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1器材

1.1材料

青刺果，苯酚，3,5－二硝基水楊酸，亞硫酸，氫氧化鈉，酒石酸鈉正丁醇，三氯甲烷，95%乙醇，無水乙醇，考馬斯亮藍G-250。

1.2儀器數顯恒溫水浴鍋HH-2型(國華電器有限公司)，電子天平MODELJD200-3（沈陽龍滕電子有限公司），800B型離心沉淀器（上海安亭科學儀器廠），旋轉蒸發器（鞏義市英峪高科儀器廠），unicoUV-2102PC型紫外可見分光亮度計（尤尼柯上海儀器有限公司）。

2方法

2.1青刺果多糖的提取稱定青刺果50g，按比例加入蒸餾水，于恒溫水浴鍋中回流提取，布氏漏斗過濾，將濾液于旋轉蒸發儀上進行濃縮，濃縮至約80ml時，再將濃縮液用Savage法除蛋白，即是向濃縮液中加其1/4體積的三氯甲烷，隨之再加入三氯甲烷體積1/4的正丁醇，劇烈振搖5～10min，混勻，以1500r/min離心20min，分去水層與有機層交界處的變性蛋白質，水層仍按照此方法反復除蛋白5次。然后在上清液中加入一定量無水乙醇，使乙醇的終濃度達一定比例，沉淀過夜。沉淀用布氏漏斗抽濾，然后用無水乙醇和丙酮反復多次抽洗，直至沉淀呈粉末狀時將其置于表面皿中。將表面皿于60℃干燥至恒重即得青刺果多糖粗品，計算粗多糖得率。

2.2正交實驗根據有關資料報道，選取溫度(A)，提取時間(B)，料液比(C)，乙醇終濃度(D)4個因素，每個因素3個水平，選用L9(34)正交實驗方案提取青刺果多糖，以多糖得率為指標確定最佳提取工藝。因素水平見表1，實驗安排方法見表2。表1青刺果多糖提取實驗因素水平（略）表2青刺果多糖提取實驗方案（略）

2.3含量測定采用硫酸-苯酚比色法測定粗多糖中川牛膝總糖含量［4］，DNS法測定粗多糖中還原糖的含量［5］，考馬斯亮藍G-250比色法測定粗多糖中蛋白質含量［6］。

2.4多糖含量計算

多糖含量(%)=總糖含量-還原糖含量

多糖得率(%)=多糖含量×干燥提取物質量原藥材粉末質量×100%

3結果

3.1多糖含量從表3中可以看出，影響多糖得率的因素主次順序為A>B>C>D，溫度對多糖得率的影響最大，其次為時間，料液比和乙醇終濃度。根據正交表分析，青刺果多糖的最優提取工藝應為A3B3C3D2，即溫度100℃，提取時間8h，料液比1：20，乙醇終濃度85%。表3正交實驗結果（略）

3.2測定青刺果中蛋白質含量經計算得回歸方程為Y=0.0163X-0.0539，相關系數r=0.9925，樣品蛋白質含量見表4，由表4可知，含量最大的為樣品1，含量為19.58%。表4青刺果蛋白質含量（略）

4討論

多糖遇濃硫酸脫水生成糖醛或其衍生物與苯酚試劑發生縮合反應，生成橙黃色化合物。此化合物在490nm處有最大吸收波長，其顏色深度與粗多糖中總糖的含量成正比，可用比色法測定其含量，以此計算粗多糖中總糖含量。苯酚極易氧化，因此在測定時要避光和操作迅速。本法簡單，顯色穩定，靈敏度高。用乙醇沉淀所獲得的多糖，常混有較多的蛋白質，降低了多糖的純度，必須予以去除。Savage法是從多糖中去除蛋白質最緩和的方法，但要達到除盡蛋白質的目的需進行反復多次的處理，如能配合加入蛋白質水解酶（膜蛋白酶、胃蛋白酶、鏈蛋白酶等），使蛋白質大分子先進行一定程度的降解，再用Savage法處理，效果更好。

實驗結果表明，采用水提法提取青刺果多糖，工藝簡單，是一種理想的提取多糖類物質的方法。此外青刺果多糖含量較高，以青刺果為原料開發以其多糖為主要成分的藥物、保健品等具有極為良好的應用前景。

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【摘要】目的研究青刺果多糖的提取工藝并測定多糖的含量。方法采用正交實驗，進行水提醇沉法的優選；以葡萄糖標準液繪制標準曲線，用苯酚-硫酸，紫外分光光度法于490nm波長處測定青刺果多糖的含量。結果多糖的最佳提取條件為100℃，料液比為1:20，提取時間8h，乙醇終濃度為85%。測定青刺果多糖含量最高達36.44%。結論最佳提取條件得率高，測定方法準確，對青刺果多糖含量的測定獲得較滿意結果。

【關鍵詞】青刺果；多糖；紫外分光光度法