導(dǎo)語(yǔ)：開(kāi)口箭總皂苷含量分析論文一文來(lái)源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

【摘要】目的建立開(kāi)口箭中總皂苷含量測(cè)定方法。方法采用比色法：香草醛-冰醋酸溶液為發(fā)色體系，檢測(cè)波長(zhǎng)為（458±2）nm。結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)曲線在0.10～0.40mg范圍內(nèi)(r=09997)線性關(guān)系良好。平均回收率97.2%，方法的變異系數(shù)為4.57%，測(cè)得開(kāi)口箭70%乙醇提取物中總皂苷平均含量為13.51%。結(jié)論方法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于開(kāi)口箭總皂苷含量測(cè)定。

【關(guān)鍵詞】開(kāi)口箭總皂苷開(kāi)口箭比色法

Abstract:ObjectiveTosetupanassaymethodforthedeterminationoftotalsaponininTupistrachinensisBak.MethodsThesamplesweredeterminedbyspectrophotometry.Thedetectivewavelengthwas(458±2)nm.ResultsThecalibrationcurvewaslinearintherangeof0.1～0.4mgandtheaveragerecoverywas97.2%(RSD＜4.57%).ConclusionThemethodisreliable,accurate.ItcanbeusedforthequalitycontrolofthetotalsaponininTupistrachinensisBak.

Keywords:Totalsaponin；TupistrachinensisBak.；Spectrophotmetry;Spectrophotometry

開(kāi)口箭TupistrachinensisBak.系百合科（Liliaceae）鈴蘭族開(kāi)口箭屬植物。其原植物又名開(kāi)喉箭、萬(wàn)年青，為多年生常綠草本，以其根狀莖入藥，作為藥用又名巖七、竹根七、竹節(jié)參、竹根七、竹節(jié)七、牛尾七等。醫(yī)學(xué)古籍記載，開(kāi)口箭味甘微苦，性寒，主治勞熱咳嗽、跌打損傷、風(fēng)濕痹痛、月經(jīng)不調(diào)等癥。土家族民間用其漱口液治療咽喉炎、扁桃體炎，療效顯著［1］。我國(guó)開(kāi)口箭屬植物約占全世界的70%,分布于陜西、甘肅、湖北、四川、云南、貴州等省。主產(chǎn)于湖北三峽庫(kù)區(qū)及神龍架林區(qū)，栽培面積大，產(chǎn)量高，資源十分豐富。

本實(shí)驗(yàn)室對(duì)神農(nóng)架產(chǎn)開(kāi)口箭TupistrachinensisBak.的生藥學(xué)、化學(xué)成分和藥理活性進(jìn)行了研究，結(jié)果表明開(kāi)口箭正丁醇提取物對(duì)Hela，K562，A2780a等具有很好的抑制作用，細(xì)胞毒活性好，抗炎活性也很好。也曾報(bào)道了“開(kāi)口箭中甾體皂苷元的含量測(cè)定”［2］。本文進(jìn)一步探索建立了香草醛-冰醋酸-高氯酸-比色法測(cè)定開(kāi)口箭中總皂苷含量的方法。

1材料與儀器

1.1材料

開(kāi)口箭根莖，采自湖北省神農(nóng)架林區(qū)，其原植物標(biāo)本于200207采自同一地區(qū)，經(jīng)三峽大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院陳發(fā)菊副教授鑒定為T(mén)upistrachinensisBak.，原植物及藥材現(xiàn)保存于本實(shí)驗(yàn)室（編號(hào)TC200207SNJ）。總皂苷對(duì)照品，本實(shí)驗(yàn)室自開(kāi)口箭分離純化的皂苷單體3-O-b-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-b-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-b-D-吡喃葡萄糖基(25R)-5(6)-烯-呋甾-3b,22a,26-三羥基26-O-b-D-吡喃葡萄糖苷。含量>98%（HPLC測(cè)定）。其他試劑均為分析純。

1.2儀器S3100紫外分光光度計(jì)（韓國(guó)Scinco公司），BP211D型電子天平（德國(guó)Sartorius公司）。

2方法

2.1對(duì)照品、供試品溶液的制備

2.1.1對(duì)照品溶液的制備精密稱取經(jīng)干燥至恒重的開(kāi)口箭總皂苷對(duì)照品0.0050g，加甲醇溶解定容至5ml，制成每毫升含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.1.2供試品溶液的制備精密稱取開(kāi)口箭粉末0.70g（60目篩，50℃干燥4h）置圓底燒瓶中，加入25ml70%乙醇溶液，浸泡過(guò)夜，60℃回流提取兩次，2h/次,減壓抽濾，濾液合并，置蒸餾燒瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓濃縮，除盡溶劑后，加少量甲醇溶解，定容至25ml，過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2測(cè)定方法適量供試品溶液置干燥具塞試管，60℃水浴揮干溶劑后，精密加入0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液和0.8ml高氯酸，搖勻，置60℃恒溫水浴加熱20min，取出，立即置冰水浴中冷卻15min，加入5ml冰醋酸，搖勻，同時(shí)做空白，于（458±2）nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值。

2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與線性關(guān)系精密吸取對(duì)照品溶液0.10，0.15，0.20，0.25，0.30，0.35，0.40ml，分別加入干燥具塞試管中，60℃水浴揮干溶劑,依次加入0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液和0.8ml高氯酸，置60℃水浴加熱20min，取出，立即置冰水浴中15min，停止反應(yīng)，加入5ml冰醋酸，搖勻，于458nm處測(cè)定吸光度，同時(shí)做試劑空白。以吸光度為縱坐標(biāo)，以對(duì)照品質(zhì)量為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得線性回歸方程W=0.0631+0.2835A，r=0.9997，對(duì)照品在0.10～0.40mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3結(jié)果

3.1精密度及重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液0.2ml,共6份，按“2.2”項(xiàng)下方法自60℃水浴揮干起測(cè)定（見(jiàn)表1）。其RSD為1.09%，表明方法精密度良好。精密稱取樣品粉末0.07g，共5份，按供試品溶液制備方法制備，精密吸取0.05ml,顯色測(cè)定（見(jiàn)表2）。其RSD為4.58%，表明方法重現(xiàn)性良好。表1精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）表2重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）

3.2顯色溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液適量，分別按標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備方法顯色后放置,于0，30，60，90，120min測(cè)定吸收度值（見(jiàn)表3）。結(jié)果表明對(duì)照品和供試品在120min內(nèi)顯色穩(wěn)定。表3顯色后溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）

3.3加樣回收率實(shí)驗(yàn)精密稱取已知總皂苷含量的開(kāi)口箭粉末，共5份,加入對(duì)照品適量,按照供試品溶液制備方法制備，顯色測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表4,平均回收率為97.2%，RSD為2.26%。表4加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）

3.4樣品含量測(cè)定精密吸取按供試品溶液0.05ml,按“2.2”測(cè)定方法項(xiàng)下操作，同時(shí)做空白，計(jì)算供試品中總皂苷含量。結(jié)果見(jiàn)表5。結(jié)果表明開(kāi)口箭70%乙醇提取物總皂苷含量為135.1mg/g，其百分含量為13.51%，RSD為4.57%。表5樣品中總皂苷含量測(cè)定結(jié)果（略）

4討論

經(jīng)過(guò)對(duì)皂苷類(lèi)含量測(cè)定文獻(xiàn)的統(tǒng)計(jì)與分析，選定下列4種顯色劑：0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液和0.8ml高氯酸、0.5ml8%香草醛乙醇溶液和5.0ml72%硫酸試液、高氯酸、0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液和0.8ml高氯酸；4種不同的顯色溫度：55，60，65，70℃；4種不同的顯色時(shí)間：10，15，20，25min；通過(guò)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行比較。發(fā)現(xiàn)用0.2ml5%香草醛-冰醋酸和0.8ml高氯酸作顯色劑，顯色溫度為60℃，顯色時(shí)間為20min時(shí)，對(duì)照品溶液與供試品溶液在（458±2）nm波長(zhǎng)處均有最大吸收。

對(duì)照品溶液依法顯色后，溶液的波長(zhǎng)（400～700nm）掃描圖中，在458和554nm兩處均出現(xiàn)最大吸收峰，但供試品溶液的最大吸收峰分別在456nm和580nm處，表明供試品溶液在580nm處的吸收峰有其它成分干擾，而在456nm處的吸收峰無(wú)其它成分干擾，吸收穩(wěn)定。

供試品溶液制備時(shí)分別用水、甲醇、70%乙醇、95%乙醇作溶劑，進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)70%乙醇溶液浸泡開(kāi)口箭粉末時(shí)其總皂苷溶出量最大。

建立了開(kāi)口箭總皂苷含量測(cè)定方法，采用5%香草醛-冰醋酸溶液為發(fā)色體系的比色法測(cè)定開(kāi)口箭中總皂苷的含量，顯色后溶液在120min內(nèi)穩(wěn)定，標(biāo)準(zhǔn)曲線在0.10～0.40mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，方法的精密度和重現(xiàn)性好，RSD分別為1.09%和4.58%；加樣平均回收率為97.2%，RSD為2.26%；測(cè)得開(kāi)口箭70%乙醇提取物中總皂苷平均含量為135.1mg/g，其平均百分含量為13.51%，RSD為4.57%，方法操作簡(jiǎn)便，精密度及準(zhǔn)確度高,重現(xiàn)性及穩(wěn)定性好,可用于開(kāi)口箭藥材的質(zhì)量控制。

【參考文獻(xiàn)】

［1］翟士輝.土家族藥開(kāi)口箭漱口液臨床應(yīng)用治療咽喉炎45例［J］.中國(guó)民族民間醫(yī)藥雜志，1999，(3):140.

［2］黃麗，廖全斌，鄒坤，等.開(kāi)口箭中甾體皂苷元的含量測(cè)定［J］.三峽大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2003，25（6）:562.