亳菊生產技術論文
時間:2022-05-23 09:07:46
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1亳菊脫毒生產技術
1.1培養基準備
基本培養基為PP,添加6-BA0.05mg/L、白砂糖20g/L、瓊脂粉4.5g/L,將各種物質混合后定容,pH調節至6.0,分裝到350mL廣口瓶中,每瓶裝50mL,在壓力0.1MPa、溫度121℃下滅菌15min,冷卻后備用。
1.2材料采集和消毒
本試驗取尚未木質化的亳菊莖尖作外植體。選取長2cm左右的嫩芽,去掉外邊葉片后,用洗衣粉水浸洗1~2min,然后用流水沖洗30min。在超凈工作臺上用75%酒精消毒30s,再用0.05%升汞溶液消毒10min,無菌水沖洗6次,用無菌紗布把材料表面水吸干后,置于已消毒的燒杯中備用。
1.3莖尖剝取和培養
在解剖顯微鏡下,左手拿鑷子將芽夾住,右手用解剖針逐層剝取外層葉片,直至留1~2個葉原基。將莖尖迅速切下,接種到莖尖生長培養基PP+6-BA0.05mg/L+2%糖上,每瓶接種1個莖尖。為確保莖尖的成活率,整個剝取過程應在較短時間內完成。莖尖培養分2個過程,先置于溫度23~25℃下暗培養3d,再在光照強度2200~2500lux的培養室中培養,光照時間12h/d。培養10d后,莖尖開始長大,并逐漸轉綠,30d后長成小植株,每個成活的莖尖單獨建系。
2增殖培養
亳菊組培苗增殖采用2種方式。第1種方式是采用芽繁芽的方式進行增殖,將啟動培養中獲得的小芽接種到培養基PP+6-BA0.1~0.5mg/L+2%糖中,在溫度23~25℃、光照強度2200~2500lux、光照時間12h/d的條件下培養30d,增殖比例達1∶4以上。這種增殖方法使培養基中的細胞分裂素含量相對較高,極易出現弱苗,且玻璃苗的比例較高。第2種增殖方式是通過單株切段的方式進行微扦插,將培養的單株切割成1cm左右的頂芽和莖段,莖段帶1~2片葉,接種到培養基PP+6-BA0.02mg/L+2%糖中,頂芽和莖段分開接種。頂芽接種7d后開始生長,30d后芽生長至5~6cm;莖段接種后10d左右,側芽開始生長,培養30~35d后,側芽生長至4~5cm,然后進行重復微扦插,平均繼代增殖比例可達1∶3.5以上。在實際生產中一般采取第2種增殖方式。
3生根培養
將頂芽或莖段接種到生根培養基PP+IBA0.05mg/L+2%糖中,接種后10d開始陸續長根,同時芽開始生長,培養30d后,長至高度4~5cm、根3~5條、根長2~3cm,生根率可達100%。
4脫毒組培苗移栽
將長好根的試管苗取出,洗掉根部的培養基,再移栽到裝好基質(泥炭和珍珠巖以體積比3∶1拌勻)的50孔穴盤中。組培苗移栽至穴盤后澆透水,苗床應搭小管棚覆膜,保持80%~90%的空氣濕度,并覆蓋防蟲網。7d后逐漸掀開薄膜放風,然后澆1次透水,15d后完全除去薄膜,并視基質的干濕程度澆水。30d左右完成組培苗的馴化過程,使成活率達90%以上。
5病毒檢測
亳菊病毒病的檢測采用田間觀察法和指示作物法。田間觀察法具有一定的缺陷,這是因為大多數病毒病癥狀為花葉、黃化、畸形,在癥狀上容易與非侵染性病害(如缺素癥、空氣污染所引起的病害等)相混淆。指示植物法是亳菊病毒檢測的基本手段,亳菊體內的一些病毒可采用汁液接種法接種到其他草本植物(指示植物)上,然后根據指示植物的感病表現,研究病毒的生物屬性特征并進行種類鑒定,常見的指示植物為黃瓜、中國構祀、千日紅等。采用本研究的脫毒種苗獲得技術生產的各株系種苗,均未檢測出帶病毒。
作者:陳權肖建梅孫建單位:上海孫橋現代溫室種子種苗有限公司上海市農業科學院
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