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【摘要】［目的］綿毛鹿茸草的次生代謝產物含量與抑菌活性分析。［方法］對綿毛鹿茸草不同提取液的總黃酮、總綠原酸、總生物堿、總皂甙、游離蒽醌等次生代謝產物含量和抑菌活性進行測定。［結果］顯示：70%乙醇提取液、60%丙酮提取液對肺炎雙球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌有中等抑制作用，水提取液有弱抑制作用；70%乙醇提取液是肺炎雙球菌、金黃色葡萄球菌的良好抑制劑，60%丙酮提取液是大腸桿菌、枯草芽孢桿菌的良好抑制劑。［結論］綿毛鹿茸草提取掖對大腸桿菌的抑菌活性與綠原酸的含量具有顯著的正性關，對枯草芽孢桿菌的抑菌活性與蒽醌之間存在極顯著的相關性。

【關鍵詞】綿毛鹿茸草；次生代謝；抑菌活性

Abstract：［Objective］ToanalysethecontentofsecondarymetabolismsandantibacterialactivityofMonochasmaSavatieriFranch.exMaxim.［Method］Thecontentsof5secondarymetabolitessuchasflavonoid，chlorogenicacid，tannin，phenolandanthraquinonesinthedifferentextractsofMonochasmasavatieriFranch.exMaximweredetermined.［Results］Itshowedthattheantibacterialactivityoftheliquidsextractedwith70%ethanol，60%acetoneonStreptococcuspneuoncae，Staphylococcusaureus，EscherichiacoliandBacillussubtilisweremoderate，whilethatoftheliquidsextractedwithwaterwasweak.Theliquidsextractedwith70ethanolwerethebetterinhibitorofStreptococcuspneuoncaeandStaphylococcusaureus，whiletheliquidsextractedwith60acetonewerethebetterinhibitorofEscherichiacoliandBacillussubtilis.［Conclusion］TherewaspositivecorrelationbetweentheantibacterialactivityoftheliquidsofMonochasmasavatieriFranch.exMaximonEscherichiacoliandthecontentofthechologenicacid.TherewasalsomarkedcorrelationbetweenthatofBaillussubtilisandanthraquinones.

Keywords：monochasmaSavatieriFranch.exMaxim；secondarymetabolism；antibacterialactivity

綿毛鹿茸草(MonochasmasavatieriFranch.exMaxim)為唇形科鹿茸草屬植物，別名白頭翁、千重塔、白頭毛，分布于浙江、福建、江西，常生于山坡向陽處雜草中或馬尾松林下［1］。主要功能為清熱解毒，祛風行氣，涼血止血，祛痰，用于感冒，慢性氣管炎，肺炎，咳血，吐血，便血，牙齦炎，牙髓炎，乳癰，癰腫，小兒口瘡，風濕關節痛等。本文對綿毛鹿茸草的不同提取液中總黃酮、總綠原酸、總生物堿、總皂甙及其對肺炎雙球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌抑菌活性進行研究，并探討這五類次生代謝產物與抑菌活性之間的相互關系。

1實驗與方法

1.1實驗材料和儀器綿毛鹿茸草于2007年6月采自浙江千島湖姥山林場的山坡上。采集時將棉毛鹿茸草全草用濕布包裹，塑料袋封裝，立即帶回實驗室。將材料洗凈，防入105℃恒溫干燥箱中固定25min，再在80℃條件下干燥24h，研磨后經過0.25mm金屬網篩，將烘干樣品放入磨口廣口瓶，置于干燥器中保存，備用［2］。標準品蘆丁、綠原酸、小蘗堿、人參皂甙Rb，1，8二羥基蒽醌購自中國藥品生物制品檢定所，所用試劑均為分析純。四種菌種均由浙江臺州醫院無償贈送。培養基為牛肉膏培養基。吸光度的測定在T6新世紀紫外-可見分光光度計上完成。

1.2綿毛鹿茸草提取液的制備稱取綿毛鹿茸草粉末3份，每份1g，其中2份分別用70%乙醇、60%丙酮在80℃水浴中回流6h，進行提取，離心取上清液，并清洗殘渣2次，離心取上清液，將3次上清液合并；另1份用沸水進行提取0.5h，離心取上清液，反復多次，直至提取液色淡，并將幾次沸水提取液混合。將乙醇、丙酮、沸水提取液的濃縮，并調節pH至7.0，然后用蒸餾水定容至1ml，放入4℃的冰箱中待用。

1.3次生代謝產物含量的測定

1.3.1總黃酮的提取與測定［3］取上述綿毛鹿茸草提取液樣品0.2ml，揮去溶劑后用甲醇定容至25ml，取其中1ml，置10ml離心管中，加入4ml0.1mol/L三氯化鋁-甲醇溶液，搖勻，在420nm處測定吸光度。以蘆丁為標準品，其回歸方程為y=9.6101x+0.0147，R2=0.9991。

1.3.2總綠原酸的提取與測定［4］取上述綿毛鹿茸草提取液樣品0.2ml，揮去溶劑后用95%乙醇定容至25ml，取1ml，置25ml容量瓶中，加入0.2mol/LHCl定容至刻度，搖勻，以試劑空白為對照，在324nm處測定吸光度。以綠原酸為標準品，其回歸方程為y=66.064x+0.0134，R2=0.9995。

1.3.3總生物堿的抽提與測定［5］取上述綿毛鹿茸草提取液樣品0.2ml，揮去溶劑后用90%乙醇定容至25ml。取提取液1.4ml置于精密加入4ml氯仿的分液漏斗中，加入7.2×10-4mol/L溴甲酚綠pH=4.42緩沖溶液0.6ml，振搖1min，靜置1h，取澄清的氯仿液，以試劑空白作對照，于417nm處測定吸收度。以小檗堿為標準品，其回歸方程為y=6.6x-0.0102，R2=0.9999。

1.3.4總皂甙的提取與測定［6］取上述綿毛鹿茸草提取液樣品0.2ml，揮去溶劑后用甲醇定容至25ml，取1ml置25ml容量瓶中，揮去溶劑后，加入0.2ml5%香草醛冰醋酸溶液，再加入0.8ml高氯酸，于70℃水浴加熱20min，取出，冷卻，加5ml冰醋酸，以試劑空白作對照，于560nm波長處測其吸光度。以人參皂甙Rb為標準品，其回歸方程為y=27.763x+0.0901，R2=0.9716。

1.3.5游離蒽醌的提取與測定［7］取上述綿毛鹿茸草提取液樣品0.2ml，放入10ml離心管中，水浴蒸干溶劑，加入5%醋酸鎂乙醇溶液5ml，以試劑空白為對照，在498nm處測定吸光度。以1，8二羥基蒽醌為標準品，其回歸方程為y=47.464x+0.0012，R2=0.9996。

1.4抑菌活性的研究以濾紙瓊脂擴散法測定綿毛鹿茸草三種溶劑提取物對肺炎雙球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌的抑菌效果。將經過記數的菌液稀釋后，控制100μL含104cfu，涂平板。將滅菌后濾紙片（直徑為6mm）浸泡在棉毛鹿茸草提取液中。在已涂菌的平板上放置上述濾紙片，并以蒸餾水為陰性，鏈霉素為陽性對照，每一樣品重復3次。處理后的平板放在30℃培養24h，觀察并記錄抑菌圈的直徑大小［8］。

1.5數據的處理試驗處理及數據測定均重復3次，將所得數據輸入SPSS11.5forWindows數據分析系統進行統計，并對次生代謝產物的含量與抑菌圈的大小進行相關分析。

2結果與分析

綿毛鹿茸草不同提取液次生代謝產物含量以及它們對四種細菌的抑菌圈大小如表1所示。其中次生代謝產物的含量為百分含量，抑菌活性以抑菌圈的大?。╩m）表示，陰性對照抑菌圈直徑6mm，陽性對照（鏈霉素）抑菌圈26mm；抑菌圈直徑在6～8mm為微弱抑菌，8～12mm為弱抑菌，12～20mm為中等抑菌，20～24mm為強抑菌。綿毛鹿茸草的的次生代謝產物和抑菌圈直徑的相關性如表2所示。

表1綿毛鹿茸草提取液次生代謝產物的含量（g/kg）及其抑菌圈直徑（略）

2.1綿毛鹿茸草提取液次生代謝產物含量和抑菌活性分析從表1中可以看出：總黃酮、總綠原酸、游離蒽醌三種次生代謝產物的含量均為70%乙醇提取液>60%丙酮提取液>水提取液，最高含量分別為1.403g/kg、72.752g/kg、0.043g/kg；生物堿和皂甙的含量為60%丙酮提取液>70%乙醇提取液>水提取液，最高含量為1.677g/kg和5.418g/kg。中國論文聯盟

對進肺炎雙球菌和金黃色葡萄球菌的抑制作用均是60%丙酮提取液>70乙醇提取液>水提取液，最大抑菌圈直徑為15.47mm和17.40mm，為中等抑菌作用；對大腸桿菌和枯草桿菌的抑制作用是70乙醇提取液>60%丙酮提取液>水提取液，最大抑菌圈直徑為19.03mm和14.83mm，為中等抑菌作用。水提取液對肺炎雙球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌的抑菌圈直徑均在9～12mm之間，具有弱抑菌作用?？梢钥闯鼍d毛鹿茸草的70%乙醇提取液和60%丙酮提取液是良好的抑菌劑。

2.2不同提取液的次生代謝產物含量與抑菌活性的相關性分析從表2可以看出：黃酮與蒽醌之間存在顯著的正相關，推測綿毛鹿茸草中這兩種次生代謝產物可能具有相同的合成底物或具有相同代謝途徑；大腸桿菌的抑菌活性與綠原酸的含量具有顯著的正性關，推測綿毛鹿茸草對大腸桿菌的抑制作用可能是提取液中的綠原酸起的作用；蒽醌與枯草芽孢桿菌之間存在極顯著的相關性，說明綿毛鹿茸草對枯草芽孢桿菌的抑制作用主要是蒽醌作用的結果；肺炎雙球菌和金黃色葡萄球菌之間具有顯著的相關性，而與所測的5種次生代謝產物之間都沒有顯著相關性，因此推測綿毛鹿茸草中其它某些物質對肺炎雙球菌和金黃色葡萄球菌均有一定抑制作用。

表2綿毛鹿茸草不同提取液的次生代謝產物含量與抑菌活性的相關性（略）

水平顯著差異：*P<0.05，**P<0.01

3討論

次生代謝是植物的重要特征，其產物既具有重要的生態學意義又可決定各類植物在進化過程中的興衰成敗、生死存亡等問題［9］，植物中的次生代謝產物還具有抗過敏、降血壓、抗炎、抗菌、抗突變、抗腫瘤、抗病毒、抗氧化等多種活性。

綿毛鹿茸草對70%乙醇提取液、60%丙酮提取液、水提取液對肺炎雙球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌均有抑制作用，前兩者為中等抑制作用，后者為弱抑制作用；70%乙醇提取液是肺炎雙球菌、金黃色葡萄球菌的良好抑制劑，60%丙酮提取液是大腸桿菌、枯草芽孢桿菌的良好抑制劑。推測對大腸桿菌和枯草桿菌的抑制作用主要由提取液中的綠原酸和蒽醌引起的。

文獻查閱得知：金銀花中綠原酸的平均含量為56.92g·kg-1［10］，巴戟天樣品的游離蒽醌含量為的范圍為0.013～0.049g·kg-1［7］。綿毛鹿茸草70%乙醇提取液中總綠原酸、游離蒽醌的含量72.752g·kg-1、0.043g·kg-1。從中不難看出：70%乙醇提取液是綿毛鹿茸草的良好提取劑。至于綿毛鹿茸草中這些次生代謝產物的分子組成、分子結構等方面內容有待進一步的研究。

【參考文獻】

［1］中國科學院植物研究所.中國高等植物圖鑒(第四冊)［M］.北京：科學出版社，1987：97.

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［8］王莘，蘇玉春，董浩，楊會敏，王建華，李金風.9種中藥提取物對乙型溶血性鏈球菌的抑菌作用比較［J］.中草藥，2004，35(3)：309310.

［9］杜近義，胡國賦，秦際威.植物次生代謝產物的生態學意義［J］.生物學雜志，1999，16(5)：910.