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1白僵菌高孢粉生產技術要點

土洋結合法生產工藝流程，主要包括以下技術環節。即原種篩選及固定、初級原種培養、中期菌液擴大、固體料擴大、高孢粉干燥、原粉提取、成品檢驗和包裝。

1.1原種篩選及固定

人工選育或在林區選定被菌粉感染的僵蟲或僵蛹，通過培養、分離和轉種，即可得到高品質菌原種。

1.2原種培養

1.2.1營養料的配制

取米粉35份、糖4份、瓊脂4份、水適量（pH值自然），將米粉放入清水中煮沸，繼之選用干凈紗布過濾去剩余物殘渣，然后加入瓊脂、糖，經過充分攪拌，等待瓊脂溶化后再裝入試管內，蓋好試管塞；營養料灌入量以試管容積的1/5為宜，5~10支一捆放人高壓滅菌鍋中進行高溫滅菌30min，并將其趁熱擺成斜面，以便于后面的接種。

1.2.2轉種和培養

嚴格要求在無菌條件下操作，于配制好的試管培養基中接入高品質菌原種，將其置于25℃溫度下培養。經過1~2d后，菌絲即可基本布滿料面；3～5d后開始形成孢子，此時可適當調高培養室溫度，以加速其高品質菌原種孢子的形成，大約有6～8d的時間即可完成孢子發育。

1.2.3質量檢查

高品質菌原種，其菌絲呈白色茸毛狀，生長豐滿，菌苔光滑平坦，孢子形成快且孢子層厚實，輕輕碰敲試管壁可發現有很多孢子粉掉落或飛揚。

1.3初級菌種培養

營養料的配制與前期相同，將培養好的菌原種接入三角燒瓶中，放在搖床上震動，溫度控制在25~28℃，培養48h。

1.4中期菌液擴大

1.4.1營養液的配制

按照玉米面∶麥麩∶水=2∶3∶10的比例，放入鐵制培養罐中攪拌均勻后煮熟、過濾，再將其裝入60只鋁制罐中（每只鋁制罐10~12kg），采用高壓滅菌30min后備用。

1.4.2轉種培養

在確保無雜菌污染的條件下，將優質菌種接入已經準備好的營養液中，完成接種后將瓶子放置于25~28℃條件下進行培養，環境溫度不得超過32℃，否則易造成所接種的菌種死亡；培養48h待菌絲長滿瓶壁，良好的菌液呈顯醬紅色、粘稠狀，此時結束培養，將其移放到比較安全的地方待用。

1.5固體轉種生產

1.5.1固體基料的配制

按麩皮∶谷殼∶大米=4∶4∶2比例，拌勻后裝入線制麻袋（每袋15～25kg為宜）扎緊袋口，加溫加壓滅菌（100℃、2～3h）。

1.5.2轉種生產

將滅菌后的固體基料，放入已經過充分消毒的培養生產室內，待料溫下降至到25～28℃之間，可在一般的自然環境中進行接種。接種量：菌種和固體基料的比例通常控制在15∶100。接種時需要多人配合，1人操作倒出菌種，多人輔助進行手工拌料，菌種和固體基料經過充分手工拌勻后倒入木質或塑料盤中拌好、鋪平，厚度要求控制在3～4cm之間。

1.5.3白僵菌生長期間管理

白僵菌生長期間，根據其不同的生長階段，要合理控制好溫度，這是大床發酵成敗與否的關鍵，適時進行上下調盤，保證菌絲生長均衡勻稱。

1.5.3.1孢子產生期間

其孢子產生前期最合適的溫度是在24~26℃，在生長的第1階段（即孢子萌芽前期），必須將環境溫度控制在21～23℃范圍內，因為此階段不產生熱量，所以室溫約高于料溫2～3℃，從而滿足了此期間對溫度的要求。到了孢子萌芽階段，特別是在轉種24h之內，一定要嚴格控制料溫，維持在25℃以下就能有效地阻止雜菌污染。

1.5.3.2菌絲生長中期

當孢子萌芽后，其芽管迅速增長而轉入菌絲生長中期，若條件適宜接種48h菌絲快速生長，可以布滿整個料盤，此時固體料開始凝結成塊；由于菌絲生長產生較多熱量，會導致料溫快速上升，48h達30~35℃，達到最高峰值；以后穩定至72h左右，菌絲生長基本結束。料盤內外都呈現出一片白色菌絲層。此階段應嚴格控制溫度在33℃以下，一旦超過33℃雖然菌絲生長旺盛，但會導致菌絲死亡或固化，不產生孢子或孢子量少。

1.5.3.3孢子生長階段

菌絲生長發育結束（即接種72h）后，很快轉入孢子生長階段。孢子產生的最適溫度為26℃左右，此階段培養室溫度應控制在26~28℃；因為此時料溫已經恒定，約高于室溫2～3℃，固體菌料會逐漸變干，通常在第7d即可出料。將固體菌料倒扣在鋪有報紙的竹席上，放置于室溫30～35℃的干燥通風房間內，至第10d孢子達到充分發育，固料呈現白色松散狀態，即可進行下一步的干燥處理。

1.6高孢粉干燥

通常放在室內或大棚通風處陰干，或在室內低溫干燥，時間約為7~10d。

1.7原粉提取

利用負壓原理，將干燥好的混合菌料進行一、二、三級提取，一級分離稻殼、麥麩，二級分離破碎稻殼、麥麩及其它細料，三級收集高孢粉（孢子含量1000億個/g）

1.8產品質量檢查

1.8.1直觀檢查

用手指接觸到高孢粉產品時有光滑感，白色略黃粉霧飛揚，粉霧越濃，說明孢子含量越高、質量越好。

1.8.2鏡檢

在顯微鏡下檢查高孢粉產品的孢子含量，成品含活孢子數1000億/g以上為好。

1.9產品包裝

高孢粉產品干燥后，要求用雙層塑料袋密封包裝，以防其回潮；要將其放在低溫干燥處或冷藏，不能多層疊放，以免因孢子的吸呼作用增溫而引起孢子死亡。

2白僵菌高孢粉在生物防治中的應用

利用白僵菌高孢粉防治或預防農林業害蟲，已有較長的歷史。白僵菌的孢子能夠在任何條件通過感染達到殺滅害蟲的目的。據調查，白僵菌在我國可寄生15個目、159個科的800余種昆蟲，對自然環境比較安全，長期使用害蟲也產生不了抗藥性，并可與許多化學農藥（殺蟲劑、殺螨劑、殺菌劑等）同時或混合使用。目前白僵菌已廣泛用于松毛蟲、玉米螟、蠐螬、蝗蟲、馬鈴薯甲蟲、松褐天牛、茶蟬、桃小食心蟲等農林害蟲防治。

2.1白僵菌對森林害蟲的感染機理

白僵菌感染害蟲的方式主要通過皮膚而進入體內，但個別也通過消化道或氣孔感染蟲體。白僵菌孢子附著于寄主表皮，當滿足條件時就開始感染，生出芽管，同時分泌胞外蛋白酶等多種酶溶解昆蟲表皮，以利于芽管的侵入。漸漸生長為菌絲，直接吸取昆蟲體內養分而生長，菌絲又生長出新的孢子。如此反復感染、循環，使昆蟲血淋巴中到處游離著這種菌絲和孢子，從而中斷昆蟲體內的血液循環。菌絲代謝產物草酸鹽類在血液中漸漸積累，造成血液的酸堿度下降，引起理化性質的改變，最終導致昆蟲的死亡和干枯。

2.2白僵菌高孢粉在林業害蟲防治中應用（以皖東馬尾松毛蟲防治為例）

2.2.1施菌季節和天氣

白僵菌在22~28℃、相對濕度80%的條件下生長、發育良好，為此皖東地區主要選擇在4月份至越冬代幼蟲期使用，以及第一代幼蟲（6月上旬）、第二代幼蟲（9月下旬）發生時使用。施菌時間一般在陰雨天后或早晨露水未干時或傍晚時分，微風有利于菌粉擴散、釋放。

2.2.2施菌方式和用量

白僵菌可重復擴散、感染、蔓延，施菌時，首先要摸清蟲情，找準蟲源地，根據蟲口密度和蟲株率大小，分別采取機械或人工全面噴灑、帶狀噴灑、點狀噴灑，原粉用量10~15g/667m2，可稀釋后使用。

2.2.3防治效果

根據滁州市采用我廠生產的白僵菌高孢粉防治馬尾松毛蟲試驗，松毛蟲能持續、重復感染，造成不同蟲齡的活體松毛蟲大量死亡，并且安全、無污染，對人蓄無害，防治效果一般可達85%以上，局部可達100%，連續使用效果更佳。可用于長期防治大面積、低蟲口密度馬尾松林松毛蟲危害，做到有蟲不成災。

2.3白僵菌高孢粉在農業害蟲防治中的應用（以吉林玉米螟防治為例）

2.3.1菌種劑型篩選

根據不同地區玉米螟田間發生、危害規律及各種因素的影響，可選擇不同的劑型。目前有4種粉、液劑劑型可用于大田玉米種植區選擇；有2種粉、液劑劑型可供玉米（甜、粘玉米）分期播種田防治玉米螟選擇。

2.3.2防治方法

防治方法有2種，分別是噴粉和噴霧。一是封垛（秸稈垛）防治法，主要是針對玉米秸稈垛內的越冬代老熟幼蟲，殺死越冬玉米螟老熟幼蟲，降低化蛹率。在冬末春初越冬幼蟲剛剛復蘇化蛹前（有越冬幼蟲爬出洞口活動中），對殘存的秸稈，逐垛噴撒高孢原粉封垛進行防治。用量是每m2垛面用含1000億/g孢子的菌粉10~15g噴一個點，方法是將噴粉管插入垛內，搖動，當垛面冒出菌粉即可。也可用含1000億/g孢子的白僵菌粉加滑石粉或草木灰按1∶100充分混勻，每667m22～3kg，用機動或手搖噴粉器噴粉。二是在玉米生長心葉末期，應用高孢粉粉劑或液劑向植株噴粉或噴霧，防治玉米螟第一代幼蟲。三是釋放顆粒劑防治，在田間玉米螟幼蟲蛀莖危害前釋放，以達到殺死田間玉米螟幼蟲的目的。2.3.3防治效果使用高孢粉原粉防治玉米螟防治效果可達80%以上，方法簡單易行，防治效果極佳，能保護害蟲天敵，無環境污染，對人蓄安全，同時節約成本，增產顯著。

3白僵菌在農林有害生物防治中的應用前景展望

針對白僵菌在實際應用中存在的殺蟲效果較慢、防治效果不穩定、釋放方法不易操作、產品相對其它藥物成本偏高等缺點，嘗試通過白僵菌制劑與化學殺蟲劑或其他生物殺蟲劑混配來彌補，并且已經取得了較好的成效。例如采用白僵菌與綠僵菌混合使用，其殺蟲效果就優于單獨使用白僵菌的效果。隨著科學技術的不斷拓展，進一步對白僵菌的生產工藝加以改進，以方便于白僵菌高孢粉產品的運輸與應用，一定會研究出效果穩定、釋放簡捷的高效產品。加大宣傳力度，促進高效白僵菌制劑等相關成果和技術的推廣與應用，前景十分看好。開發新的白僵菌助劑、劑型，創新化學農藥與白僵菌制劑混合使用技術等，也有著誘人的魅力。盡管目前還存在著一些問題和困難，但隨著研究的不斷深入和技術的不斷創新，劑型多樣白僵菌高孢粉制劑將會更廣泛地應用于農林害蟲的防治。

作者:駱家玉單位:安徽省國有沙河集林業總場