導語：如何才能寫好一篇一剪梅簡譜，這就需要搜集整理更多的資料和文獻，歡迎閱讀由公務員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

文/金長澤

近日，美國癌癥研究所公布了抗癌新食譜——低脂肪、高纖維、純天然。研究發現，只要飲食習慣合理，許多癌癥是可以預防的。

1.多素少葷。只靠一種食物單打獨斗無法降低癌癥危險，但如果把它們合理地搭配起來，效果就會迥然不同。就餐時，素食至少要占2/3，而動物蛋白最好不超過1/3。

2.每天5份果蔬。超重會增加結腸癌、食管癌和腎癌等多種癌癥發病幾率。而水果蔬菜既有助于保持健康體重，又有助于降低癌癥風險。專家建議，每天至少吃5份水果蔬菜。

3.葉酸早餐。美國癌癥協會表示，補充葉酸的最佳方法不是吃藥，而是多吃水果、蔬菜和強化谷物食品。葉酸有助于預防結腸癌、直腸癌和乳腺癌。每天早餐中的谷物和全麥食品是葉酸的最好來源。其他富含葉酸的食物還包括：橙汁、檸檬、草莓、蘆筍和雞蛋、雞肝、豆類、菠菜，萵苣等。

4.少吃加工熟食。偶爾吃一次三明治或熱狗，對健康并無大礙。但少吃臘腸、火腿之類的加工肉食，有助于降低結直腸癌和胃癌的發病率。另外，熏肉和咸肉中潛在的致癌物也會增加癌癥風險。

5.西紅柿防前列腺癌。吃西紅柿可降低包括前列腺癌在內的多種癌癥風險，因為西紅柿中豐富的番茄紅素發揮了關鍵作用。研究還顯示，番茄汁、番茄醬等西紅柿制品也具有抗癌的潛力。

6.時常喝綠茶。每天上班給自己泡杯茶吧。經常喝茶會降低膀胱癌、胃癌和胰腺癌的發病率。其中，綠茶具有較強的抗癌功效，它可以預防結腸癌、肝癌、乳腺癌及前列腺癌。

7.控制飲酒量。口腔癌、喉癌、食道癌、肝癌和乳腺癌都與飲酒密切相關。飲酒還會增加結直腸癌的風險。美國癌癥協會建議，即使男性日飲酒量控制在2杯，女性每日1杯，仍然會增加癌癥發病率。

8.喝白水最好。喝白水比其他飲料有助于增加排尿量，可以更好地稀釋膀胱中潛在的致癌物。

9.十字花科蔬菜。十字花科類蔬菜是最經典的抗癌蔬菜，包括西蘭花、菜花、卷心菜、甘藍菜和羽衣甘藍，其中含有的營養成分能抗擊結腸癌、肺癌、宮頸癌等。

10.炸、烤、焙增加患癌風險。在高溫下炸、烤或焙會導致肉食形成某些化學物質，增加致癌危險。而蒸、煮、燉等烹調方式相對較安全。另外，燉肉時最好加一些富含營養和防癌作用的蔬菜。

11.新鮮草莓和樹莓果汁。草莓和樹莓中含有植物營養素鞣花酸，這種強效抗氧化劑可通過多種方式抗擊癌癥，使致癌物質失去活力并減緩癌細胞生長。

12.少吃糖。雖然糖未必會直接導致癌癥，但熱量攝入過多，是肥胖的重要病因之一。而肥胖又是一大癌癥風險。因此富含維生素的水果可以作為糖的替代品。

5種食物能解酒

文/徐澄

雞蛋 雞蛋中富含半胱氨酸，具有解毒作用。研究發現，雞蛋中豐富的B族維生素可緩解宿醉。

生姜 酒后吃點姜可刺激和恢復消化系統，緩解便秘、脹氣等不適癥狀。

番茄汁 飲酒之后，肝臟負責分解酒精以保持血糖穩定。血糖是大腦的主要能源，血糖過低容易導致疲倦、乏力等。此時喝一杯番茄汁可補充糖分，減輕醉酒后頭痛等不適感。

篇2

葡萄奶昔的做法：

1、葡萄洗凈去皮，瀝干水分。

2、將葡萄放入料理機，加入牛奶。

3、啟動料理機，打成奶昔即可。

葡萄：

葡萄為葡萄科葡萄屬木質藤本植物，小枝圓柱形，有縱棱紋，無毛或被稀疏柔毛，葉卵圓形，圓錐花序密集或疏散，基部分枝發達，果實球形或橢圓形，花期4－5月，果期8－9月。

葡萄是世界最古老的果樹樹種之一，葡萄的植物化石發現于第三紀地層中，說明當時已遍布于歐、亞及格陵蘭。葡萄原產亞洲西部，世界各地均有栽培，世界各地的葡萄約95％集中分布在北半球。

篇3

關鍵詞：血糖儀即時檢測；血糖；葡萄糖氧化酶

 應用血糖儀監測血糖可以為糖尿病患者評價血糖控制情況以及監控藥物使用帶來方便，同時因其操作簡單被醫院即時檢測（Point of care testing，POCT）監測血糖而廣泛應用。在實際工作中，血標本的采用在不同的醫療機構中并無嚴格要求。而便攜式血糖儀測定血液葡萄糖在指南中的采血部位要求是指尖毛細血管血，而應用其他來源血標本則可能出現誤讀[1]。有報道指出，如應用血清或血漿血測量血糖值，血糖儀的讀數常常偏高[2]。因而，POCT測量的準確性是其能否廣泛應用并被治療采納的關鍵。目前，血糖的定值仍以檢驗科實驗室的葡萄糖氧化酶測量的檢測結果為準。文章旨在探究血糖儀即時檢測與葡萄糖氧化酶檢測血糖值的差異，評價即時檢測（POCT）的可靠性，為血糖儀血樣采集的統一尋找依據。現將研究結果報告如下。

1 資料與方法

1.1  一般資料：選取我院2011年6月～2012年2月門診及住院患者100例，男48例，女52例，年齡32～77歲，平均（54.1±14.9）歲。所選病例無貧血等血液病史，近期無Vit C藥物使用史，無酮癥酸中毒和尿酸增高患者。

1.2  研究方法：肘靜脈血抽取2 ml，取少量立即行血糖儀測量靜脈血全血血糖，剩余標本置于血清分離管中送檢，血清分離血樣經3 000 r/min離心10 min后，吸取血清應用全自動生化分析儀2 h內測定靜脈血漿血糖。另采末梢血應用血糖儀檢測，依據說明嚴格操作。

1.3  儀器及試劑：H7600全自動生化分析儀及配套葡萄糖氧化酶血糖試劑。羅氏便攜式血糖儀活力型及羅氏原裝配套試紙及質控品監控測定過程。

1.4  統計學處理：采用SPSS 13.0軟件處理數據，各項參數以均數±標準差（ ）表示，對血糖儀及生化儀測定血糖濃度值均數采用U檢驗。

2 結果

3組血糖平均值：POCT組靜脈血血糖值為（8.04±3.32）nmol/L，POCT組末梢血血糖值為（8.47±3.64）nmol/L，葡萄糖氧化酶組血漿血糖值為（8.85±4.81）nmol/L。與葡萄糖氧化酶檢測靜脈血漿得到的血糖值比較，POCT所測得的靜脈血以及末梢血血糖值均較低。葡萄糖氧化酶測得的血漿血糖值與POCT測得的靜脈血血糖值比較，差異有統計學意義（P＜0.05），與POCT測得末梢血血糖值比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。

3 討論

糖尿病治療越來越突出患者及家屬參與治療過程的重要性。定時測量血糖對于掌握病情及監控血糖和用藥十分必要，這就需要方便快捷地血糖測量。血糖儀因其操作簡單，需要血量少，使得患者及其家屬能夠在家完成其血糖測量，方便記錄血糖情況。在很多醫療機構中，便攜式血糖儀也越來越多地應用。但不同產地不同型號的血糖儀在檢測結果上存在差異，給診斷和治療帶來影響。這一點除了推薦使用高質量的血糖儀，還需要對測量方式以及血樣來源加以規范。美國臨床檢驗標準委員會（NCCLS）發表的“醫院內POCT葡萄糖”C30-A要求進行床邊檢測的血糖儀以及配套試紙必須是相同品牌和相同型號的[3]。本次研究，我們采用的均為羅氏血糖儀活力型，并使用配套相同型號試紙，排除因不同血糖儀測量的誤差。曾有報道指出，血糖儀測量結果均低于生化儀測量結果，這一點也與我們的實驗結果相符[4-6]。我們的研究表明，血糖儀即時檢測末梢血血糖值與葡萄糖氧化酶測得血漿血糖值相近，其結果可以接受。但在實際治療中，POCT不能完全取代葡萄糖氧化酶測量。應用POCT測量還應定期對照葡萄糖氧化酶測量方法，校對血糖儀準確性。

4 參考文獻

[1] Clincal and Laboratory Stanards Institute.Ancillary(bedside) blood gluose testing in acute and chroncvale facilities ap-proved guidelin[J].CLSI,2002,22(1):2.

[2] 叢玉隆.POCT的臨床應用與存在問題[J].中華檢驗醫學雜志,2007,30(12):1325.

[3] 池勝英,陳筱菲,徐  克,等.33臺快速血糖儀調查結果分析[J].臨床檢驗雜志,2005,23(2):160.

[4] 馮仁豐.美國醫院內非檢驗科進行葡萄糖POCT的管理要求介紹[J].上海醫學檢驗,1999,14(3):139.

[5] 李俊琦,李  冬,趙  瑩.影響血糖檢測準確性的因素分析及對策[J].吉林醫學,2011,32(14):2884.

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關鍵詞靶向親和液相色譜質譜聯用技術； 黃藤總生物堿； 乙酰膽堿酯酶； 抑制劑

1引 言

阿爾茨海默病 （Alzheimer's disease， AD） 是以大腦中β淀粉樣蛋白老年斑 （SPs） 沉積、神經纖維纏結 （Neurofibrillary tangles， NFTs） 和突觸及神經元缺失為特征的一種神經系統退行性疾病，已成為威脅現代社會老年人健康的重大疾病之一[1]。針對AD的病理特征及病因所研發的藥物中， 乙酰膽堿酯酶抑制劑（AChEI）已廣泛用于臨床治療AD。AchEI通過抑制體內AChE活性，減少乙酰膽堿分解，緩解AD對生活能力和認知能力的損害[2]。但已上市的AChEI如他克林、利斯的明等雖然有一定效果，但存在活性不強、副作用較大的缺點[3]。目前，從中藥中尋找具有選擇性強、副作用小的AChEI成為醫藥研究的熱點[4～6]，同時也是治療AD的研究中最活躍的領域。

黃藤為防己科天仙藤屬植物黃藤（Fibraurea recisa Pierre.）的藤莖，收載于2015年版藥典，具有清熱解毒、瀉火通便的功效，主要含有異喹啉類生物堿，具有抗真菌[7]、抗炎、抗腫瘤[8]等藥理作用。本課題組前期研究發現[9]，黃藤總生物堿主要成分為黃藤素， 具有顯著抑制AChE活性的作用。

靶向親和技術主要利用親和原理，將待測的具有潛在活性的小分子混合物與生物活性受體（主要是酶類）在接近生理條件下的緩沖液中混合，得到受體配體復合物和未結合的小分子化合物，通過超濾除去未結合的小分子，復合物經有機溶劑處理，將小分子配體釋放出來，再通過LCMS技術，直接或者間接檢測解離的復合物[10，11]。與傳統生物活性篩選方法即在化合物庫中逐一的篩選相比，此方法靈敏、快速，且不改變蛋白結構， 可以高通量地篩選出活性化合物[12，13]， 已廣泛用于篩選與靶蛋白結合的藥物中[14]，成為藥物篩選的重要工具[6，15，16]。本研究采用靶向親和液相色譜質譜聯用技術篩選黃藤中能夠抑制乙酰膽堿酯酶的活性成分，篩選出12種具有潛在抑制乙酰膽堿酯酶的活性成分，并鑒定了其中6種化合物，為建立中藥中乙酰膽堿酯酶抑制劑的快速篩選提供了科學依據。

2實驗部分

2.1儀器與試劑

Agilent 1100 series LCMSD液相色譜質譜聯用儀（美國Agilent公司），包括：Agilent SL型多級離子阱質譜儀、低壓四元梯度泵、二極管陣列檢測器（DAD）、自動進樣、柱溫箱、Chemistation化學工作站等； BS124S電子天平（美國賽多利斯公司）； MR96A自動酶標儀（深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司）； XL90超速離心機（美國Beckman公司）； 旋D式恒溫振蕩器（蘇州培英實驗設備有限公司）； 尤尼柯UV2800紫外可見分光光度計（尤尼柯（上海）儀器有限公司）； RE5298型旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠）。

黃藤藥材購于安國市瑞泰堂藥材行，經吉林省中醫藥科學院趙全成研究員鑒定為防己科天仙藤屬植物黃藤（Fibraurea recisa Pierre.）的干燥藤莖； 黃藤素、鹽酸藥根堿、鹽酸小檗堿均購于中國食品藥品檢定研究院（批號分別為：0732200005、110733201007、110713200609）； 巴馬汀紅堿、7，8二氫8羥基小檗堿、Groenlandicine（自制，純度≥98%）。乙酰膽堿酯酶（來源于蒼蠅頭部， 上海源葉生物科技有限公司）； 碘化硫代乙酰膽堿（ATCI）、5，5二硫雙（2硝基苯甲酸）（DTNB）（美國Sigma公司）； 鹽酸多奈哌齊（衛材（中國）藥業有限公司）； YM30離心超濾管（美國Millipore公司）； 24孔板，96孔板（美國Corning公司）； 乙睛、甲醇和甲酸均為色譜純（美國Fisher公司）； 實驗用水為娃哈哈純凈水； 其余試劑均為分析純。

2.2黃藤總生物堿樣品的制備

取黃藤藥材2 kg，用10倍量的60%乙醇回流提取2次，每次2 h，濾過，合并濾液，減壓濃縮得浸膏228.3 g。將浸膏加水溶解，通過預先處理好的D101大孔樹脂柱（Φ100×10 cm），先用3倍柱體積水洗，再用8倍柱體積40%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇，干燥，得黃藤總生物堿50.6 g。

取黃藤總生物堿適量，加0.1 mol/L磷酸鹽緩沖溶液（PBS，pH 8.0）溶解，制成1.0 mg/mL的溶液，用于超濾實驗和活性實驗分析。取黃藤總生物堿適量，加甲醇溶解并配制成0.1 mg/mL溶液，用于液相色譜質譜聯用分析； 黃藤素、鹽酸藥根堿、鹽酸小檗堿、巴馬汀紅堿、7，8二氫8羥基小檗堿、Groenlandicine對照品用上述的0.1 mol/L PBS溶液配成1.0 mg/mL溶液，用于活性實驗分析。

2.3乙酰膽堿酯酶（AChE）活性抑制實驗

參照文獻[17]方法并做適當調整，在96孔板中加入0. 1 mol/L PBS緩沖液（pH 8.0） 140 μL，待測樣品溶液20 μL和0.5 U/mL酶溶液15 μL，混勻，在4℃放置20 min。加入2 mmol/L DTNB 10 μL和15 mmol/L ATCI 10 μL，37℃反應20 min，立刻測定405 nm處吸光度值。同時設立背景對照組和空白對照組。按下式計算酶活性抑制率（Enzyme activity inhibition ratio， EAIR）。

EAIR（%）=Ablank-（Asample-Abackground）Ablank×100%（1）

其中， Ablank表示不加樣品體系的吸光度值； Asample表示為加入樣品和酶的體系吸光度值； Abackground表示為不加酶的體系吸光度值。

樣品組設定5個等梯度濃度，重復實驗3次。以樣品濃度（μg/mL）為橫坐標，以AChE抑制率為縱坐標，繪制曲線，計算IC50。

2.4離心超濾篩選方法

參照文獻[15，18]的方法，在24孔板中加入0.1 mol/L PBS緩沖液（pH 8.0）300 μL、1 mg/mL黃藤總生物堿溶液100 μL、0.5 U/mL乙酰膽堿酯酶的酶液100 μL，37℃孵育30 min，轉移至離心超濾管（YM30）中。12000 r/min離心20 min，加PBS緩沖液重復3次，每次500 μL，棄去離心液，再向超濾管中加入90%（V/V）甲醇500 μL，室溫放置10 min后，離心15 min，重復3次，合并離心液，冷凍干燥后加40 μL甲醇/水（50∶50， V/V）溶解，用于LCMS/MS分析。同時設立空白對照組和陽性對照組。

同時，為了考察酶與底物的相互作用強度，設置了滅活酶的對照實驗。AChE經100℃熱滅活后，通過AChE的抑制率實驗確定酶已失活。并稱取等量的滅活酶同法處理進行實驗，求出結合率（Binding degree， BD）[19]。

BD（%）= （Ab-Ac） /Aa×100%（2）

其中， Aa表示親和離心超濾篩選前黃藤總生物堿溶液各化合物色譜峰面積； Ab表示親和作用后活性酶結合的各相對應化合物的色譜峰面積； Ac表示變性失活酶結合的各相對應化合物的色譜峰面積。

2.5色譜與質譜條件

液相色譜條件： ACE C18色譜柱（250 mm× 4.6 mm， 5 μm）； 流動相： 乙腈0.1% H2PO4（每100 mL中加0.1 g 十二烷基硫酸鈉）=36∶64（V/V）； 流速： 1 mL/min； 檢測波長： 345 nm； 柱溫： 30℃； 進樣量： 10 μL。

質譜條件： 電噴霧離子源（ESI）； 正離子模式同時采集； 掃描范圍m/z 50～1200； 目標分子量： 350 Da； 干燥氣溫度： 350℃； 干燥氣流量： 10.0 L/min； 霧化氣壓強： 0.24 MPa； 毛細管電壓： 4 kV。

3結果與討論

3.1黃藤總生物堿的含量測定結果

參照文獻[20]中總生物堿的測定方法，以黃藤素為對照品，采用0.05%溴甲酚綠為酸性染料進行染色，在200～400 nm波長范圍內進行掃描，最終選擇在345 nm測得2.2項下制備的樣品中總生物堿的含量為97.5%。說明制備的樣品主要成分為生物堿類成分，本研究所建立的提取方法可以作為黃藤總生物堿的提取方法。

3.2黃藤總生物堿的靶向親和液相色譜質譜聯用分析

黃藤總生物堿經親和超濾實驗共篩選出12種可能的AChE抑制劑（見圖1A）。與黃藤總生物堿原溶液的HPLC色譜圖（圖1B）相比，在超濾實驗條件下黃藤總生物堿中只有部分化合物能夠與乙酰膽堿酯酶結合。并且與不加酶的空白對照試驗的HPLC色譜圖相比，說明本方法可以有效地避免由小分子化合物吸附到超濾膜上而造成假陽性（圖1C）。 進行了黃藤總生物堿與滅活的乙酰膽堿酯酶的結合實驗，依據色譜峰的峰面積與其在緩沖溶液中的濃度成正比，利用圖1B和1D的HPLC色譜圖中峰面積的變化情況來反映其對應的化合物與AChE的結合率[12]，求出各化合物與AChE的結合率均大于13.00%，這表明黃藤總生物堿中的活性成分能夠與AChE有效結合（圖1D）。對陽性對照藥鹽酸多奈哌齊進行了超濾實驗（見圖1E），結果表明， 超濾實驗方法可行，具有較強的準確性。

采用HPLCDADESIMS2聯用技術，在正離子模式下，通過自動二級質譜方式同時獲取樣品中生物堿類成分的一級和二級質譜圖，根據每一成分的色V保留時間、準分子離子峰和二級質譜碎片信息，參照ESIMSn數據、標準對照品及文獻[7，21～23]數據進行對比，對其結構進行鑒定，確定了黃藤總生物堿中12種可能的AChE抑制劑，并且鑒定了其中6種化合物的的結構，分析結果見表1。

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隨著改革的不斷深入，以人為本的理念不斷深入人心，大學生個性的發展不再像以前被禁錮和束縛，表現出多文化發展趨勢。同時，健美操是一項富于創新的運動，不斷面臨著改革，如今大量風格各異的時尚運動，直接沖擊現有的健美操教學大綱，學生對現有的教學模式有了進一步需求，一周一次的健美操選項課，很難維持高校健美操活動的開展，也滿足不了學生健身的熱情和愿望，希望有更多的機會實踐、學習、展示，發揮自己的特長。所以，隨著健美操運動的迅速發展，必須改變單一的健美操課程模式，分析健美操課程發展中存在的問題，探討健美操課程的發展，對健美操課程重新定位，實行課內外一體化創新模式，有利于高校健美操課程的健康發展。

1 研究對象與方法

1.1 研究對象

實驗組160人，2012級健美操選項班學生。

1.2 研究方法

（1）文獻資料法，查閱國內相關的健美操教學。（2）問卷調查法，選擇健美操班的學生發放問卷160份，回收160份。（3）系統法，運用系統知識與方法，對課題的研究內容進行全面分析和研究。

2 研究的結果和分析

2.1 高校健美操教學現狀調查及反思

目前，在教育不斷改革的過程中，高校健美操課程始終落后于時代的發展，教育觀念基本上決定某種教育形式的形成和發展。受傳統教育思想影響，對體育課程的認識不夠全面，課程改革創新趨于形式和表面。一些高校的健美操課程尚無完整的教學體系。具體表現在以下幾個方面：教學內容單一，主要以大眾健美操為主，缺乏系統性。教學形式枯燥，教學方法單調，缺少靈活性。考評方法片面，評定指標窄，缺少全面性。教學評價采用單純性的技術評分制，過多依賴教師的主觀認定。所以傳統的健美操教學，過多強調教師的主導作用，學生仍然沒有擺脫被動接受教學內容的狀況，教學效果也偏重學生學會幾個動作，學生單純地模仿、記憶、練習，沒有思考、交流、探索的余地，更談不上創新能力培養。這一教學模式，忽視和否定了學生在選擇學習內容、學習方法、學習進度、學習環境等方面的主動性。忽視了學生的興趣。教學評價只考慮效果的評價，而忽略了學生個性發展過程的進步度的評價，挫傷了學生的自信心。只重視課堂教學，舍棄課程延伸空間，而且學生中各方面素質存在差異，在健美操的學習中出現體能、技能、心智參差不齊的現象，統一的內容、模式制約了學生個性的發展、單一的課程模式，制約了健美操的發展。

3 “課內外一體化”健美操教學模式的構建

美國教育家喬以斯?威爾在他的《教學模式》一書中，把教學模式界定為“一種可用于形成課程，設計教材和在課堂以及其他場合指導教學的計劃和范型”。明確指出，體育教學不應簡單地把課堂作為其唯一的實施場所。我們在借鑒國內外先進體育教育理論及總結以往教學得失的基礎上，從我校大學生的具體情況出發，加強教材建設，優化實踐內容，加強課外練習，組建健美操學習班。構建以課堂教學為主，以課外練習為輔，以健美操代表隊為點，以大型團體操表演為平臺的“課內外一體化”教學模式。全面提高健美操教掌質量，從健康、娛樂、文化、社會多個層面發揮健美操的功效。本模式包含的內容，既相互獨立，又相互聯系。（見圖1）

4 “課內外一體化”教學模式的實施

4.1 優化教學內容

健美操時代感強，是一項富于創新的運動，它以日新月異的發展速度出現在健身的潮流下，內容從開始的大眾健美操到風格各異的時尚運動，拓寬正規課程內容，完善健美操已開課程，融入時下流行的元素，如形體、啦啦操、舞蹈健身、拉丁健美操等，增加趣味性，體現時代感，提高身體素質，娛樂身心，采用新的課程模式，以實現學生身心協調發展的新目標。

4.2 改進教學方法

由健美操顯性課程向隱性課程拓展，把健美操課從單純的傳授知識和技能中解脫出來，改革教學方法，優化教學手段，提高教學效率。如：討論法、評價法、學生帶領法、分組比賽法、表演法、隊形變化法等。合理地利用和選擇教學手段，使學生能欣賞到高水平的比賽和表演，提高學生的信息量，強調學生形成積極主動的學習態度心理健康，審美觀念，鍛煉價值，不斷拓展健美操的教育功能，培養學生自主學習、自覺鍛煉的功能。

4.3 拓寬教學評價體系

建立多元化的綜合評價體系，構建體能、技能、運動參與、心理健康、社會適應評價指標。學生身心素質的改善，能力的提高及進步幅度納入評價范圍。

4.4 課外活動

課外活動是高校體育課的延續、補充，是實施高校體育目標的重要途徑。要實現健美操的多種功能，每周一次的體育課畢竟非常有限，要充分利用課堂外的運動時間，增加對相關健美操知識的引導，讓學生的體育信息量及興趣盡可能最大化，消化過程延伸到課外，從而實現學生在校期間體育鍛煉不間斷，近目標的實現“課內外一體化”。具體實施如下。

（1）組建健美操社團。

（2）建立領操員制，為學生提供展示才能的機會。

（3）進行專題講座，擴容學生信息量，又可答疑解惑。

（4）健美操課外培訓及選修課。

（5）院系間健美操比賽，及不同級別，不同層次的教學比賽。

4.5 校健美操代表隊的訓練比賽

由健美操選項班的普通學生組建的校運動隊，其訓練與競賽是高等院校教學的重要內容。它的比賽成績，代表著一個學校該項目的發展水平。同時，這也是各高校展示宣傳自己的一個重要手段，健美操隊的訓練和比賽，能起到一定的“比賽效應”和“表演效應”，對健美操運動的普及宣傳有著不可低估的作用。

4.6 校園文化建設

大型團體操的表演是實現健美操教學過程的一項重要舉措。是健美操課內外一體化的新途徑，在每年的校運動會開幕式上，組織健美操選項班的學生進行大型團體操的表演，現已成為校運會獨特的一道風景線，深受學生的喜愛。這也是健美操教學效果最好的檢驗方式之一。為大學生提供展示自身才華的平臺，對健美操教學和在更大范圍內的開展活動有著積極的促進作用。同時，由學生自己組織的院系內比賽和健美操選項班教學比賽，對學生的創造力和組織能力也是一個很好的鍛煉。

5 “課內外一體化”教學模式實施后的成績及效果

（1）參加團體操人數：2012年208人占總人數94%；2014年250人，占總人數97%。

（2）《全國大眾健美操鍛煉標準》通過率：2013年四級94%；2014年五級90%；2014年三級98%。

（3）健美操課出勤率：2012年出勤率97%，上課遲到率4.3%；2013年出勤率98%，上課遲到率1.4%；2014年出勤率99%，上課遲到率0.4%。

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【摘要】 目的 從采自不同來源的臨床標本分離凝固酶陰性葡萄球菌(CNS)，測定其胞外多糖蛋白復合物(glycocalyx)，并以胞外多糖產生作為毒力指標確定CNS的致病性。方法 用剛果紅粘附試驗檢測CNS的胞外多糖，并用剛果紅-阿里新藍染液對胞外多糖進行聯合染色，以采自皮膚的CNS樣本作陰性對照。 結果 在剛果紅瓊脂培養基中致病性CNS菌落呈黑色，陰性對照組CNS菌落為紅色。鏡下觀察，在淡藍色背景下致病性CNS菌體著色較深，菌體表面的蛋白復合物為深紅色，陰性對照組菌體著色較淺，菌體表面無蛋白復合物而顯淡紅色。結論 致病性CNS菌的分離及其細菌胞外多糖蛋白復合物的檢測并以此作毒力指標，為臨床判定致病性CNS感染能提供可靠的實驗依據。

【關鍵詞】 凝固酶陰性葡萄球菌;多糖蛋白復合物; 剛果紅培養基;剛果紅-阿里新藍染液

【Abstract】 Objective To isolate and identify coagulase-negative staphylococci (CNS) from different sites of clinical patients and evaluate clinical pathogenesis of extracellular glycocalyx of CNS as a potential indicator of virulence. Methods Isolates were obtained from clinical samples of blood， urine， sputum，semen， secretions and cerebrospinal fluid， then to detect extracellular glycocalyx of CNS with congo red adhesion experiment and stain with Congo red and Alcian blue together， and to compare with isolates from skins of healthy controls. Results A positive result of pathogenic CNS on congo red agar(CRA) was indicated by black colonies and a negative control usually remained pink ones， with observation under light blue background by light microscope colonies of pathogenic CNS with production of glycocalyx stained by congo red and Alcian blue together grow upon deep red and ones of healthy control without glycocalyx present light red. Conclusion Isolation of pathogenic CNS and assessment of its virulence by CRA and congo red combining Alcian blue staining might offer theoretical basis and reliable experimental evidence for judging nosocomial infection of pathogenic CNS.

【Key words】 coagulase-negative staphylococci (CNS);glycocalyx;congo red agar(CRA);congo red and Alcian blue stains

凝固酶陰性葡萄球菌(coagulase-negative staphylococci，CNS)屬人體正常菌群，廣泛存在于人體的皮膚和黏膜上，一般情況下不會導致疾病。但隨著介入性治療和免疫抑制劑的廣泛使用，現已成為醫院內感染的重要的條件致病菌。怎樣快速、準確地檢出CNS并預測其耐藥性變化，對臨床治療及預防都有十分重要的意義[1～3]。本研究旨在通過剛果紅粘附試驗和剛果紅-阿里新藍聯合染色[4]，對采自臨床各科的各種標本進行CNS進行分離培養并做胞外多糖蛋白復合物的檢測，以胞外多糖產生作毒力指標確定CNS的致病性，建立快速可靠的診斷治療方法，為醫院有效控制CNS感染提供實驗基礎和理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗分組 本研究分臨床組60株和對照組20株。

1.2 標本來源 臨床組60株，采自恩施自治州中心醫院各科不同年齡和性別住院患者的痰液、尿液、分泌物、、血液和腦脊液。對照組20株，采自恩施自治州衛生學校不同年齡和性別學生的手部、耳垂皮膚。兩組標本均按規定要求采集。

1.3 細菌培養基及細菌染液配制

1.3.1 牛腦心浸液肉湯剛果紅瓊脂細菌培養基 剛果紅水溶液(0.8g/L)，121℃高壓滅菌15min。蔗糖(50g/L)、瓊脂(10g/L )，加雙蒸水1000ml，121℃高壓滅菌15min，待溫度緩慢降至55℃時，加入牛腦心浸液(37g/L)及剛果紅水溶液(適量)，制成固體培養基。

1.3.2 染液配制 阿里新藍(AB)染液：阿里新藍2g，冰醋酸3ml，蒸餾水97ml。剛果紅(CRA)染液：剛果紅2g，蒸餾水100ml。

1.4 細菌分離、鑒定

1.4.1 剛果紅瓊脂粘附試驗 將各標本分離出的CNS接種于培養基中，37℃條件下孵育24h，然后置室溫中24h。

1.4.2 剛果紅-阿利新藍染色 滴生理鹽水少許于潔凈載玻片上，用接種針挑取粘附試驗分離的細菌與之混勻后， 再滴加與生理鹽水等量的AB染液， 混勻并靜置3～5min， 烤箱50～60℃加熱固定， 直到染液水分完全揮發， 然后再滴加少許剛果紅染液， 均勻涂布， 用烤箱干燥，以蒸餾水沖洗至無染料流下為止，烤干水分，油鏡觀察。

2 結果

臨床組分離出35個陽性菌株，總陽性率為58%，對照組全部為陰性菌株(見表1)。表1 80株CNS粘附試驗結果

致病性CNS有胞外多糖蛋白復合物生成，在剛果紅瓊脂培養基中菌落呈黑色，且干燥，顯晶體光澤，陰性對照組CNS菌落為紅色。鏡下觀察在淡藍色背景下，致病性CNS菌體著色較深，胞外多糖蛋白復合物呈現暗紅色(見圖1～2)，陰性對照組菌體顏色明顯淡于陽性組而呈現淡紅色(見圖3～4)。

3 討論

在CNS引起的感染中，胞外多糖蛋白復合物的作用通過動物模型和臨床研究已得到確認[5]。Christensen等報道，60%有臨床意義的血培養分離 CNS產生了胞外多糖。雖不能直接說明胞外多糖蛋白復合物產生和疾病發生的關系，但有顯著的統計學意義[6]。對從一些臨床分離CNS產生胞外多糖蛋白復合物的研究表明，胞外多糖蛋白復合物有助于CNS粘附生物大分子并與療效差和易復發有關[4]。CNS的胞外多糖蛋白復合物，為介導外源物體表面粘附和延長感染病程的主要毒力因子，是評定CNS致病性的重要條件[7]。

CNS胞外多糖蛋白復合物檢測可提示其致病意義，且可提示其耐藥性變化。對明確感染診斷、制定有效治療方案有十分重要的意義，但不能作為惟一的因素。 CNS有數十種之多，是否所有CNS與醫院獲得性感染都有關，同一菌種是否都存在粘附性，在機體中所表現的毒力是否有差異，目前還不完全清楚[3]。 對于這些問題，還需進一步研究CNS的基因標志物，只有建立起敏感、快速，精確性和可靠性更高的鑒定方法或技術，才能更有效地解決醫院CNS獲得性感染的治療和控制問題。

在細菌培養過程中，CNS產生的胞外多糖蛋白復合物可能丟失，因此本研究將采自臨床各科的CNS標本，用牛腦心浸液肉湯剛果紅瓊脂培養法獲取粘附菌株和非粘附菌株，即直接向培養基加入剛果紅，使菌落在形成過程中顯色，且在細菌生長的最佳時期作涂片，再用剛果紅-阿里新藍染液進行聯合染色，直接、客觀地觀察到CNS胞外多糖蛋白復合物的生成情況，避免了陽性結果偏低的可能性。這種方法操作簡便，用途廣泛，除能用于細菌胞外多糖粘附素的觀察外，也將在臨床微生物原位標本檢驗中有較廣的應用價值。

參考文獻

1 Claire Poyart. Rapid and Accurate Species-Level Identification of Co-agulase-Negative Staphylococci by Using the sod Agene as a Target， Journal of Clinical Microbiology， 2001， 39: 4296-4301.

2 Kloos WE， Bannerman T L. Update on clinical significance of coagulase-negative sta-phylococci. Clin Microbiol Rev，1994，7:117-140.

3 Spare MK， Tebbs SE. Genotypic and phenotypic properties of coagulase-negative sta-phylococci causing dialysis catheter-related sepsis. J Hosp Infect，2003，54: 272-278.

4 Freeman DJ，Falkiner FR， Keane CT. New method for detecting slime production by coagulasc ncgativc staphylococci.J Clin Pathol.1989，42:872-874.

5 Ishak A，Groschel HM， Mandell L， et al. Association of slime wjth pathogenicity of coa-gulase-negative staphylococci causing nosocomial scpticcmia，Microbiology，1985，1025-1029.