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火麻仁為桑科植物大麻的干燥成熟種子。具有潤腸通便，滋養補虛的功效，常用治療老年虛性便秘和習慣性便秘。《神農本草經》云其“味甘、平。主補中益氣，肥健不老”。現代藥理研究表明，火麻仁可以從多個方面發揮抗衰老的作用［1-2］。皮膚的衰老是整體衰老的直觀反映、是估價機體年齡的第一個指標，中醫學和現代醫學均有論述論及皮膚老化和毛發變白與衰老關系最密切，因此研究藥物對皮膚老化指標的影響也是評價該藥物抗衰老作用的重要指標之一［3-5］。火麻仁的傳統應用的記載，如《太平圣惠方》中就有“神仙服大麻子益駐顏色變鬢發延年不老方”的記載;《日華子》曰火麻仁:“補虛勞……長肌肉，益毛發，去皮膚頑痹……”。為進一步深入和更全面的研究和闡明火麻仁的抗衰老作用和機制，本文采用現代藥理學方法研究了火麻仁油對皮膚老化的影響，以探討火麻仁的整體抗衰老效應，為開發、利用火麻仁，研制防治老年病和抗衰老相關產品奠定基礎。

1材料

1.1藥物

火麻仁藥材，經河南中醫學院中藥資源鑒定教研室陳隨清教授鑒定為桑科植物大麻CannabisstativaL．的干燥成熟種子;七寶美髯丸由佛山德眾藥業有限公司生產(國藥準字Z44022830，批號04007)。火麻仁油由上述火麻仁生品去皮后冷榨制得(出油率為21.65%，比重為0.907g•mL－1)。

1.2試劑

超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒，批號20050525;脂褐質Lpf試劑盒，批號20050523，丙二醛(MDA)試劑盒，批號20050523;羥脯氨酸(Hyp)試劑盒(堿水解法)，批號20050528;考馬斯亮藍試劑盒，批號20050523。上述試劑均購自南京建成生物工程研究所。天狼星紅，批號20040823，上海華碩精細化學品有限公司(Chroma進口分裝);D-半乳糖，批號20030926，上海恒信化學試劑有限公司生產;三聚乙醛、冰乙酸、甲醛溶液、乙醇等均為市售分析純。

1.3儀器

JY6001型電子秤(上海精科公司天平儀器廠)，FA200KA型分析天平(上海精密電子儀器有限公司)，LD4-2型離心機(北京醫用離心機廠)，D2kw-C型恒溫水浴鍋(北京市光明醫療儀器廠)，UV-2201分光光度計，日本島津公司;RT-MR2100勻漿機，SwitzerlandKINEMATICAAG公司。1.4動物昆明種小鼠，體重18～22g，雌雄各半，購自河南省醫學實驗動物中心(編號2003LA－014.合格證號410115)。

2方法

2.1動物分組及給藥

小鼠根據性別和體重，隨機分成6組，每組10只，雌雄分籠飼養，分別是:空白對照組(生理鹽水組)、模型對照組(D-半乳糖組)、火麻仁油高、中、低劑量組(12.0，6.0，3.0mL•kg－1)、七寶美髯丸(陽性對照)組(4g•kg－1)。空白對照組每天頸背部sc生理鹽水(用量為10mL•kg－1)，1h后ig給予空白對照劑(取1mL吐溫-80和0.5gCMC-Na，加生理鹽水至100mL用量為20mL•kg－1)。其他5組每只小鼠按10mL•kg－1sc1%D-半乳糖水溶液，1h后各給藥組小鼠按20mL•kg－1ig給與不同劑量試驗藥物，連續42d。實驗過程中，每5d各鼠稱重記錄1次，每日觀察小鼠的皮毛色澤、飲食、飲水、大小便、精神活動情況等。末次給藥2h后處死小鼠，取標本，進行各項指標的測定。

2.2皮膚樣本的處理

將小鼠處死立即剝皮膚，留取1g待測含水量用;其余迅速用5%硫化鈉溶液脫毛后即用清水沖洗干凈。取背部皮膚0.5cm×0.5cm大小，迅速放入10%中性甲醛液中固定，擬作組織切片進行組織形態學觀察;余皮膚取下后迅速冰凍保存，擬作皮膚組織勻漿及測定皮膚羥脯氨酸之用。各指標所選取材部位相同。

2.3指標測定

2.3.110%皮膚勻漿的制備取脫毛皮膚組織0.5g，經預冷生理鹽水漂洗，除去皮下脂肪和其他結締組織，濾紙拭干，稱重，量筒量取該組織塊9倍質量預冷生理鹽水，用勻漿機制成10%組織勻漿(在低溫環境中使組織細胞完全破碎，顯微鏡下觀察內容物全部游離在液相中)。

2.3.2各項指標的測定測皮膚勻漿中Lpf，SOD，MDA，Hyp含量或活力，均根據測試盒所附方法、步驟測定。

2.3.3皮膚中水分含量的測定采用烘干法按2.3的方法取1g左右皮膚，精密稱取濕重后置烘箱中，于80℃烘干12h，稱其干重，計算皮膚含水量。

2.3.4皮膚組織病理學形態觀察取小鼠脫毛皮膚，固定于10%的甲醛溶液中，脫水、石蠟包埋、切片。HE染色法染色，于光鏡下觀察表皮及真皮厚度、毛孔及毛囊的狀態變化。

2.3.5統計學處理數據分析采用SPSS13.0軟件包，計量資料數據以x珋±s表示，組間比較采用單因素方差分析。P＜0.05有統計學意義。

3結果

3.1對衰老模型小鼠皮膚組織勻漿中SOD，MDA，Lpf的影響與空白對照組相比，模型組小鼠皮膚勻漿中SOD活力均顯著下降(P＜0.01)，MDA、Lpf均顯著升高(P＜0.01)，說明造模成功。火麻仁油高、中劑量組、七寶美髯丸組小鼠皮膚勻漿中SOD活力增高(P＜0.01或P＜0.05)。火麻仁油高劑量組、七寶美髯丸組的MDA，Lpf以及中劑量組的MDA含量均顯著降低(P＜0.01，或P＜0.05);火麻仁油低劑量對以上指標影響不明顯。見表1。

3.2對衰老模型小鼠皮膚勻漿中Hyp和皮膚含水量的影響與空白對照組相比，模型組小鼠皮膚勻漿中Hyp、皮膚含水量均顯著減少(P＜0.01)。與模型組小鼠相比，火麻仁油高、中劑量組、七寶美髯丸組小鼠皮膚勻漿中Hyp、皮膚含水量均顯著提高(P＜0.01，或P＜0.05);火麻仁油低劑量對皮膚含水量及Hyp含量的影響不明顯。見表2。

3.3皮膚組織病理學形態觀察空白對照組:各鼠取背部相同部位皮膚經HE染色，光鏡下可見小鼠皮膚形態正常，表皮的基底層、棘細胞層、顆粒層及角質層界限清楚，真皮位于表皮下面，此層內有血管、汗腺、毛囊和皮脂腺等;經特殊染色后觀察可見小鼠皮膚真皮膠原纖維束細長，染呈紅色，胞體豐富，排列成束狀，緊密，呈波紋狀，彈力纖維略細長，數量豐富，呈波紋或呈鉤狀，染呈紫黑色，排列均勻、緊密，纏繞于膠原纖維束中間，于毛囊周圍呈環形排列。見圖1。亞急性衰老模型組:經HE染色，光鏡下可見皮膚組織生長受到障礙，真皮層明顯變薄，毛囊與皮脂腺數量銳減;經特殊染色后觀察可見膠原纖維層減少，排列疏松，部分彈力纖維明顯斷裂，排列紊亂，少部分彈力纖維分布于環繞毛囊周圍，呈環形排列，其總數量明顯稀少。見圖1。火麻仁油高劑量組:可見小鼠皮膚生長良好，毛囊數較亞急性衰老模型組明顯增加;膠原纖維束一般，呈波紋狀排列還緊密，彈力纖維著色深染。散在于真皮區域內和環繞毛囊周圍的彈力纖維總數量較正常小鼠減少。見圖1。火麻仁油中劑量組:試驗小鼠皮膚真皮厚度略有增加，毛囊數增加不明顯;膠原纖維和彈力纖維情況與火麻仁油高劑量組相似。見圖1。火麻仁油低劑量組:真皮厚度、毛囊數未見明顯增加;膠原纖維和彈力纖維情況與火麻仁油高劑量組相似。見圖1。七寶美鬢丸組:真皮厚度和毛囊數較亞急性衰老模型組均有增加;膠原纖維束中度粗細，呈波紋狀排列，不甚緊密，彈力纖維著色淺染，總數量較空白對照組呈減少趨勢。見圖1。

4討論

火麻仁是同時具有補益與潤下作用的傳統中藥，本課題組前期采用鵪鶉、小鼠、家蠶等多種動物模型研究了火麻仁的抗衰老作用［8-10］，表明火麻仁對實驗動物的循環系統、免疫系統、消化系統的功能或作用有顯著促進或改善作用，也表現出顯著延長家蠶壽命的作用［11］。研究結果提示火麻仁具有延緩衰老作用，并可能與其良好的抗氧化和清除自由基活性有關［2，9-10］。根據中醫“藏居于內，形見于外”的論點，說明皮膚衰老與內臟的衰老以及整體衰老具有密切的相關性，皮膚的衰老指標可以作為說明機體整體衰老特征之一［12］，皮膚的狀態往往作為估價機體年齡的第一個指標［13］。現代研究表明超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和脂褐素(Lpf)等是直接關切生物體內“氧化”損害與“抗氧化”的相關指標［14-15］，而它們有可能是引起或延緩諸如皮膚衰老、皮膚褐斑的關鍵因素［16-18］。皮膚中羥脯氨酸(Hyp)和水分的含量常常是評價皮膚狀態的重要指標，其中Hyp大量存在于皮膚的膠原蛋白和彈性蛋白中，膠原蛋白和彈性蛋白都具有一定的防老化和促再生作用，共同維持著皮膚的光滑性、柔順性和彈性，因此常用皮膚中Hyp含量來作為皮膚衰老的指標［19］。火麻仁油中不飽和脂肪酸的含量高達90%以上，具有良好的清除自由基和抗氧化作用［1］，同時這些必需脂肪酸極易滲入皮膚表層甚至深層，增強表皮細胞的水合和保濕作用，減少經皮水分損失［20］;其潤下通便作用則能及時排出腸道內的諸多毒素，同樣有助于清除體內自由基，而通過排除腸道毒素也有助于防治一些皮膚疾患［21］。本文觀察了火麻仁對亞急性衰老模型小鼠皮膚相關指標的影響，結果表明它能夠提高皮膚內SOD活性、清除過氧化物、改善蛋白質代謝、提高皮膚含水量以及改善皮膚的形態功能等，有很好的抗衰老作用，本研究豐富了火麻仁油抗衰老的理論內涵，并為它的實際應用提供了參考依據。