導(dǎo)語：瑤藥葫蘆鉆提取物抗腫瘤作用分析論文一文來源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

【摘要】目的研究葫蘆鉆提取物的抗腫瘤作用。方法體外抗腫瘤活性研究采用MTT比色法，靶細(xì)胞采用人肝癌細(xì)胞BLE7404；通過復(fù)制小鼠S180，H22腹水瘤和肉瘤動(dòng)物模型，觀察葫蘆鉆提取物對(duì)小鼠平均生命延長(zhǎng)率和腫瘤抑制率的影響來評(píng)價(jià)體內(nèi)抗腫瘤作用。結(jié)果葫蘆鉆水、醇提取物濃度為20mg/ml時(shí)，對(duì)體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞的抑制率均＞50%；葫蘆鉆水、醇提取物的最大耐受劑量均是150g/kg；經(jīng)3次實(shí)驗(yàn)，葫蘆鉆水、醇提取物高、低劑量組對(duì)S180腹水瘤小鼠平均生命延長(zhǎng)率均＞50%，葫蘆鉆醇提物高劑量組對(duì)H22腹水瘤小鼠平均生命延長(zhǎng)率＞50%。葫蘆鉆水、醇提取物高、低劑量組對(duì)S180肉瘤小鼠平均瘤重抑制率均＞30%，對(duì)H22肉瘤小鼠平均瘤重抑制率均＞50%。結(jié)論葫蘆鉆水、醇提取物具有一定的抗腫瘤作用。

【關(guān)鍵詞】葫蘆鉆；抗腫瘤

Abstract:ObjectiveToinvestigatetheantitumoractivityofYaoHerb--Huluzuan.MethodsTheantitumoractivityinvitroagainsthumancancercelllines--hepatocarcinomaBEL-7404wasdeterminedbyMTTmethod.Theantitumoractivityinvivowasevaluatedbytheprolongationratiosoflife-spanandtheinhibitionratiosofthetumorweightoftransplantedmouseS180、H22solidandascitescarcinomamodelfedonextractedsubstancesfromHuluzuan.ResultsWhenthedoseofwater,alcoholextractedsubstancesfromHuluzuanwas20mg/ml,theinhibitionratiosofthetumorcellinvitrowasinexcessof50%.Bothmaximumtolerateddoseofwater,alcoholextractedsubstancesfromHuluzuanwere150g/kg.Inthreetimesoftheexperiment,prolongationratiosoflifespanathighandlowdoseofwater,alcoholextractedsubstancesexceed50%onmiceS180ascitescarcinomamodelinaverage,andathighdoseofalcoholextractedsubstancesexceeded50%onmiceH22ascitescarcinomamodelinaverage,inhibitionratiosathighandlowdoseofwater、alcoholextractedsubstancesexceed30%onmiceS180solidcarcinomamodelandexceed50%onmiceH22solidcarcinomamodelinaverage.ConclusionWater,alcoholextractedsubstancesfromHuluzuanhasantitumoractivitytosomeextent.

Keywords:Huluzuan；Antitumor

葫蘆鉆為天南星科植物石柑子Pothoschinensis(Raf.)Merr.的全草，為廣西瑤醫(yī)老班藥“五虎、九牛、十八鉆、七十二風(fēng)”之一，瑤族傳統(tǒng)治癌“打藥”［1］，具有理氣止痛，清熱解毒的功效。根據(jù)民間用藥經(jīng)驗(yàn)，開展抗腫瘤作用實(shí)驗(yàn)研究，作者通過體內(nèi)藥效實(shí)驗(yàn)和體外藥效實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)葫蘆鉆提取物的抗腫瘤效果。

1材料

1.1藥材葫蘆鉆采自廣西金秀瑤族自治縣，經(jīng)廣西民族醫(yī)藥研究所戴斌主任藥師鑒定為天南星科植物石柑子。

1.2動(dòng)物昆明種小鼠，體重18～22g，雌雄兼用，SPF級(jí)，購(gòu)自廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK桂20030003），動(dòng)物分組分籠飼養(yǎng)，自由飲水，喂全價(jià)顆粒飼料，動(dòng)物室溫度（24±2）℃，相對(duì)濕度50%～60%。

1.3主要藥品與試劑RPMI1640培養(yǎng)基為Gibco公司的產(chǎn)品；MTT為Sigma公司的產(chǎn)品；小牛血清為杭州四季清公司的產(chǎn)品；DMSO（二甲基亞砜）為Sigma公司的產(chǎn)品；其余試劑均為分析純。

1.4細(xì)胞系人肝癌細(xì)胞BEL7404引自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞生物研究所細(xì)胞庫(kù)；用RPMI1640培養(yǎng)液（含10%的小牛血清，100ku·L-1青霉素，100mg·L-1鏈霉素）37℃，5%CO2，相對(duì)濕度100%培養(yǎng)，0.25%胰蛋白酶消化傳代。

1.5瘤株小鼠S180，H22腹水瘤株和小鼠S180，H22肉瘤株均由廣西中醫(yī)藥研究所引進(jìn)，本實(shí)驗(yàn)室冷凍保存，用昆明種小鼠接種傳代。

2方法

2.1葫蘆鉆提取物的制備葫蘆鉆水提物：取藥材加10倍量水水煎兩次，1h/次，濾液合并濃縮，4℃冰箱保存?zhèn)溆茫缓J鉆醇提物：取粗粉加5倍量95%乙醇回流提取3次，第1次2h，第2，3次各1h，合并濾液減壓回收乙醇至無醇味，濃縮，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2體外藥效實(shí)驗(yàn)MTT法測(cè)定：BEL7404經(jīng)胰蛋白酶處理制成單細(xì)胞懸液，接種96孔板，每孔接種3000個(gè)細(xì)胞/100μl，含10%FBS的RPMI1640培養(yǎng)液，培養(yǎng)24h后，實(shí)驗(yàn)組分別加入最終濃度為1，5，10，20mg/ml葫蘆鉆水提物和醇提物的培養(yǎng)液，對(duì)照組則加入等體積溶劑的培養(yǎng)液。每組均設(shè)7個(gè)平行孔。置37℃，5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)5d后，加入MTT20μl，4h后棄上清，每孔加入DMSO100μl，1h內(nèi)在BioRad550MicoplateReader上用波長(zhǎng)546nm比色，測(cè)定OD值，按下式計(jì)算藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率［2］。

腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率(%)=（1實(shí)驗(yàn)組平均OD值/對(duì)照組平均OD值）×100%

2.3急性毒性實(shí)驗(yàn)在預(yù)試驗(yàn)基礎(chǔ)上，取40只昆明種小鼠，體重18～22g，雌雄各半，隨機(jī)分為兩組。以動(dòng)物能耐受的最大濃度，最大容積的劑量，灌胃給藥，葫蘆鉆水提物3.75g生藥/ml，葫蘆鉆醇提物3.75g生藥/ml，0.4ml/10g體重。給藥后連續(xù)觀察7d，逐日觀察記錄動(dòng)物反應(yīng)情況［3］。

2.4體內(nèi)藥效實(shí)驗(yàn)［4］

2.4.1對(duì)S180，H22腹水瘤小鼠生存天數(shù)的影響在無菌條件下，抽取小鼠腹腔內(nèi)連續(xù)傳代的S180，H22細(xì)胞，從右下腹部注入受體動(dòng)物腹腔內(nèi)，每鼠0.2ml。接種24h后隨機(jī)分組，每組10只。接種次日葫蘆鉆水提物高、低劑量組（37.5，12.5g/kg），葫蘆鉆醇提物高、低劑量組（37.5，12.5g/kg），模型對(duì)照組（蒸餾水），連續(xù)ig給藥10d后，停止給藥，正常飼養(yǎng)，直到自然死亡，逐日記錄荷瘤小鼠的存活狀況，按下式計(jì)算各組平均生命延長(zhǎng)率。

生命延長(zhǎng)率=治療組平均存活天數(shù)-對(duì)照組平均存活天數(shù)對(duì)照組平均存活天數(shù)×100%

上述實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次，并計(jì)算3次的平均值。

2.4.2對(duì)S180，H22肉瘤小鼠的抑瘤作用分別選擇接種7d后的S180，H22肉瘤（腹水型）小鼠，頸椎脫臼致死，固定于板上，消毒腹部皮膚，用無菌空針抽吸含瘤細(xì)胞腹水，接種于受體動(dòng)物右前肢腋部皮下，每鼠0.2ml。24h后將已接種的小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、治療組（高，低劑量組），每組10只。治療組每天ig給藥1次，連續(xù)10d，對(duì)照組ig等量的蒸餾水。于停藥后第2天處死，稱體重和瘤重，按下式計(jì)算抑瘤率。

腫瘤抑制率=對(duì)照組瘤重－給藥組瘤重對(duì)照組瘤重×100%

上述實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次，并計(jì)算3次的平均值。

2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)以±s表示。

3結(jié)果

3.1MTT法不同濃度葫蘆鉆水、醇提取物對(duì)人肝癌細(xì)胞株BEL7404的抑制。結(jié)果見表1。

表1不同濃度葫蘆鉆水、醇提取物對(duì)體外培養(yǎng)的人肝癌細(xì)胞BEL7404的影響（略）

結(jié)果顯示，葫蘆鉆水、醇提取物對(duì)體外培養(yǎng)的人肝癌細(xì)胞BEL7404增殖都表現(xiàn)較強(qiáng)的抑制作用，抑制率與提取物濃度正相關(guān)。當(dāng)葫蘆鉆水、醇提取物濃度為20mg/ml時(shí)，抑制率均＞50%，且葫蘆鉆醇提取物作用效果強(qiáng)于葫蘆鉆水提物。

3.2葫蘆鉆水提物日總劑量為150g/kg，葫蘆鉆醇提物日總劑量為150g/kg，給藥當(dāng)天動(dòng)物出現(xiàn)便溏現(xiàn)象，其后觀察7d，對(duì)小鼠體重、行為、進(jìn)食、皮毛、眼和黏膜、呼吸、四肢活動(dòng)均無任何影響。說明葫蘆鉆水、醇提取物的急性毒性小。

3.33次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，葫蘆鉆水、醇提取物高、低劑量組對(duì)S180腹水瘤小鼠平均生命延長(zhǎng)率均＞50%，葫蘆鉆醇提物高劑量組對(duì)H22腹水瘤小鼠平均生命延長(zhǎng)率＞50%。結(jié)果見表2。

表2葫蘆鉆提取物對(duì)S180和H22腹水瘤小鼠存活期的影響（略）

與模型組比較，※P<0.05，※※P<0.01；n=10

3.43次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，葫蘆鉆水、醇提取物高、低劑量組對(duì)S180肉瘤小鼠平均瘤重抑制率均＞30%，對(duì)H22肉瘤小鼠平均瘤重抑制率均＞50%，結(jié)果見表3。

表3葫蘆鉆提取物對(duì)S180和H22肉瘤小鼠的抑制作用（略）

與模型組比較※P<0.05※※P<0.01;n=10

4討論

尋找具有抗癌作用強(qiáng)，抗癌譜廣，副作用小的天然活性化合物是抗癌藥物研究的重要途徑。近年來對(duì)傳統(tǒng)瑤藥開展抗腫瘤作用的篩選研究，發(fā)現(xiàn)瑤藥葫蘆鉆具有一定的抗腫瘤作用。本研究結(jié)果顯示，通過MTT法檢測(cè)葫蘆鉆水、醇提取物對(duì)人肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)有抑制作用。當(dāng)藥物濃度低于5mg/ml時(shí)，對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用不明顯。隨著藥物濃度升高至20mg/ml，藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制較明顯，抑制率在50%以上。且葫蘆鉆醇提物的作用效果強(qiáng)于水提物。急性毒性實(shí)驗(yàn)中，葫蘆鉆水、醇提取物的最大耐受劑量均是150g/kg，急性毒性較小。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，葫蘆鉆水、醇提取物在改善S180腹水瘤小鼠存活率方面作用非常明顯，生命延長(zhǎng)率為73.65%～97.43%，與模型組比較，平均生存期延后10d以上。葫蘆鉆醇提物高劑量組在改善H22腹水瘤小鼠存活率方面作用明顯，生命延長(zhǎng)率為54.75%。葫蘆鉆水、醇提取物對(duì)S180肉瘤和H22肉瘤均具有明顯的抑制作用，對(duì)S180肉瘤平均抑制率＞30%，對(duì)H22肉瘤平均抑制率＞50%，與模型組比較有顯著性差異（P<0.01）。這些說明葫蘆鉆提取物具有較強(qiáng)的體內(nèi)和體外抗腫瘤作用，有進(jìn)一步研究的價(jià)值。本研究結(jié)果為葫蘆鉆的臨床抗腫瘤應(yīng)用及抗腫瘤活性成分的進(jìn)一步分離篩選提供了依據(jù)和資料。

【參考文獻(xiàn)】

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