導(dǎo)語：巴洛沙星有關(guān)物質(zhì)管理論文一文來源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

【摘要】目的采用RP-HPLC法測(cè)定巴洛沙星的有關(guān)物質(zhì)。方法使用SMTC18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流動(dòng)相為乙腈-0.4%十二烷基硫酸鈉溶液(47：53)［用枸櫞酸（1.5mol/L）調(diào)pH值至3.0］，檢測(cè)波長(zhǎng)為295nm，流速為1.0ml/min。結(jié)果巴洛沙星與各有關(guān)物質(zhì)在上述色譜條件下能有效地分離。結(jié)論該方法結(jié)果準(zhǔn)確、操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、專屬性強(qiáng)，適用于巴洛沙星的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定。

【關(guān)鍵詞】巴洛沙星；反相高效液相色譜法

StudyondeterminationofrelatedsubstancesinbalofloxacinbyRP-HPLC

【Abstract】ObjectiveThereversedphasehighperformanceliquidchromatographymethodwasestablishedtodeterminetherelatedsubstancesinbalofloxacin.MethodsThecolumnisSMTC18(250mm×4.6mm×5μm).Themobilephaseiscompoundsolutionofacetonitrileand0.4%laurylsodiumsulfate(47：53)［adjustedpHto3.0bycitricacid(1.5mol/L)］，thedetectionwavelengthis295nm，theflowrateis1.0ml/min.Balofloxacianandalloftherelatedsubstancescanbeseparatedefficientlywiththisdetermineationoftherelatedsubstancesinbalofloxacin.ThecolumnisSMTC18(250mm×4.6mm，5μm).Themobilephaseiscompoundsolutionofacetonitrileand0.4%laurylsodiumsulfate(47：53)［adjustedpHto3.0bycitricacid(1.5mol/L)］，thedetectionwavelengthis295nm，theflowrateis1.0ml/min.ResultsBalofloxacianandalloftherelatedsubstancescanbeseparatedefficientlywiththiscondition.Themethodisaccurate，simple，rapidandexclusive.ConclusionItcouldbeusedfordeterminationofrelatedsubstancesinbalofloxacin.

【Keywords】balofloxacin；reversedphasehighperformanceliquidchromatography

巴洛沙星(balofloxacin)系由日本中外制藥株式會(huì)社與韓國(guó)Choongwae公司共同開發(fā)的氟喹諾酮類抗菌藥，于2002年首次在韓國(guó)上市［1～2］。對(duì)革蘭陽性菌、革蘭陰性菌及厭氧菌具有廣譜抗菌活性，對(duì)細(xì)菌具有選擇性抑制作用，體外抗菌活性是環(huán)丙沙星、氧氟沙星和洛美沙星的4～16倍［3］；與托氟沙星和司帕沙星類似［4］。由于巴洛沙星在其母核的8位引入了一甲氧基，使其不僅增加了對(duì)革蘭陽性菌的抗菌活性，而且避免或減少光過敏或光毒性及細(xì)胞毒性［5］。巴洛沙星是以羧酸乙酯為起始原料，先和三乙酸硼反應(yīng)生成螯合物Ⅰ，再和3-甲胺基哌啶二鹽酸鹽縮合反應(yīng)得螯合物Ⅱ，然后水解制得。該路線是目前制備巴洛沙星的最優(yōu)路線［6］。測(cè)定巴洛沙星的有關(guān)物質(zhì)常用液相色譜法，俞紅等［7］報(bào)道，用流動(dòng)相為0.05mol/L檸檬酸-乙腈（60：40）［三乙胺調(diào)pH=4］的反相液相色譜法測(cè)定主要中間體羧酸乙酯在巴洛沙星中的含量。本實(shí)驗(yàn)通過摸索新的色譜條件，采用乙腈-0.4%十二烷基硫酸鈉溶液為流動(dòng)相的高效液相色譜法，能同時(shí)測(cè)定了巴洛沙星的合成中間體羧酸乙酯、螯合物Ⅰ及螯合物Ⅱ。該方法簡(jiǎn)單準(zhǔn)確、分離效果好，對(duì)巴洛沙星的質(zhì)量控制具有明顯的實(shí)用價(jià)值。巴洛沙星及各中間體的結(jié)構(gòu)式如圖1所示。

1實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器與試劑高效液相色譜儀—Waters515泵；2487紫外檢測(cè)器。巴洛沙星樣品自制，樣品批號(hào)：20041015、20041020、20041024；對(duì)照品自制，含量：99.7%；羧酸乙酯（江陰市永達(dá)化工有限公司），螯合物Ⅰ、螯合物Ⅱ均自制；乙腈為色譜純?cè)噭渌噭┚鶠榉治黾冊(cè)噭?/p>

1.2實(shí)驗(yàn)溶液的制備供試品溶液：取巴洛沙星（批號(hào)：20041024）約10.2mg，置100ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得；中間體溶液：取羧酸乙酯14.0mg、螯合物Ⅰ11.3mg、螯合物Ⅱ10.3mg，分別置100ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得；混合溶液：取供試品溶液及各中間體溶液各1份，混合，即得。

1-巴洛沙星；2-羧酸乙酯；3-螯合物Ⅰ；4-螯合物Ⅱ1.3色譜條件色譜柱：SMTC18柱（5μm，4.6mm×250mm）；流動(dòng)相：乙腈-0.4%十二烷基硫酸鈉溶液(47：53)［用枸櫞酸（1.5mol/L）調(diào)pH值至3.0］；檢測(cè)波長(zhǎng)：295nm；流速：1.0ml/min；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：20μl。

2結(jié)果與討論

2.1測(cè)定波長(zhǎng)的選擇分別稱取巴洛沙星及各中間體適量，分別加乙腈溶解制成每1ml中約含6μg的溶液，照分光光度法(中國(guó)藥典2000年版二部附錄ⅣA)，在200～400nm的波長(zhǎng)處掃描，結(jié)果顯示巴洛沙星在295nm處吸收最強(qiáng)，且其他中間體在295nm附近有較大的吸收，故選擇295nm為本品有關(guān)物質(zhì)測(cè)定的檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2色譜柱及流動(dòng)相的選擇色譜柱：(1)DiamonsilTMC18柱（5μm，4.6mm×200mm）；(2)KromasilC18柱（5μm，4.6mm×200mm）；(3)SMTC18柱（5μm，4.6mm×250mm）。流動(dòng)相：(1)參照中國(guó)藥典2000年版二部沙星類藥物有關(guān)物質(zhì)測(cè)定，采用流動(dòng)相：乙腈-0.05mol/L枸櫞酸溶液(20：80)［用三乙胺調(diào)pH值至3.5］；(2)乙腈—0.4%十二烷基硫酸鈉溶液（47：53）［用枸櫞酸（1.5mol/L）調(diào)pH值至3.0］。

采用上述不同的色譜柱和流動(dòng)相進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明：采用色譜柱(1)或(2)及流動(dòng)相(1)，雖然主峰出峰時(shí)間適中且峰形較好，但各中間體在此流動(dòng)相中50min都未見出峰；采用色譜柱(1)或(2)及流動(dòng)相(2)，樣品及各中間體出峰時(shí)間適中，但峰拖尾嚴(yán)重；采用色譜柱(3)及流動(dòng)相(2)，樣品及各中間體出峰時(shí)間適中，且峰形較好。所以選擇采用色譜柱(3)及流動(dòng)相(2)來檢測(cè)本品的有關(guān)物質(zhì)。

2.3系統(tǒng)適用性試驗(yàn)取1.2項(xiàng)溶液各20μl分別注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，并記錄色譜圖，測(cè)定結(jié)果見表1及圖2。試驗(yàn)結(jié)果表明：巴洛沙星與各中間體在上述色譜條件下能有效地分離。

2.4專屬性試驗(yàn)取供試品溶液9ml，加1.0mol/L鹽酸溶液1ml，置水浴(60℃)中放置12h，加1.0mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)溶液的pH至中性，再加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為酸破壞溶液；取供試品溶液9ml，加1.0mol/L氫氧化鈉溶液1ml，置水浴(60℃)中放置12h，加1.0mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)溶液的pH值至中性，再加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為堿破壞溶液；取供試品溶液9ml，加30%過氧化氫1ml，置水浴(60℃)中放置12h，再加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為氧化破壞溶液。經(jīng)強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、強(qiáng)氧化破壞試驗(yàn)，結(jié)果表明：在此色譜條件下，各降解產(chǎn)物峰與主峰均能達(dá)到基線分離。

2.5最低檢出量取巴洛沙星對(duì)照品及各中間體適量，分別用流動(dòng)相逐級(jí)稀釋后進(jìn)樣，當(dāng)信噪比為3：1時(shí)，測(cè)得巴洛沙星、羧酸乙酯、螯合物Ⅰ、螯合物Ⅱ的最低檢出量分別為1.12×10-2ng、0.272ng、2.016ng、0.208ng。

2.6溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12h測(cè)定，測(cè)得溶液在12h內(nèi)的平均峰面積為99497023.7，RSD為0.35%，說明本品溶液基本穩(wěn)定。結(jié)果見表2。

2.7有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定各取3批巴洛沙星供試品適量，分別加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1ml中含巴洛沙星約為0.1mg的溶液，按1.3色譜條件檢查有關(guān)物質(zhì)，結(jié)果見表3及圖3。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：3批供試品有關(guān)物質(zhì)結(jié)果均小于1.0%。

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7俞紅，戴真南，繆玉山，等.用RP-HPLC法測(cè)定巴洛沙星中間體含量的方法學(xué)研究.現(xiàn)代醫(yī)學(xué)，2004，32（2）：85-87