研究就顯得非常重要。目前，有報(bào)道采用液相色譜、液相色譜-質(zhì)譜、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜以及氣相色譜-質(zhì)譜檢測(cè)魚藤酮在蜂蜜[2，3]、魚肉[4]、河水[5]、果蔬[6]、食品[7]、血漿[8]、魚藤[9]以及水產(chǎn)品[10]中的殘留。但甘藍(lán)中魚藤酮的殘留檢測(cè)方法未見(jiàn)報(bào)道，本研究建立了高效液相色譜-質(zhì)譜法檢測(cè)甘藍(lán)中魚藤酮的殘留量，該方法快速、準(zhǔn)確，準(zhǔn)確度和靈敏度均能滿足殘留檢測(cè)要求。

1 材料與方法

1.1 儀器及試劑

LC 210ADvp高效液相色譜儀（日本島津公司），配有LC-MS 2010 EV質(zhì)譜檢測(cè)器和電噴霧離子源，自動(dòng)進(jìn)樣器，LC-MS工作站。

魚藤酮標(biāo)樣（99.0%，德國(guó)Dr. Ehrenstorfer公司），甲醇和乙腈均為色譜純（J. T. Baker公司），甲酸（99.0%，Acros Organics公司），氯化鈉（分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），超純水用 Barnstead超純水機(jī)制備，其他試劑均為分析純。

1.2 樣品前處理

稱取經(jīng)搗碎處理的甘藍(lán)樣品10.00 g于100 mL離心管中，加入20 mL乙腈，以21 000 r/min勻質(zhì)2 min，加入3.0 g氯化鈉，再勻質(zhì)1 min。以3 500 r/min離心5 min，吸取上清液5 mL（相當(dāng)于2.5 g樣品）于100 mL燒杯中，于80 ℃水浴蒸發(fā)近干，加入2 mL乙腈∶甲苯（3∶1，V/V）待凈化。

1.3 樣品凈化

用5 mL乙腈∶甲苯（3∶1，V/V）預(yù)淋洗Carbon/NH2柱（6 mL，500 mg），待淋洗液接近固體層面時(shí)迅速倒入上述待凈化液，同時(shí)收集淋洗液，再用6 mL乙腈∶甲苯（3∶1，V/V）分兩次淋洗，合并上述淋洗液，于45 ℃水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干，2.5 mL甲醇定容，待質(zhì)譜檢測(cè)。

1.4 液相色譜-質(zhì)譜條件

色譜柱：MGШ-C18（100 mm×2.0 mm，5 μm）；流動(dòng)相采用乙腈∶0.1%甲酸溶液（60∶40，V/V）；流速：0.2 mL/min；進(jìn)樣體積：5 μL；柱溫：35 ℃；離子源 ESI （+），SIM 掃描模式（m/z 395）；CDL溫度：250 ℃； 加熱模塊溫度：200 ℃；霧化氣流速（N2）：1.5 L/min；干燥氣（N2）壓力：40 kPa；檢測(cè)電壓：1.65 V。

2 結(jié)果與分析

2.1 定量離子的選擇

在上述色譜條件下選擇SCAN （+）模式，直接進(jìn)100 mg/L的魚藤酮標(biāo)樣溶液，掃描范圍m/z 50～450得到全掃描質(zhì)譜圖。由圖1可見(jiàn)m/z 395 （M+H）的強(qiáng)度最大，所以選擇 m/z 395 為定量離子。以m/z 395為定量離子采用SIM（+） 模式，魚藤酮的添加和標(biāo)樣圖譜以及甘藍(lán)空白譜圖見(jiàn)圖2。

2.2 線性范圍和檢出限

配制魚藤酮標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度分別為0.001、0.005、0.010、0.050、0.100、1.000 mg/kg進(jìn)行檢測(cè)，以m/z 395質(zhì)量色譜圖峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的魚藤酮質(zhì)量濃度（mg/kg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖3，其線性回歸方程為：y =672 954 0x+112 02，相關(guān)系數(shù)為0.999 98。按S/N=10計(jì)算魚藤酮最低檢出量為2.5×10-11 g。

2.3 方法的回收率、精確度和最小檢出濃度

在未施用魚藤酮的菜地采集空白甘藍(lán)樣品，分別添加0.01、0.10、0.50 mg/kg 3個(gè)水平魚藤酮標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)水平5次重復(fù)，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1，添加樣品中魚藤酮加標(biāo)回收率為70.5%～112.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在4.1%～20.9%。魚藤酮在甘藍(lán)中的最小檢測(cè)濃度為0.01 mg/kg。回收率、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差和最小檢測(cè)濃度能滿足農(nóng)藥登記殘留試驗(yàn)的要求。

3 小結(jié)與討論

采用乙腈提取，Carbon/NH2柱凈化，液相色譜-質(zhì)譜檢測(cè)農(nóng)藥魚藤酮在甘藍(lán)中的殘留，該方法操作方便，其添加回收率、精確度和最小檢出濃度均能達(dá)到農(nóng)藥登記殘留試驗(yàn)的要求。

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收稿日期：2012-06-01

基金項(xiàng)目：農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所農(nóng)藥登記試驗(yàn)項(xiàng)目（2011P325）

篇7

【關(guān)鍵詞】 戰(zhàn)骨；，，黃毛豆腐柴；，，指紋圖譜；，，高效液相色譜法；，，壯藥

摘要：目的采用高效液相色譜法對(duì)壯藥戰(zhàn)骨藥材進(jìn)行指紋圖譜的研究，為戰(zhàn)骨藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提升提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法實(shí)驗(yàn)采用Phenomenex Gemini C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈-0.05 mol/L 醋酸水溶液為流動(dòng)相進(jìn)行二元梯度洗脫，流速1.0 ml / min，柱溫25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)274 nm。結(jié)果以23個(gè)共有峰為評(píng)價(jià)指標(biāo)，精密度和重復(fù)性實(shí)驗(yàn)中各共有峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD均小于3%，符合有關(guān)規(guī)定要求。結(jié)論此方法操作簡(jiǎn)單，精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性良好，有助于戰(zhàn)骨藥材的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：戰(zhàn)骨； 黃毛豆腐柴； 指紋圖譜； 高效液相色譜法； 壯藥

Abstract：ObjectiveThe fingerprint chromatograms were established for quality evaluation of traditional Zhuang nationality medicine Zhangu ( the root of Premna fulva craib) by high performance liquid chromatography. MethodsThe analysis was performed on a Phenomenex Gemini C18 column（4.6 mm×250 mm，5 μm） with acetonitrile0.05 mol/L ethanoic acid as mobile phase in a gradient mode at a flow rate of 1.0 ml/min， and at a column temperature of 25℃. The detection wavelength was 274nm. ResultsTwenty three peaks were selected as the common fingerprint peaks. The relative standard deviations for relative retention values and relative peak areas were less than 3% in the precision and repeated test. ConclusionThe method is reliable and can be helpful in the quality control of Zhangu.

Key words：Zhangu； Premna fulva Craib.； Fingerprint； High performance liquid chromatography； Traditional Zhuang Nationality medicine

壯藥戰(zhàn)骨是馬鞭草科植物黃毛豆腐柴 Premna fulva Craib.的干燥莖，別名土霸王、穿云箭［1］。多分布于廣西百色、南寧地區(qū)等地，藥源豐富，價(jià)廉易采收，屬可持續(xù)利用的天然藥物資源。戰(zhàn)骨具有活血散淤、強(qiáng)筋健骨、驅(qū)風(fēng)止痛的功效，廣西民間常用于治療腰腿痛、跌打損傷、風(fēng)濕性和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎及感冒身痛、淋巴結(jié)炎、肝區(qū)疼痛等［2～4］。戰(zhàn)骨中含有多種化學(xué)成分，其主要有效成分為柚皮素等黃酮類化合物［5～7］。由于受產(chǎn)地、氣候、生態(tài)環(huán)境等因素的影響，不同藥材所含有效成分差異較大。針對(duì)中藥材的某個(gè)有效成分對(duì)藥材進(jìn)行定性、定量并不能有效控制中藥材的質(zhì)量。指紋圖譜能夠從綜觀和整體上表征中藥材的特征，目前已成為國(guó)際上公認(rèn)的控制天然藥物質(zhì)量的有效手段［8，9］。本文以提高戰(zhàn)骨藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，促進(jìn)民族醫(yī)藥發(fā)展為目的，對(duì)廣西不同產(chǎn)地戰(zhàn)骨藥材進(jìn)行了指紋圖譜的研究。

1 材料與方法

1.1 儀器與藥品儀器：美國(guó)PerKinElmer公司Series 200高效液相色譜儀（包括Series 200紫外檢測(cè)器、Series 200二元泵、600 Series 接口及色譜工作站）。 Phenomenex Gemini C18 色譜柱（4.6 mm ×250 mm，5 μm）。藥材：戰(zhàn)骨（產(chǎn)地：廣西，經(jīng)廣西南寧食品藥品檢驗(yàn)所中藥室鑒定，均為馬鞭草科植物黃毛豆腐柴的干燥莖。來(lái)源見(jiàn)表1）。試劑 ：乙腈、甲醇為色譜純，乙醇、醋酸為分析純，水為高純水，柚皮素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）。

表1 戰(zhàn)骨藥材樣品來(lái)源及批號(hào)（略）

1.2 色譜條件以乙腈-0.05 mol /L 醋酸水溶液為流動(dòng)相進(jìn)行二元梯度洗脫，流速1.0 ml/min，柱溫25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)274 nm，進(jìn)樣量20 μl。梯度洗脫程序結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 流動(dòng)相梯度洗脫程序（略）

1.3 方法

1.3.1 參照物溶液的制備取柚皮素對(duì)照品適量，用甲醇溶解，定容，作為參照物溶液（含柚皮素104 μg/ml）。

1.3.2 供試品溶液的制備取各批戰(zhàn)骨藥材粉未（過(guò)2號(hào)篩）約2.5 g，精密稱定，置于錐形瓶中，精密加入30%乙醇溶液50 ml，超聲處理1.5 h ，放冷，再稱定重量，用30%乙醇溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。不立即分析的樣品可暫存于4℃的冰箱保存。

1.3.3 測(cè)定方法分別精密量取參照物溶液和各供試品溶液20 μl，注入液相色譜儀，記錄90 min色譜圖即得。以柚皮素的色譜峰（S）的保留時(shí)間和峰面積為1，計(jì)算其它各峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積比值。

2 結(jié)果

2.1 方法學(xué)考察

2.1.1 精密度以1# 藥材制備供試品溶液，在“1.2”項(xiàng)下色譜條件下，連續(xù)進(jìn)樣5次，檢測(cè)指紋圖譜。結(jié)果表明，色譜圖中各色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD小于0.98%；相對(duì)峰面積的RSD小于2.31%，符合指紋圖譜要求，表明儀器精密度良好。

2.1.2 重復(fù)性以1# 藥材5份，制備供試品溶液，分別檢測(cè)指紋圖譜，結(jié)果表明各色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD小于1.91%；單峰面積大于等于5%總峰面積的色譜峰其相對(duì)峰面積的RSD小于2.28%，表明方法的重復(fù)性良好。

2.1.3 穩(wěn)定性取1# 藥材制備供試品溶液，分別在0，12，17，37，48h 檢測(cè)指紋圖譜，結(jié)果表明，各主要色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD小于2.51%，相對(duì)峰面積比值的RSD小于2.89%，表明供試品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2 指紋圖譜的建立及分析

2.2.1 指紋圖譜及共有峰的標(biāo)定對(duì)10個(gè)戰(zhàn)骨藥材樣品進(jìn)行了測(cè)定，其色譜圖有23 個(gè)主要的共有特征峰（占總峰面積的90%以上）。其典型的HPLC-UV指紋圖譜見(jiàn)圖2。其中17 號(hào)峰為柚皮素（與參照物對(duì)照確認(rèn)，色譜圖見(jiàn)圖1）。10批樣品中，單峰面積與總峰面積的比值大于20%的共有峰只有17號(hào)峰，大于10%的共有峰有21 號(hào)峰，大于5%的共有峰有1號(hào)和4號(hào)峰。結(jié)果表明1，2，3………23號(hào)峰在10批樣品的色譜圖中均出現(xiàn)。以柚皮素對(duì)照品保留時(shí)間為參照，計(jì)算各共有特征指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間，相對(duì)保留時(shí)間的RSD小于2.10%（n=10，結(jié)果見(jiàn)表3）。因此標(biāo)定此 23個(gè)峰為共有指紋峰，并據(jù)此建立戰(zhàn)骨藥材的HPLC指紋圖譜。

表3 10批戰(zhàn)骨藥材共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間（略）

2.2.2 共有指紋峰面積與參照物峰面積的比值以柚皮素峰面積為參照，計(jì)算各批藥材供試品共有指紋峰的峰面積比值，結(jié)果見(jiàn)表4。由表4和圖3可見(jiàn)，各批供試品指紋圖譜的重現(xiàn)性較好，但各批樣品間共有指紋峰的相對(duì)峰面積有一定差異。

2.2.3 非共有峰面積供試的10批樣品共有指紋峰面積之和占總峰面積比值平均為93.69 %，則非共有峰面積占總峰面積的比值平均為6.31 %，符合《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求》［10］。

2.3 指紋圖譜的檢驗(yàn)取10批戰(zhàn)骨藥材，按供試品溶液的制備方法操作，分別取各批藥材制成的供試品溶液，按供試品檢測(cè)法進(jìn)行檢測(cè)，并與典型的指紋圖譜相比較，結(jié)果表明各批樣品指紋圖譜相似度較好，共有23個(gè)共有峰，而且各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD均小于3%。結(jié)果見(jiàn)圖3及表3。

3 討論

3.1 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中選擇了多種流動(dòng)相系統(tǒng)：①甲醇-水，②甲醇-醋酸水溶液，③乙腈-水，④乙腈-醋酸水溶液等度和梯度洗脫幾種方式，并對(duì)梯度洗脫程序進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)果表明以“1.2”項(xiàng)下系統(tǒng)為最佳。各色譜峰分離度較好，峰型尖銳，保留時(shí)間適中。

3.2 實(shí)驗(yàn)中對(duì)戰(zhàn)骨藥材供試品溶液進(jìn)行紫外掃描，在274 nm和280 nm有最大吸收。分別在254，274，280 nm和288 nm［11］波長(zhǎng)下測(cè)定指紋圖譜，從色譜圖中的基線、峰型和分離度等因素綜合考慮，選擇274 nm為指紋圖譜的檢測(cè)波長(zhǎng)。

表4 10批戰(zhàn)骨藥材共有指紋峰的相對(duì)峰面積（略）

3.3 不同產(chǎn)地的戰(zhàn)骨藥材指紋圖譜相似度較高，23 個(gè)共有峰相對(duì)保留時(shí)間符合程度較好，但相對(duì)峰面積有一定差異。提示藥材應(yīng)在固定產(chǎn)地的前提下才能保證藥品的一致性，同時(shí)說(shuō)明以簡(jiǎn)單測(cè)定一個(gè)或幾個(gè)成分含量為主的傳統(tǒng)質(zhì)量控制方法已不能真正反映中藥材質(zhì)量，而利用指紋圖譜對(duì)藥材進(jìn)行綜合、宏觀地評(píng)價(jià)是當(dāng)今對(duì)天然藥物質(zhì)量控制的有效手段。

3.4 本實(shí)驗(yàn)所建立的方法，精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性符合指紋圖譜研究的技術(shù)要求［10］，為壯藥戰(zhàn)骨及制劑的質(zhì)量控制提供了一定的科學(xué)依據(jù)，對(duì)壯藥戰(zhàn)骨藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提升進(jìn)行了有益的探索。

圖1 柚皮素HPLC圖譜（略）

圖2 戰(zhàn)骨藥材HPLC指紋圖譜（樣品1#）（略）

圖3 10批戰(zhàn)骨藥材HPLC指紋圖譜（略）

參考文獻(xiàn)

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［9］ 周玉新.中藥指紋圖譜研究技術(shù)［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2002：5.

篇8

關(guān)鍵詞：超高效液相色譜 氯丙嗪 殘留量 豬肉

中圖分類號(hào)：R155.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1674-098X（2014）10（c）-0187-03

Determination of chlorpromazine residues in meat products by ultra high performance liquid chromatography

LIU Chun

（Dongcheng district Center for Diseases Prevention and Control，Beijing，100009，China）

Abstract：Objective： Ultra High Performance Liquid Chromatography（UPLC） method was determination of chlorpromazine residue in pork. Method： The target analyte was extracted form sample with acetonitrile and determined by UPLA. Chromatographic column： BEH C18 1.7 μm× 50 mm×2.1 mm， flow rate： 0.4 mL/min， mobile phase： acetonitrile∶ammonium acetate=60∶40， column temperature： 40℃， detection wavelength： 254 nm， injection volume：10μL.Result：The detection limit was 15.0μg/kg.The linearity ranged form 0 to 1.00 mg/L with the correlation coefficient of 0.9998. The recovery was 87.7% to 101.0%， RSD was 1.2% to 2.6%. Conclusion： The method was suitable for determination of chlorpromazine residue in pork.

Key word：UPLC;chlorpromazine;residues;pork

氯丙嗪（Chlorpromazine，CHL）又稱冬眠靈，屬于吩噻嗪類藥物，是抗精神病類藥的一種，涉及中樞神經(jīng)、植物神經(jīng)、心血管和內(nèi)分泌系統(tǒng)等方面，其中主要被用作鎮(zhèn)靜藥。一些養(yǎng)殖戶因經(jīng)濟(jì)利益的驅(qū)使，在飼料中違規(guī)添加氯丙嗪抑制動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)，從而間接起到催肥作用。氯丙嗪在家畜飼養(yǎng)中的濫用，不僅會(huì)引起動(dòng)物的中毒，還會(huì)通過(guò)在動(dòng)物性食品的殘留直接危害到人類。歐盟早已將氯丙嗪列入禁用清單中，我國(guó)也規(guī)定氯丙嗪禁止用于食品性動(dòng)物。建立豬肉中氯丙嗪的檢測(cè)方法，對(duì)于研究其在豬、禽體內(nèi)的代謝及組織殘留，實(shí)施豬、獸藥殘留監(jiān)控具有重要的實(shí)際意義。

目前主要采用高效液相色譜法，液質(zhì)聯(lián)用法，氣質(zhì)聯(lián)用法，化學(xué)發(fā)光法和免疫分析法檢測(cè)氯丙嗪，采用超高效液相色譜測(cè)定豬肉中氯丙嗪含量鮮有報(bào)道。本文采用乙腈進(jìn)行樣品前處理，超聲波提取，建立了超高效液相色譜測(cè)定豬肉在氯丙嗪的方法。

1 試驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

Waters Acquity UPLC H-Class超高效液相色譜儀（美國(guó)，Waters公司）;3-30K冷凍高速離心機(jī)（美國(guó)，Sigma公司）。

氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥99.0%，CAS：50-53-3，Dr.Ehrenstrfer公司）;乙腈（色譜純，F(xiàn)isher公司）;試驗(yàn)用水為電導(dǎo)率在18 MΩ?cm以上的超純水。

1.2 分析方法

1.2.1 色譜條件

ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱（50 mm×2.1 mm，1.7 μm）;流動(dòng)相乙腈∶乙酸銨=60∶40;檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm;流速0.4 mL?min-1;柱溫40 ℃;進(jìn)樣量5 μL。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

精確稱取氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)品0.0100 g，用少量乙腈溶解，并轉(zhuǎn)移到10mL棕色容量瓶中，用乙腈定容至刻度，此氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度1.00 mg/mL。取氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.00 mL，轉(zhuǎn)移到100 mL棕色容量瓶中，用乙腈定容至刻度，此氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)使用液濃度10.00 μg/mL。4 ℃避光保存，保存期1個(gè)月。

精確吸取氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)使用液0.01 mL、0.50 mL、0.10 mL、0.50 mL、1.00 mL于10 mL棕色容量瓶中，用乙腈定容至刻度，過(guò)0.22 μm尼龍微孔濾膜，即為0.01 μg/mL、0.05 μg/mL、0.10 μg/mL、0.50 μg/mL、1.00 μg/mL的氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液。此溶液注意避光，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.2.3 樣品制備

取適量粉碎混勻的樣品于50 mL離心管中，加25.00 mL乙腈，漩渦混勻30 s，超聲避光提取15 min，12000 r/min離心10 min，避光靜置20 min，取上清液過(guò)0.22 μm尼龍微孔濾膜，上機(jī)測(cè)定。

1.2.4 樣品測(cè)定

在色譜條件下，測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列及樣品。以目標(biāo)化合物保留時(shí)間及特征光譜圖定性;以峰面積為響應(yīng)值，外標(biāo)法定量。

1.2.5 定量計(jì)算

式中：X-試樣中氯丙嗪的含量，單位為微克每千克（mg/kg）。

C-試液中氯丙嗪的含量，單位為微克每毫升（μg/mL）。

V-試樣稀釋總體積，單位為毫升（mL）。

m-試樣質(zhì)量，單位為克（g）。

計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的優(yōu)化

采用不同體積比的乙腈∶水、乙腈∶乙酸銨作為流動(dòng)相，將1.00 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣檢測(cè)，比較出峰情況。綜合考慮峰形、峰寬、出峰時(shí)間，選擇乙腈∶乙酸銨=40∶60作為流動(dòng)相。圖1為氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖。圖2為氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)掃描光譜圖。

按色譜條件進(jìn)行分析，圖3為空白豬肉樣品的色譜圖。圖4為添加1.00 μg/kg氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)品樣品色譜圖。

2.2 方法的線性范圍和檢出限

精確吸取氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)使用液，用乙腈溶液依次稀釋，配制成0.01 μg/mL、0.05 μg/mL、0.10 μg/mL、0.50 μg/mL、1.00 μg/mL的氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液，以氯丙嗪的濃度和峰面積進(jìn)行回歸，得回歸方程y=69121.94x-396.59，相關(guān)系數(shù)=0.9999。

按照取樣10.0 g，定容25.00 mL，以基線噪聲3倍相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)物質(zhì)為檢出限，計(jì)算最低檢出限為7.5μg/kg，最低檢出質(zhì)量濃度為0.01 μg/mL。

2.3 方法的準(zhǔn)確度和精密度

以空白豬肉為測(cè)試對(duì)象，分別添加低（0.25 mg/kg）、中（2.50 mg/kg）、高（5.00 mg/kg）3個(gè)水平的氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)品做加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，以考察方法的準(zhǔn)確度（結(jié)果見(jiàn)表1）。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本方法均回收率為87.7%～101.0%，RSD為1.2%～2.6%，符合方法學(xué)要求。

要獲得氯丙嗪理想的回收率和較低的檢出限，需要注意以下方面：氯丙嗪見(jiàn)光易分解，樣品前處理全程需進(jìn)行避光操作，標(biāo)準(zhǔn)使用液要貯存在棕色容量瓶中;樣品離心后，須避光靜置20 min，使樣品進(jìn)一步沉降分層;微孔過(guò)濾膜須采用尼龍材質(zhì)（Nylon），避免目標(biāo)物吸附在微孔過(guò)濾膜;配制標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)，需采用100%乙腈，避免產(chǎn)生溶劑效應(yīng)。

3 結(jié)語(yǔ)

本方法采用乙腈溶液超聲提取，建立了超高效液相色譜測(cè)定豬肉中氯丙嗪的方法。方法重現(xiàn)性好，靈敏度高，操作簡(jiǎn)便，精密度及準(zhǔn)確度滿意，適用于豬肉中氯丙嗪的日常監(jiān)測(cè)工作。

參考文獻(xiàn)

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篇9

【關(guān)鍵詞】液相色譜；純度分析；油田化學(xué)品原料

Analysis of the Purity of AMPS by HPLC

CHEN Fan-bin FU Jun-fang ZHANG Hao

（Oilfield Chemicals Department， COSL， Yanjiao Hebei， 065201， China）

【Abstract】A method was developed for analyzing of AMPS， a main material of Oilfield Chemicals by HPLC detection. The separation was performed on an agilent ZORBAX SB-AQ（5 μm，4.6×150 mm， Agilent）with Solution 0.01 mol/L KH2PO4（pH=2.3） Methanol （volume ratio 95：5） at a flow rate of 1.0ml/min， the column temperature at 20 ℃， the detection wavelength at 210 nm for VWD，. The Sample from different regions were successfully analyzed by using this method. These results demonstrated that the proposed method is simple， sensitive and reliable for analysis material of Oilfield Chemicals

【Key words】HPLC； Purity analysis； Material of Oilfield chemicals

AMPS（2-丙烯酰胺-2-甲基-丙磺酸）與甲基丙烯酸、丙烯酰胺制成三元共聚物，用于固井水泥外加劑，可起到高溫緩凝作用，可以在高溫高鹽環(huán)境下使用；與N，N-二甲基丙烯酰胺的共聚物可用于油井水泥漿失水劑；與木質(zhì)素磺酸鈣、丙烯酰胺的接枝共聚物，是非常優(yōu)異的水泥分散劑、早強(qiáng)劑、增強(qiáng)劑；AMPS與丙烯酸、四氫苯甲酸、木質(zhì)素磺酸等接枝共聚，可以制備鉆井液分散劑和抗鈣性能好的穩(wěn)定劑、降粘劑、降濾失劑等；AMPS與N-乙烯基吡咯烷酮類的嵌段共聚物，作為三次采油的增粘劑，在高溫、高壓、高剪切條件下使用不發(fā)生降解，穩(wěn)定性良好。

目前AMPS作為有效的改性單體已經(jīng)滲入油田化學(xué)品各個(gè)領(lǐng)域的聚合物改性，很好解決了采油聚合物中抗鹽性、抗高溫性、抗剪切三大棘手問(wèn)題。中國(guó)AMPS最大市場(chǎng)是油田三次采油，作為鉆井液、完井液和壓裂液等。目前中原油田等已經(jīng)將AMPS聚合物作為油田三次采油的化學(xué)品立項(xiàng)，預(yù)計(jì)僅此一項(xiàng)2005年國(guó)內(nèi)將至少消耗1萬(wàn)噸。

目前全球約1/3的AMPS單體用于水處理工業(yè)。AMPS的均聚物或與丙烯酰胺、丙烯酸等單體的共聚物，可作為污水凈化過(guò)程中的淤泥脫水劑；在封閉水循環(huán)系統(tǒng)中用作鐵、鋅、鋁、銅以及合金的防腐劑；還可用于加熱器、冷卻塔、空氣凈化劑和氣體凈化劑的除垢劑、阻垢劑等。國(guó)外大量使用表明，以AMPS作為處理劑用量少，效果優(yōu)于現(xiàn)有聚丙烯酰胺類水處理劑。目前國(guó)內(nèi)一些大中城市污水處理已經(jīng)開始使用AMPS，其中華東年消耗約300噸，華南年消耗約150噸，京津唐年消耗200噸，年總消耗量約650噸，預(yù)計(jì)2005年將達(dá)到1000噸。

目前AMPS已成為國(guó)內(nèi)引人矚目的熱點(diǎn)有機(jī)化工原料，部分科研機(jī)構(gòu)的合成技術(shù)也較成熟，尤其是中國(guó)許多油田處于三次采油期，國(guó)內(nèi)水處理領(lǐng)域用量巨大，都對(duì)AMPS質(zhì)量和數(shù)量提出了更高更多要求。因此，國(guó)內(nèi)在加快建設(shè)AMPS裝置的同時(shí)，應(yīng)加大應(yīng)用研究力度，以促進(jìn)AMPS工業(yè)健康快速發(fā)展。

AMPS單體的純度對(duì)其后續(xù)的加工有著很大的影響，本文建立了一種快速分析AMPS單體純度的方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器、試劑與藥品

HP1100高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent），包括G1311A四元梯度泵、G1315A二極管陣列檢測(cè)器和G1329A自動(dòng)進(jìn)樣器；Milli-Q超純水儀（美國(guó)Milli-Pore公司）；磷酸、磷酸二氫鉀均購(gòu)自北京分析試劑廠，均為分析純；甲醇為Fisher試劑公司色譜純；水為超純水。

1.2 溶液配制

流動(dòng)相的配制：以甲醇體積含量為5%的超純水溶液為溶劑，配制0.01mol/L KH2PO4磷酸鹽緩沖液，并以5%磷酸調(diào)節(jié)溶液pH為2.3，經(jīng)0.45μm水系濾膜過(guò)濾后備用。

1.3 色譜條件

色譜柱：ZORBAX SB-AQ柱（5μm，4.6×150mm， Agilent）；流動(dòng)相：0.01mol/L KH2PO4溶液（用5%H3PO4調(diào)節(jié)pH為2.3）-甲醇（體積比為95∶5）；檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm；流速：1.0mLmin-1；柱溫：20℃；進(jìn)樣量：5μL。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

因?qū)嶒?yàn)室沒(méi)有AMPS的標(biāo)品，所以使用日本的7號(hào)樣品作為標(biāo)準(zhǔn)來(lái)測(cè)定其他樣品的相對(duì)純度。

表1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

根據(jù)前述實(shí)驗(yàn)步驟和條件，按表一將混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（M溶液）逐級(jí)稀釋，得不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，經(jīng)0.45μm水系濾膜過(guò)濾后，以進(jìn)樣5 μL進(jìn)行色譜分析，以對(duì)照品濃度（X）對(duì)峰面積（Y）進(jìn)行線性回歸，得工作曲線：

Y=3178.52682X-2.2716745 （r2=0.9999）

1.5 樣品的測(cè)定

將樣品按照1.4的方法配制，以5ul進(jìn)樣量進(jìn)入色譜分析，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品AMPS純度（%）

1.6 討論

以上分析六種AMPS單體的純度，從測(cè)定結(jié)果（圖1）可以看出，樣品在色譜柱中的保留時(shí)間完全吻合，具有很高的精確度。在實(shí)際的AMPS聚合工作中，同等條件下2號(hào)樣合成效果最好，3號(hào)樣聚合效果最差，與色譜分析的純度結(jié)果一致，說(shuō)明這種方法是可行的。所建立的分析方法不僅用于單體純度的測(cè)定，而且還可應(yīng)用于聚合物開發(fā)、生產(chǎn)過(guò)程中單體轉(zhuǎn)化率的測(cè)定。

由于實(shí)驗(yàn)室缺少AMPS的標(biāo)品采用了日本產(chǎn)7號(hào)樣作為相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)，在以后的檢測(cè)工作中應(yīng)使用AMPS的標(biāo)品作為標(biāo)準(zhǔn)物，以取得準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)。

圖1 AMPS各樣品色譜圖

2 結(jié)論

本文建立了高效液相色譜法測(cè)定AMPS單體的方法，該方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、快速，不僅適用于單體純度的測(cè)定，而且還可應(yīng)用于聚合物開發(fā)、生產(chǎn)過(guò)程中單體轉(zhuǎn)化率的測(cè)定。該方法可用于目前市場(chǎng)上一些油田化學(xué)原料的檢測(cè)分析，便于區(qū)分不同批次樣品純度，方法簡(jiǎn)便易操作。

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篇10

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法 蘭索拉唑 含量測(cè)定

中圖分類號(hào)：O657 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-3791（2015）02（b）-0000-00

蘭索拉唑?yàn)楸讲⑦溥蜓苌铮瑸槔^奧美拉唑之后的新一代的質(zhì)子泵抑制劑，能有效地抑制胃酸分泌，治療胃酸相關(guān)性疾病。國(guó)外大量臨床應(yīng)用證明，蘭索拉唑?qū)ο詽冇泻芎玫寞熜В裳何杖氡诩?xì)胞后作用于壁細(xì)胞質(zhì)子泵即抑制H+/K+-ATP酶的活性，從而持續(xù)抑制胃酸分泌。

蘭索拉唑不耐酸，目前比較普遍給藥方式為口服的蘭索拉唑腸溶片和腸溶膠囊，起效較慢，而改變給藥途徑為靜脈給藥的注射用蘭索拉唑提高了蘭索拉唑的生物利用度，縮短了起效時(shí)間。為保證產(chǎn)品質(zhì)量，我們擬用高效液相色譜法對(duì)其含量測(cè)定方法進(jìn)行研究。

1 儀器與試藥

Agilent 1260高效液相色譜儀；AlltimaTM C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）；MS105型精密電子天平（梅特勒）；蘭索拉唑?qū)φ掌罚ㄅ?hào)：100709-201304，含量為99.8%，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；注射用蘭索拉唑（30mg，以C16H14F3N3O2S計(jì)，自制）；甲醇、三乙胺、磷酸均為色譜純，水為注射用水。

2 含量測(cè)定方法

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，AlltimaTM C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-水-三乙胺-磷酸（600：400：5：1.5）[用磷酸溶液（110）調(diào)節(jié)PH值至7.3]，檢測(cè)波長(zhǎng)為284nm；流速為1.0ml/min；柱溫30℃；進(jìn)樣量20μl。調(diào)節(jié)流動(dòng)相比例使蘭索拉唑峰的保留時(shí)間約為16分鐘。

2.2 測(cè)定法

精密稱定樣品，約含蘭索拉唑15mg，置100ml容量瓶中，加0.1mol/L氫氧化鈉溶液5ml與甲醇-水（60：40）溶液適量，超聲使溶解，用甲醇-水（60：40）溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取蘭索拉唑?qū)φ掌罚y(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。

3 方法學(xué)試驗(yàn)

3.1 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

按照制劑處方，分別稱取18mg、15mg、12mg的蘭索拉唑?qū)φ掌犯?份，分別加入處方量的輔料于同一100ml容量瓶中，加0.1mol/L氫氧化鈉溶液5ml與甲醇-水（60：40）溶液適量，超聲使溶解，用甲醇-水（60：40）溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，續(xù)濾液分別作為測(cè)定濃度120%、100%、80%的供試品溶液，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算測(cè)得量和回收率，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

加入量（mg）

測(cè)得量（mg）

加樣回收率（%）

平均回收率（%）

RSD（%）

18.01

18.07

100.33

100.08

0.42

18.03

17.99

99.78

18.10

18.08

99.89

15.02

15.01

99.93

15.04

15.06

100.13

15.08

15.16

100.53

12.02

12.12

100.83

12.01

11.95

99.50

12.05

12.03

99.83

結(jié)果表明：含量測(cè)定平均回收率為100.08%，RSD為0.42%，準(zhǔn)確度試驗(yàn)符合測(cè)定要求。

3.2 線性范圍試驗(yàn)

儲(chǔ)備液的制備：稱取蘭索拉唑?qū)φ掌?5mg，置50ml容量瓶中，加0.1mol/L氫氧化鈉溶液5ml與甲醇-水（60：40）溶液適量，超聲使溶解，用甲醇-水（60：40）溶液稀釋至刻度，作為儲(chǔ)備液。

精密量取上述溶液3ml、4ml、5ml、6ml、7ml，分別置10ml容量瓶中，加甲醇水（60：40）溶液稀釋至刻度，作為線性試驗(yàn)溶液。分別精密量取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以蘭索拉唑濃度與相應(yīng)峰面積計(jì)算線性回歸方程，y=13263x-368.8，相關(guān)系數(shù)r=0.9994。結(jié)果表明，蘭索拉唑濃度在0.09mg/ml～0.21mg/ml范圍內(nèi)，具有良好的線性關(guān)系。

3.3 重復(fù)性試驗(yàn)

取供試品，照含量測(cè)定項(xiàng)下方法試驗(yàn)，重復(fù)測(cè)定6次，計(jì)算其平均值。

結(jié)果表明：6次測(cè)定的平均含量為標(biāo)示量的101.98%，RSD為0.21%，平行性好，重復(fù)性試驗(yàn)符合測(cè)定要求。

3.4 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品，照含量測(cè)定項(xiàng)下方法試驗(yàn)，每隔1小時(shí)測(cè)定一次，共測(cè)定5次，計(jì)算其平均值。

結(jié)果表明：蘭索拉唑平均含量為標(biāo)示量的101.44%，RSD為0.36%，供試品溶液在室溫條件下5小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

3.5 進(jìn)樣精密度試驗(yàn)

取供試品溶液，精密量取20μl，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次。

結(jié)果表明：蘭索拉唑平均峰面積為11891.5，RSD為0.56%，該方法進(jìn)樣精密度良好。

3.6 中間精密度試驗(yàn)

取供試品，照含量測(cè)定項(xiàng)下方法試驗(yàn)，變動(dòng)因素為不同日期，不同人員。計(jì)算其平均值。

結(jié)果表明：蘭索拉唑平均含量為標(biāo)示量的101.48%，RSD為0.41%，該測(cè)定方法中間精密度良好。

4 樣品含量測(cè)定

取三批供試品，照含量測(cè)定方法分別進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明：三批供試品含量均為98.0%～102.0%之間。

5 討論

建立的高效液相色譜法通過(guò)準(zhǔn)確度試驗(yàn)、線性范圍試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)、溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)、進(jìn)樣精密度試驗(yàn)及中間精密度試驗(yàn)等方法學(xué)試驗(yàn)，表明該含量測(cè)定方法具有準(zhǔn)確、可靠、靈敏度高等特點(diǎn)，可有效控制注射用蘭索拉唑的含量。

參考文獻(xiàn)

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