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摘要:“肝中酮體的生成作用”是與脂類代謝中脂肪酸分解氧化章節相對應的一個驗證性實驗，學生能否規范合格的操作和嚴謹細致的思考，往往影響著實驗成效。我們必須仔細透徹地講解清楚相關理論知識，在實驗教學中要求學生處理好每一個操作細節和關鍵步驟，針對實驗結果還可以鼓勵學生分析實驗方案中的優缺點，提出改進措施。

關鍵詞:高職;生物化學;實驗

在藥學、藥物分析技術和生物制藥技術組成的藥學專業群中，生物化學是一門重要的專業基礎課。而在以就業為導向，以提升學生實踐能力為主要目標的高職學校中，如何上好這門專業基礎課的實驗教學課就顯得尤為重要［1］。“肝中酮體的生成作用”是與脂類代謝中脂肪酸分解氧化章節相對應的一個驗證性實驗［2］，學生能否規范合格的操作和嚴謹細致的思考，往往影響著實驗成效。

1講清原理，讓學生明明白白做實驗

除了成熟紅細胞和腦組織外，幾乎所有組織都能氧化利用脂肪酸，通過活化、穿梭、β－氧化生成乙酰輔酶A，最終徹底分解為二氧化碳、水和大量能量。而在肝細胞內β－氧化生成的乙酰輔酶A則大部分縮合生成乙酰乙酸(70%)、β－羥丁酸(30%)和丙酮(含量極少)，三者合稱酮體。酮體生成酶只存在于肝細胞內，所以本實驗就利用組織對比法，將肝勻漿和其他組織勻漿分別與丁酸底物保溫，底物和酮體生成酶在適宜的條件下將生成酮體，而酮體能使白色的顯色粉轉變成紫紅色，因此可利用顯色反應，對各組合進行對比分析，驗證“肝為酮體生成器官”這一理論。理論上只有既存在底物丁酸，又存在肝勻漿(酮體生成酶系)的這支試管顯色，但是根據多年實踐操作，結果并非如此。因為我們不能忽視酮體“肝內生酮，肝外利用”這一代謝特點，也就是說根據機體狀況，各組織器官其實都有可能出現酮體。肝內組織有已經合成但還沒有運出去的酮體，肝外組織有還未開始分解利用的酮體。所以為了指導學生對稍后實驗結果給出更全面，更科學地分析，講實驗原理時一定會提醒酮體的代謝特點，幫助學生拓展思路。

2規范操作，鼓勵學生邊做邊思考

2．1制備組織勻漿。本實驗選取的是豬肝和豬的肌肉作為組織對比材料。為了提高學生的實驗參與度，掌握實驗各環節的操作要點，學生需要自己用研缽將兩個組織分別研磨直到細胞破碎，釋放出胞內酶和其他物質。在教學中強調學生必須養成高度的責任心和嚴謹的科學態度，如果研磨不徹底，細胞將不能釋放出酶，后續實驗都無法順利進行，所以這是實驗成功的第一步。2．2酮體生成反應。本實驗為定性實驗，按下表用滴管分別滴加四支試管即可。在此步驟中學生最容易犯的錯誤是滴管混用，吸完一種試劑不清洗干凈或新換一個滴管，就直接吸取下一種試劑，尤其是吸取肝勻漿和肌勻漿時，這將引起較大顯色誤差。另外試劑全部滴加完后未認真混勻，也是常見的問題，這將影響酮體的生成量。2．3顯色反應。37度保溫后，各管滴加15%三氯醋酸20滴(用途:終止酮體生成酶活性)，混勻，靜置5min備用。同時取白瓷反應板，在4個凹槽中各加入等量顯色粉，隨后分別用干凈吸管從四支試管中，吸取適量試劑滴加于顯色粉，最后觀察各管的顏色變化。本步驟需注意白瓷反應板各孔的顯色粉量盡量一致，并且顯色粉中有少量亞硝基鐵氰化鈉，有一定毒性，需提醒學生提高安全意識，謹慎操作。其次滴加試劑的滴管必須滴一次，洗一次或換一次，以免干擾正確結果。同時滴加的量只要使顯色粉濕潤即可，而每組自行添加的顯色粉量不一定相同，所以需要每一組學生在滴加第一孔顯色粉時，做簡單摸索，確定需要滴幾滴試劑才能達到要求，隨后幾管試劑可照此操作。2．4結果與分析。因為在講解原理時已經為學生拓展過思路，所以分析實驗結果時，認真聽課、勤于思考的學生完全可以自行分析，而學習能力較弱的學生，通過老師引導，也能說出實驗現象的成因。一號管含肝勻漿和丁酸，顯色最深，因為此管中既有新生成的酮體，又可能存在肝中本就合成卻沒有運輸出去的酮體。二號管含肝勻漿，顯色較一號管淺，比其他管深，雖然沒有底物，不能合成新的酮體，但是應該存在肝中合成卻沒有運輸出去的酮體，故仍然能使顯色粉顯色。三號管只含底物丁酸，因為缺乏酮體生成酶，所以既不能新生成酮體，也不含組織內已有的酮體，完全不顯色。四號管含丁酸和肌勻漿，雖然不能生成新的酮體，但是存在組織內早已轉運進來，但尚未用完的酮體，所以也會淺淺的顯色。通過陰性對照、陽性對照、組織對比和比色法，此實驗即驗證了肝中酮體的生成作用，又進一步體現了酮體的代謝特點，可謂一舉兩得。

3總結

“肝中酮體的生成作用”雖然是一個驗證性實驗，但是面對學習能力較弱的高職學生，必須仔細透徹地將本章節相關理論知識一一講解清楚，使前后知識融會貫通。同時，在實驗教學中根據不斷積累的經驗和實際結果，要求學生處理好每一個操作細節和關鍵步驟，養成高度的責任心，培養解決問題的能力和分析問題的能力。針對此次實驗結果還可以鼓勵學生分析實驗方案中的優缺點，提出改進措施，從而培養學生的探索精神和創新精神。總之，實驗教學既要鍛煉學生的動手能力，也要鍛煉動腦能力，學會分析問題，解決問題。

參考文獻

［1］汪燕芳．生物化學實驗教學改革與實踐［J］．實驗室科學，2017，20(1):91－93

［2］劉家秀．生物化學［M］．北京:科學出版社，2015

作者:諸戌嫻 單位:無錫衛生高等職業技術學校