導(dǎo)語：腎石通顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)論文一文來源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

1儀器與試藥

1.1儀器WatersTM2695-2996（美國）高效液相色譜儀：包括2695型泵，2996型二極管陣列檢測器，自動進(jìn)樣器，EmpowerTM數(shù)據(jù)處理軟件；島津AEG-45SM電子天平（日本）。

1.2試藥原兒茶醛對照品（中國藥品生物制品鑒定所提供，供含量測定用，批號0810-00004）；腎石通顆粒（重慶太極集團(tuán)桐君閣藥廠提供）；甲醇為色譜純試劑，水為超純水，其它試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1定性鑒別

2.1.1延胡索薄層鑒別［2］取本品30g，研細(xì)，加乙醇140ml超聲提取兩次，濾過，合并濾液并蒸干，殘渣加水溶解，用氯仿80ml提取兩次，合并氯仿液，氯仿層蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為延胡索供試品溶液；取缺延胡索的陰性樣品同法制成缺延胡索的陰性對照液；取延胡索對照藥材3g同法制成延胡索藥材對照液；另稱取延胡索乙素對照品適量，加甲醇制成每毫升含0.3mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液10μl，陰性對照液10μl，藥材對照液10μl，對照品溶液2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-氯仿-甲醇（7.5∶4∶1）為展開劑，預(yù)先飽和30min，在室溫下展開，取出，晾干。用碘熏20min，取出，揮盡板上附著的碘，置紫外光燈（254nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對照無干擾。見圖1。

2.1.2丹參的薄層鑒別取“2.1.1”中氯仿萃取后的水層再用醋酸乙酯80ml提取2次，合并醋酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為丹參供試品溶液；取缺丹參的陰性樣品同法制成缺丹參的陰性對照液；取丹參對照藥材0.5g同法制成丹參藥材對照液；另稱取原兒茶醛對照品適量，加甲醇制成每毫升含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述4種溶液各5～10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-丙酮-甲醇-甲酸（10∶2∶1∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鐵溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對照無干擾。見圖2。

2.1.3王不留行的薄層鑒別［2］取“2.1.2”中醋酸乙酯萃取后的水層再用水飽和的正丁醇80ml提取2次，合并正丁醇提取液，蒸干，殘渣加水適量使溶解，上D101大孔樹脂柱（D101型，柱長8cm，內(nèi)徑1cm），用水洗至洗脫液無色，再用30%乙醇60ml洗脫，收集乙醇洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇1ml溶解，作為王不留行供試品溶液；取缺王不留行的陰性樣品同法制成缺王不留行的陰性對照液；另稱取王不留行對照藥材粉末0.5g，加乙醇30ml超聲提取兩次，20min/次，濾過，合并濾液并蒸干，殘渣加水15ml使溶解，用醋酸乙酯30ml提取2次，棄去醋酸乙酯層，水層再以水飽和的正丁醇40ml提取2次，合并正丁醇提取液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為王不留行對照藥材溶液；同法制成王不留行藥材溶液。吸取上述4種溶液各5～10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以水飽和正丁醇-醋酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛的乙醇制硫酸溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對照無干擾。見圖3。

2.1.4牛膝的薄層鑒別［2］取本品30g，研細(xì)，加乙醇140ml超聲提取兩次，20min/次，濾過，合并濾液并濃縮至約20ml，加鹽酸2ml，沸水浴中回流1h，濃縮至約8ml，加水15ml，用石油醚（60～90℃）共50ml提取2次，合并石油醚液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；取牛膝對照藥材同法制成藥材對照液；缺牛膝的陰性對照液同法制成缺牛膝的陰性對照液；另稱取齊墩果酸對照品適量，加甲醇制成每毫升含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述4種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇（30∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同的斑點(diǎn)。陰性對照無干擾。見圖4。

2.2含量測定

2.2.1色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性色譜柱為DikmaDiamonsilC18（4.6mm×150mm，5μm）；流動相為甲醇-0.05%磷酸溶液（15∶85）；流速為1.0ml/min；檢測波長280nm；柱溫30℃。理論板數(shù)按原兒茶醛峰計算應(yīng)不低于3000。

2.2.2對照品溶液的制備精密稱取原兒茶醛對照品適量，加甲醇制成每毫升含4μg的溶液，搖勻，即得。

2.2.3供試品溶液的制備取本品顆粒約3.0g，精密稱定，置錐形瓶中，加入70%乙醇超聲提取3次，30ml/次，30min，離心，合并上清液，水浴濃縮，殘渣用甲醇-水（15∶85）溶解并定容于25ml量瓶，搖勻，取上清液，用0.45μm濾膜濾過，作為供試品溶液。

2.2.4系統(tǒng)適用性實(shí)驗分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各20μl注入高效液相色譜儀，色譜圖見圖5～7。原兒茶醛保留時間約為17.5min，與其他組分分離良好(R>1.5)，陰性對照色譜圖在原兒茶醛峰位置無干擾。

2.2.5線性關(guān)系考察精密稱取原兒茶醛對照品4.58mg置25ml容量瓶中，用甲醇溶解，定容。配制成濃度為0.716，2.863，11.450，45.800，183.200μg/ml的對照品溶液，精密吸取上述各對照品溶液20μl，依選定的色譜條件進(jìn)行測定，以原兒茶醛的濃度為橫坐標(biāo)，其峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，計算回歸方程為：Y＝1.29×108X+6180（r＝0.9999），表明原兒茶醛在0.0143～3.6640μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

圖5對照品色譜圖圖6供試品色譜圖圖7缺丹參陰性色譜圖

2.2.6精密度實(shí)驗精密吸取同一對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣測定6次，20μl/次，測定原兒茶醛峰面積積分值，結(jié)果RSD為0.30％(n=6)。

2.2.7穩(wěn)定性實(shí)驗取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8h各進(jìn)樣1次，測定原兒茶醛峰面積積分值，結(jié)果RSD為0.66％，表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8重復(fù)性實(shí)驗取同一批號樣品（批號040501）粉末5份，精密稱定，照“2.2.3”中方法制備，分別測定樣品中原兒茶醛的含量，結(jié)果RSD為2.80％。表明重現(xiàn)性較好。

2.2.9回收率實(shí)驗精密稱取已知含量的本品（批號040501）粉末5份，分別精密加入濃度為26μg/ml的對照品溶液2.0ml，照“2.2.3”中方法制備5份供試品溶液，測定原兒茶醛含量，計算回收率。回收率測定結(jié)果見表1。結(jié)果表明本品具有良好的回收率。表1加樣回收實(shí)驗結(jié)果

2.3樣品含量測定按“2.2.3”項下方法制備3批中試樣品，分別注入液相色譜儀，測定樣品中原兒茶醛的含量。3批樣品結(jié)果見表2。表23批樣品結(jié)果

3討論

3.1薄層鑒別王不留行的薄層鑒別主要針對其中的生物堿類［3］與皂苷類成分，研究中發(fā)現(xiàn)很難鑒別出生物堿類成分，因此采用王不留行對照藥材為對照，來鑒別皂苷類成分；延胡索以延胡索乙素為對照品進(jìn)行鑒別，專屬性好；丹參以其中的水溶性成分原兒茶醛為鑒別指標(biāo)，專屬性好；對牛膝的鑒別采用將其中的三萜皂苷水解成齊墩果酸后，以齊墩果酸對照品為指標(biāo)進(jìn)行鑒別，專屬性好。因此薄層鑒別最終采用對王不留行、延胡索、丹參、牛膝進(jìn)行鑒別。

3.2含量測定本實(shí)驗對樣品中原兒茶醛的提取方法進(jìn)行了摸索，分別考察了不同濃度的乙醇和提取次數(shù)對原兒茶醛含量的影響。最后確定了提取條件為70%乙醇提取3次。

腎石通顆粒的原標(biāo)準(zhǔn)無薄層鑒別和含量測定，其質(zhì)量控制無法滿足現(xiàn)代藥物制劑的要求，本文采用了薄層色譜法對方中王不留行等四味藥進(jìn)行薄層鑒別，HPLC法對丹參中原兒茶醛進(jìn)行含量測定，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，操作簡便，提高了藥物制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，增強(qiáng)了藥品質(zhì)量的可控性，符合中藥現(xiàn)代化的要求，可用于該制劑的質(zhì)量控制與評價。

【參考文獻(xiàn)】

［1］葛建華，龔旭東，竇志華，等.高效液相色譜法測定丹參口服液中原兒茶醛的含量［J］．時珍國醫(yī)國藥,2004,15（5）:266.

［2］國家藥典委員會.中國藥典,Ⅰ部［S］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:49.

［3］魯靜.中藥王不留行中刺桐堿和肥皂草苷分離鑒定和測定［J］.研究簡報，1998,18（3）:163.

【摘要】目的建立腎石通顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法采用TLC法對處方中延胡索、丹參、王不留行、牛膝進(jìn)行定性鑒別；采用HPLC法測定制劑中原兒茶醛的含量。結(jié)果TLC法可檢出延胡索、丹參、王不留行、牛膝的特征斑點(diǎn)；原兒茶醛的線性范圍為0.0143～3.6640μg（r=0.9999），平均回收率98.27%（RSD=2.6%，n=5）。結(jié)論該方法簡便可靠，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，可用作腎石通顆粒的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】腎石通顆粒；薄層鑒別；原兒茶醛；高效液相色譜法