核酸檢測情況范文

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核酸檢測情況

篇1

關鍵詞:物體的檢測 顏色的形變 校正紋理

中圖分類號:O411

文獻標識碼:A

文章編號:1007-3973(2012)007-114-02

1 前言

在視頻圖像中被監視的場景圖像變化情況稱為運動目標的檢測。由于陰影、目標與背景的差別很大且二者又運動一致,運動目標的分割和提取常見干擾為:目標合并,目標外形改變,目標消失。目前,背景圖像靜止不動的情況,究其原理主要分為三類:光流的計算方法、幀間差分方法、背景的消減方法。

幀間差分方法主要特點是:相鄰的幀差時間的間隔比較短,場景光線的變化時該方法不太敏感。背景消減法主要特點是:此方法與幀間差分法比較在靜止的背景模型下,在目標運動區域內可獲得完整而又精確的描述,較精確的目標圖像可以被提取出來。

傳統方法在特性方面存在不完善的地方,傳統算法中陰影的紋理、顏色、空間屬性在需要分析的區域中會造成的顏色的形變。本文給出未知攝像位置和場景特征的陰影檢測的算法,通過校正紋理和顏色的補償來獲得運動的陰影和物體。

2 運動目標分析

2.1 背景模型

在背景是靜止并且光照條件不變的情況下,此背景點的像素值是相對比較穩定的。統計一段時間內序列為n幅圖像每一像素點顏色值的期望 和方差 為像素點。和 組成圖像 為初始背景模型。如靜止場景內發生了光照強度改變,或靜止物體開始移動,圖像上物體靜止的像素點被認為前景點,跟蹤目標時產生的錯誤累加起來,需用序列視頻的方法提供信息對初始模型的參數進行更新。為不斷更新背景圖像的參數分布,引用參數更新率 (常數)。設 和 為時刻t點i的期望和方差, 為時刻t+1采集點i的顏色值,t+1時, 背景模型為 。

2.2 陰影模型

在可見光點光源和散射源照射下的情況下,假設任意一點的彩色光強值為x,則 , E為照明條件下函數,%d為波長參數,%j為反射系數,為

為點光源的強度,Ca為散射源的強度,L為光源的方向,N為表面的法向量,是半影系數轉變成為沒有陰影的系數。幀Fk陰影的描述通過照明變化進行,在RGB空間形成的對角形矩陣的模型: , 和 為背景Bk和幀Fk陰影像素RGB值。顏色比率,, 都小于1,為相關聯的變量,場景出現不同是在不同的時刻情況下,在短時間內可以近似認為不變量。

2.3 陰影的屬性

戶外陰影特征據分析如下:覆蓋的像素RGB分量數值降低;陰影像素的藍色分量在散射源的作用下其比例上升;若空間上目標內部無空缺,在目標內部陰影不會出現,由于陰影必須和背景緊挨著;在此陰影情況下區域紋理不被影響;同時陰影會保持一段時間。

2.4 本文算法

(1)運動目標的檢測。在文獻[3]中,通過對背景拆分得到開始運動目標M1。用兩種方法:對當前幀和背景的加權的平均數值進行背景刷新。IB是瞬間背景,由Bk中目標M1內的像素和幀Fk中目標M1掩模型外的像素兩部分數量組成,Bk+1由IB和Bk加權平均計算: 為變換后的速度,取值一般0.1。

(2)精簡初始陰影像素。設r、g、b顏色的分量為幀的分量,R、G、B顏色的分量為背景的分量。檢測中陰影屬性(1)每個像素顏色分量與背景相應分量比較,是否較小,排除不屬于陰影的像素。當,p(x)為背景的像素;當為造成的錯誤檢測在運動的目標、噪聲和陰影方面的檢測模型。初始化陰影掩模,則。與M1比,M2中運動目標的像素涉及到,計算量會發生變化在陰影區域被保留或減少步驟。檢測藍色分量。令 ,據戶外陰影屬性,比和大。初始化陰影掩模,則 , 。剔除M3中不屬于陰影的像素。

(3)反射率(相同)在表面的分割。文獻[1]介紹反射率圖像分割標準基于相鄰像素基礎上,如: 為相鄰像素亮度,%j1、%j2為反射比率。反射比率不受照明方向、亮度、反射函數及表面幾何性的影響。空間上顏色的分割。設p1,p2為兩個相鄰點,u和v為相鄰點各顏色分量,p1,p2連續性: ,因此 是RGB空間內的函數,此函數是連續的,若此函數以幀的形式則相鄰的兩個點在同一表面。三通道RGB檢測對空間分割更精確,同時對顏色較敏感。在幀FK上對掩模M3覆蓋面對反射率進行分割,所分割得尺寸進行濾波,形成兩個子區域集合:區域集合 和區域集合。

(4)顏色的形變校正。計算顏色的形變 。輸入區域和。中多數區域為陰影,而區域為表面不同的周圍目標的背景。依據為空間相鄰、區域顏色相近。找到顏色的形變 區域對在兩個區域集合中,即為被陰影覆蓋的區域和背景的區域。設 區域集合中的第j個子區域和 區域集合中的第i個子區域滿足所要求的條件,則(顏色的形變)的計算如下:

分子和分母RGB分量的平均數值。陰影覆蓋表面特征:多種表面出現相應顏色的形變比率 多種以及滿足要求的區域對也是多個。根據距離對這些顏色的形變進行分類,確定該類的 采用加權平均辦法,并顏色的形變設有n個:,其中wi為對應 子區域的像素個數。不同表面的顏色的形變集合,校正集合D的顏色的形變。在 子區域對幀FK校正顏色得到 ,與背景Bk對應區域的顏色相匹配。設 中區域的平均值 為顏色向量,均值為 為對應背景Bk顏色向量,定義兩個向量之間的夾角為:,表示該區域為陰影在角度很小時,陰影掩模 在子區域校驗后得到。

(5)校正紋理。陰影區域是否被遺漏和在陰影中目標的區域被排除可以使用校正紋理的方法。用比較簡單的一階求導的方法對圖像計算找到不同之處。子區域為陰影表明小于閾值 ,子區域為目標表明大于閾值。陰影的掩模和目標的掩模 通過 校正紋理得到 。

3 實驗結果和結論

通過多次采集圖像實驗,實驗結果如表1所示。

表面的劃分出現錯誤是因為利用傳統方法分割目標是不完全的。本文方法使得分割的結果比較完整。在的陰影中包含兩個不同表面的顏色的形變,目標分割使用本文方法是較完整的,對其中一個表面劃分是不會出現錯誤。本文方法較好地完成了陰影地檢測。

4 結論

由于傳統運動檢測算法存在不完善地方,在視頻特征不清楚的情況下提出陰影檢測的算法。最終發現陰影檢測的算法準確并且適用。此外,室內陰影檢測能使用如下算法:針對室內陰影模型特點,相應調整藍色檢測步驟,提出的框架算法。室內光線復雜或簡單,檢測也相應的有簡有繁。這是下一步攻關的難點。

參考文獻:

[1] 朗銳.數字圖像處理學[M].北京:北京希望電子出版社,2003:232-305.

篇2

[關鍵詞]核酸檢測;血液篩查;輸血風險;血液安全;轉錄介導擴增技術

輸血相關傳染病的預防和控制是全社會關注的焦點之一。2010年,國家衛生與計劃生育委員會(原衛生部)確定在全國15家采供血機構開展核酸檢測(NAT)試點工作,以進一步保證血液檢測質量,提升我國無償獻血者血液檢測水平。到目前NAT技術已經廣泛運用于全國各地血站的血液篩檢。該技術的檢測靈敏度較ELISA檢測方法高,能顯著縮短病原體檢測的窗口期,從而降低輸血傳播病毒的殘余風險50%以上。但NAT技術從理論上并不能完全消除“窗口期”,國外已有經核酸檢測后仍發生輸血后感染的病例報道,包括HIV和HBV。本中心2010年11月正式將NAT技術應用于血液篩查項目中,對全部無償獻血者血液標本進行HBV DNA、HCV RNA和HIV RNA核酸檢測。本研究通過對無償獻血者血液標本的常規血清學及核酸檢測結果的分析,以評估核酸檢測的檢測功效,以及本地獻血者人群的感染狀況。現將檢測結果報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

2011年1月~2014年12月,廣州血液中心采集的無償獻血者血液標本1146740例。所有無償獻血者均符合現行的衛生部《獻血者健康檢查要求》(GB18467-2011)。血液采集后同時留取核酸檢測標本和酶免檢測標本管各一支。核酸檢測標本采集、保存和處理等均嚴格按照衛生部核酸檢測試點技術要求操作。

1.2主要儀器與試劑

核酸檢測儀器:Grifols公司(原諾華診斷公司)PROCLEIX TIGRIS全自動核酸檢測分析系統,試劑配置恒溫箱(RPI)。試劑為PROCLEIXULTRIO Assay核酸聯檢試劑盒和核酸鑒別試劑盒(Discriminatory Assay)。核酸檢測試劑批號:(593226,614952,624775,116153等)。血清學檢測儀器:STAR全自動加樣儀和全自動酶聯免疫分析儀(FAME24/30)。ELISA檢測主要試劑包括乙肝表面抗原試劑盒(法國梅里埃,批號B11FA,20110704;上海科華:批號201101031,201201011,201302011)、丙型肝炎抗體試劑盒(美國強生ORTHO:批號EXE187,EXE208;上海科華:批號201103011,201202031,201303011)及人類免疫缺陷病毒(HIVl/2)抗原抗體檢測試劑盒(法國伯樂,批號1F0189,280213,3F0259;北京萬泰,批號1201 10204,120121 120,12013 1022)。

1.3檢測策略

血液標本采用血清學和NAT并行檢測操作策略;對核酸檢測單獨反應性標本進行分項鑒別試驗。

1.4檢測方法

采用PROCLEIX TIGRIS 全自動核酸檢測分析系統(TMA方法)對血液核酸標本進行單人份聯合檢測(HIV-1/HCV/HBV);對核酸檢測單獨反應性標本進行分項鑒別試驗;核酸檢測結果反應性結果由檢測系統軟件自動判定,其判定標準為樣本的S/CO值≥1。采用兩種不同廠家的ELISA試劑對獻血者標本進行血清學HBsAg、HCVAb、HIVAgAb檢測,嚴格執行說明書進行相關操作,通過陰陽性對照及室內質控品來控制試劑盒的質量和檢測的有效性;血清學檢測結果陽性的判定:樣本OD≥cut off值。

1.5檢測原理

Grifols核酸檢測試劑是以轉錄介導的擴增(transcription-mediated amplification,TMA)技術原理來檢測病毒核酸的方法。其檢測基本原理是:利用特異性的目標捕獲試劑和磁微珠分離純化被檢測病毒核酸分子,再通過TMA技術來擴增HBVDNA、HCV RNA和HIV-1 RNA(1型)的核酸片斷,最后通過雜交保護(HPA)方法檢測擴增產物。試劑中含有內標分子,用以監測整個反應過程,避免出現假陰性結果。

1.6統計學方法

采用SPSS17.0統計軟件進行處理和分析,對計數資料進行x2檢驗,P

2結果

2.1血清學與核酸檢測結果的比較

對1 146 740例獻血者血液標本,核酸檢測的陽性檢出率為0.97%,低于血清學(HBsAg,HCVAb,H1VAbAg三項之和)的檢測陽性率1.66%,二者之間的差異具有統計學意義(x2=2128.4,P

2.2核酸檢測

4年中Grifols單人份核酸檢測系統的總陽性率為0.97%,并且陽性率呈現逐年緩慢增加的趨勢。在對每年的檢測陽性率進行比較時,各年度間檢測陽性率未見統計學意義(x2=2.442,P

2.3血清學合格標本中核酸檢測情況

在1114428例血清學檢測合格標本中,單人份核酸檢測共檢出2457例核酸反應性樣本,核酸單獨反應性比率為0.22%;在對每年檢測陽性率進行比較時,各年度間血清學檢測合格標本其NAT檢測陽性率之間的差異具有統計學意義(x2=16.506,P

2.4核酸鑒別結果

在2457例核酸單獨反應性標本中,鑒別試驗反應性的樣本為718例,其中,HBV-DNA 711例,HCV-RNA 4例,HIV-RNA 3例,獻血者中核酸單獨陽性的樣本大多屬于HBV感染,HBV DNA鑒別陽性率與另外兩者間的差異具有統計學意義(x2=2091.464,P

3討論

目前,國內外應用于血液篩查的核酸檢測技術主要有TMA及PCR兩種。我中心使用的是Grills公司基于TMA技術的核酸檢測試劑,對全部獻血者樣本進行單人份核酸檢測。這種檢測方法的靈敏度高,反應條件簡單,擴增效率高,可以防止低拷貝的病毒陽性血液的漏檢。其分析靈敏度為:HBVDNA 10.4IU/mL,HCV RNA 3.0IU/mL和HIV RNA45.0IU/mL。并且該方法的整個反應過程在1個試管中進行,因此也減少了污染發生的可能。本研究顯示,廣州地區無償獻血者血液標本的核酸陽性檢出率明顯低于酶免檢測項目陽性檢出率(P

在獻血者血液篩查中引入核酸檢測技術,其主要目的是檢測出原有血清學檢測可能漏掉的具有感染性的獻血者樣本。在本研究中的1114428份血清學檢測合格標本中,單人份核酸檢測共檢測出反應性樣本2475例,陽性檢出率為0.22%(2457/1114428),結果明顯高于大連和沈陽地區0.07%,這可能與各地區病毒流行率差異、檢測樣本數量、使用試劑差異,以及檢測模式(單人份與多人份混樣檢測)不同有關。在對這些核酸單獨陽性樣本的鑒別檢測中,共檢出718例陽性結果,鑒別陽性檢出率為29.22%。這個鑒別率與汪德海等報道的一致,而低于大連,杭州等地的數據。而出現核酸檢測聯檢反應性,而鑒別試驗全部為非反應性的原因可能有:(1)聯檢結果假陽性。這可能是由于酶免及核酸檢測平行進行,檢測人員若操作不規范,導致陽性標本的小范圍污染,增加聯檢結果假陽性的可能;或由于檢測試劑本身的非特異性反應。(2)鑒別試驗的假陰性。如病毒濃度處于極低的濃度水平,由于病毒顆粒在血漿中的泊松分布,導致取樣時未能吸取到帶有病毒的樣本;或可能是因不合適的儲存條件,不良的運送,干擾物質的存在,導致樣本中病毒的降解,也會造成鑒別試驗假陰性的結果。由于我國乙肝的流行率相對較高,因此獻血者中核酸單獨陽性的樣本大多屬于HBV感染。而HBV感染,特別是隱匿性乙肝感染(OBI)的病毒濃度通常很低,因此出現上述低濃度樣本的可能性很大。已有文章報道,對于不可鑒別的樣本,采用其他核酸檢測方法,或乙肝感染標志物(如乙肝核心抗體)進行檢測時,部分樣本仍然呈現陽性結果。提示這些不可鑒別的樣本中存在一定比例的真陽性。

篇3

關鍵詞:核酸適體;生物醫學;應用

1基于核酸適體的生物醫學診斷

1.1生物大分子檢測

隨著人類基因組計劃的完成,研究蛋白質等生物大分子的具體跟蹤檢測高靈敏分析方法已經是目前基因組學的研究熱點和重點。原來的蛋白質檢測一般是根據抗原/抗體免疫分析的方式來進行檢測,一般分析出來的數據都會受到抗體性質的干擾。而核酸適體能夠與蛋白質進行特異性結合,在不同溫度、不同鹽濃度絡合劑條件下能夠進行特異性變性與復性研究,所以在蛋白質分析檢測上的使用越來越受到各方面重視。運用核酸適體能夠通過GIC方法實施擴增的特點,增強酶聯核酸適體診斷方法的檢測精確度,把兩種不一樣的核酸適體組合到蛋白或蛋白復合體兩個相近的結合位置上,兩種核酸適體的游離末端通過互補堿基鏈接起來,最終根據GIC方式實施實時擴增。與傳統的檢測方法相比較,該種新型檢測方式非常明顯地應用了核酸適體在發展各種可取代抗體的蛋白靶的功能,在測定體內蛋白質含量和研究蛋白質的功能以及對疾病的早期診斷等方面擁有非常大的使用價值。

1.2腫瘤細胞鑒別分析

從分子水平實現早期癌細胞的準確檢測具有非常重要的意義,因此設計和發展特異性分子探針成為癌細胞早期檢測的關鍵因素。研究顯示,將前列腺專一性膜抗原(GFBE)的核酸適體連接到具有近紅外光性能的量子點上,可以特異性地檢測前列腺癌細胞,為核酸適體應用于活細胞及生物體內的分子檢測提供了新思路。在癌癥早期檢測中,從病人血液或唾液等收集到的惡性腫瘤細胞含量通常較低,所以發展一種從低含量體液中聚集并檢測腫瘤細胞的方案成為目前癌癥早期診斷的核心,運用先進的雙功能納米粒子作用于白血病細胞的加速富集與檢測的速度。運用一種修飾有核酸適體的吸引力納米粒子實施靶細胞的提取和聚集,還有一種摻雜有熒光色素的納米粒子添加到待檢測系統中完場信號放大,氧化鐵混合的二氧化硅納米粒子接觸面積大,這相比較于一般微米尺寸粒子擁有更加強大的萃取功能,所以相對于免疫表型等復雜的檢測方式,這種方式僅僅需要完成分析即可。這種方法不單單可以從全血樣本中反復提取得到靶細胞,而且更具有研究意義的是,可以廣泛使用于多種癌細胞的同時提取和鑒定。

1.3腫瘤標志物的甄定

癌癥的臨床診斷現在還是主要依賴于影像學檢查組織和細胞表面形態,一般情況分辨率不高,不能夠完成癌癥的早期診斷等問題,特殊檢測惡性腫瘤相關組織和細胞標志物是完成癌癥早期診斷的一個十分正確的方法。雖然腫瘤標志物在很早之前就用于癌癥的臨床實驗診斷,但是現在腫瘤標志物種類相對較少,特異性和靈敏度不夠準確,并且不能夠表明各項惡性腫瘤產生機制,不能準確地用于癌癥的早期診斷。由于抗體的蛋白芯片雖然已經被努力地用來尋找與惡性腫瘤有關的蛋白質標志物,但是因為惡性腫瘤的多樣性,以及抗體制造和使用上的特異性而效果不明顯。所以,現階段急需找到一種能夠直接得到癌變組織細胞的特征分子標志,快速發現癌癥發生、發展期間的生物標志物,然后完成這些生物標志物特異靈敏檢測。

2基于核酸適體的靶向治療

分子水平靶向治療的核心是使癌癥治療更加有效。低毒和無副作用用于篩選獲得的核酸適體擁有比抗體還要好的化學性質,可以與蛋白特異性結合而且能夠間接影響蛋白功能,并且不會引起體內免疫原反應,而且滲透性好,有可能成為新的靶向治療方式并且許多核酸適體不可以將細胞完全吸收。為了完成細胞內的靶向分子轉送,開展高效的核酸適體載體體系已經成為該領域研究的核心問題。通過觀察癌癥細胞細胞核酸適體的內化過程,可以觀察到內化的核酸適體可以與鐵傳遞蛋白的內涵體相互結合,這就說明核酸適體能夠定向地進入靶向細胞,并且不存在細胞毒性,可以將抗癌藥物和靶向癌細胞表面分子的核酸適體抗體等相連接,能夠將藥物特異性輸送到癌灶,不單單能夠增強化療效果,而且還可以降低藥物毒性,把容易被生物降解的高分子與抗核酸適體相結合。

3結語

腫瘤細胞及其標志物的核酸適體,這些核酸適體被大量地運用于生物醫學檢測疾病標志物發現以及靶向治療。目前已經可以根據核酸適體對癌癥病人樣本進行染色,根據流式細胞計數等方式完成對癌癥的快速診斷。除此之外,只要是有關抗體的診斷領域,大部分都能夠用核酸適體替代,能夠彌補抗體在診斷領域應用中的缺點和不足之處。

參考文獻:

[1]黃田貞,林馨馨,陳媛媛,等.核酸適體電化學傳感器研究的新進展[J].化學傳感器,2010(1).

[2]雷麗紅,傅迎春,徐霞紅,等.基于核酸適體的電化學生物傳感器[J].化學進展,2009(4).

篇4

   對此,寧夏教育考試院官網12月25日“情況說明”稱,為做好考試疫情防控和組考工作,考前寧夏教育考試院先后通過4種方式告知考生,參加考試必須按照考點疫情防控要求進入考場。其中,在12月17日還向考生發送了短信或微信提醒,所有考生應在首場考試時持48小時內核酸檢測陰性結果紙質證明參加考試。

   具體通過哪些方式告知考生,前述“情況說明”介紹:

   一是12月7日寧夏教育考試院通過“中國研究生招生信息網”(研考唯一報名網站)、“寧夏教育考試院官網”了《寧夏2022年全國碩士研究生招生考試疫情防控通告》,告知考生“考試疫情防控措施將根據疫情防控形勢變化適時調整,請考生關注寧夏教育考試院官方網站,及時了解疫情防控相關要求”。

   二是根據自治區疫情防控工作要求,寧夏教育考試院分別于12月16日在“中國研究生招生信息網”、17日在“寧夏教育考試院官網”了《寧夏2022年全國碩士研究生招生考試疫情防控通告(二)》,明確“所有考生應在首場考試時持48小時內核酸檢測陰性結果紙質證明(核酸檢測出結果的時間在2021年12月23日早8:00后)參加考試”。

篇5

2022年春節馬上就要到了,大家開始關注回家相關政策,那么2022年春節回家最新規定是什么?2022年春節回家需要隔離14天嗎 ?春節回家需要核酸檢測嗎?下面小編為大家帶來2022年春節回家疫情最新規定,感興趣的小伙伴一起來看一下吧。

其實,春節回家是否需要隔離,這樣看情況而定。如果在疫情低風險區回家,并且沒有接觸疑似確診患者,還有持綠碼通行,那么是不需要隔離14天的。 但是,在你回家前,若你所回的地區有當地政府通報有確診病例,且被升級為中高風險地區,就需要隔離,且部分地區需持綠碼健康碼和核酸檢測,若無法提供就要隔離。在疫情高風險地區逗留的人,還是建議就地過年比較好。

比如上一年安徽疫情隔離規定,對于高風險地區需要集中隔離14天,進行2次核酸檢測,中風險地區需要在社區集中隔離管理,進行2次核酸檢測,低分險地區的合肥,如果當地有確診病例,需要持有3日有效核酸檢測陰性證明,如果本土無確診病例,則可以憑借綠碼通行。

以上就是春節回家需要隔離14天嗎介紹,希望對大家有所幫助。

(來源:文章屋網 )

篇6

一是建立健全應急指揮體系。

核酸檢測陽性冷鏈食品應急處置工作由市疫情防控指揮部統一領導,進口冷鏈食品監管組牽頭協調,市直及駐各有關單位按職責分工開展。各縣區疫情防控應急指揮部及其冷鏈食品工作機構在各職能部門的指導下具體負責現場應急處置工作。

二是加強預防和監測。

各級市場監管部門要督促進口冷鏈食品生產經營單位和個人嚴格執行《關于進一步加強進口冷鏈食品管控的通告》要求,強化進口冷鏈食品管控;要加強冷鏈食品疫情監測,對重點場所、冷鏈食品、直接接觸食品的貯存容器、工具、設備、環境及從業人員不間斷開展核酸檢測;各縣區、各有關單位應選取有資質的核酸檢測機構,按照相關文件要求,規范進行冷鏈食品采樣檢測。

篇7

艾滋病即獲得性免疫缺陷綜合癥,由感染“HIV”病毒引起。HIV是一種能攻擊人體免疫系統的病毒,它可以侵襲人的免疫體系,并終極損壞人體的免疫功效。隨著人體免疫力的下降,人會越來越頻繁地感染上各種致病微生物,而且感染的水平也會變得越來越來重,終極會因各種復合感染而導致逝死亡。艾滋病嚴重威脅人類的身心健康,當我們出現一些異樣的癥狀后,應該選擇什么樣的檢測方法,怎樣確診自己是否患有艾滋病就顯得格外重要。按規定的檢測程序對艾滋病的檢測方法研討如下。

1 材料和方法

1.1 材料:選取我院臨床初篩檢測病例72例,其中男性40例,女性32例。年齡28-63歲,平均39歲。

1.2 臨床癥狀:初期的開始癥狀像傷風、流感、全身疲勞無力、食欲減退、發熱、體重減少、隨著病情的加重,癥狀日見增多,如皮膚、粘膚出現白色念球菌感染,單純皰疹、帶狀皰疹、紫斑、血腫、血皰、滯血斑、皮膚容易損傷,傷后出血不止等。

1.3 方法:目前作為診斷手段使用的檢測主要包括抗HIV病毒抗體檢測、核酸檢測和抗原檢測。其中對病毒抗體的檢測是艾滋病初篩實驗室常規使用的方法

1.3.1 酶聯免疫吸附試驗(ELISA):目前應用的ELISA法有8種之多。它們的特異性和敏感性超過99%。在一些特殊情況下,當抗體檢測無法滿足HIV感染診斷的需要時,病毒分離及測定、核酸檢測、抗原檢測可作為輔助手段使用,這包括對非典型血清學反應樣品的診斷、HIV感染的窗口期診斷、新生兒早期診斷和對特殊樣品的診斷。

1.3.2 明膠顆粒凝集法(PA):它是快速、簡便的一種篩選方法。PA的基本過程是先將樣品稀釋,然后分別加入經抗原致敏的和未致敏的明膠顆粒,混勻后保溫(一般為室溫)。當血清中有HIV抗體存在時,經抗原致敏的明膠顆粒與抗體發生抗原抗體反應,根據明膠顆粒在孔中的凝集情況判讀結果。PA操作簡便,無需特殊儀器設備,適合對少量標本的檢測。是對大量人群初篩實驗使用的方法,例公民義務獻血的初篩檢測。

1.3.3 免疫熒光試驗(IFA):基本原理為應用H9或HUT78培養細胞作為載體,用HIV感染細胞,該細胞內就會含有HIV抗原,將HIV感染的淋巴細胞涂于玻片上固定,制備為抗原片,加入待檢血清,待檢血清中的抗 HIV抗體與抗原結合后,再與熒光素標記的抗人Ig結合,在熒光顯微鏡下可見到細胞內有黃綠色熒光。

1.3.4 免疫印跡試驗:主要用于確認試驗,基本原理是HIV全病毒抗原經過SDSPAGE電泳,將分子量大小不等的蛋白帶分離開來,然后再把這些已經分離的不同蛋白帶電轉移到硝酸纖維素膜上。將此膜切割成條狀,每一條硝酸纖維素膜上均含有經電泳分離過的HIV病毒抗原。將待檢血清樣品用稀釋液稀釋成1/100,再把它直接加到硝酸纖維素膜上,恒溫震蕩,使其充分接觸反應,血清中若含有抗HIV抗體,就會與膜條上的抗原帶相結合并呈現紫褐色。此確認實驗室是初篩陽性的標本送檢省疾控的HIV確認實驗室或市疾控的HIV中心實驗室進行的。

1.3.5 病毒核酸檢測:是通過檢測HIV RNA水平來反映病毒載量,具有很高的靈敏度,使用適時熒光聚合酶鏈反應(PCR)技術,能夠在HIV感染的前2周檢測到病毒核酸。病毒核酸檢測方法可用于HIV的早期診斷,如窗口期輔助診斷、病程監控、指導治療方案及療效測定、預測疾病進程等。目前常用的測定方法有逆轉錄PCR實驗(RT PCR)、核酸序列擴增實驗(NASBA)、分支DNA雜交實驗(bDNA)等。使用高靈敏度的適時熒光PCR技術,能夠在HIV感染的前2周檢測到病毒核酸。此種檢測是在HIV感染確診之后,判定使用抗病毒藥物的檢測指標,現在可有省疾控中心的艾滋病檢測實驗室完成。

2 結果

經過我院的檢測和分析后,14例送檢經確認實驗,未確診艾滋病感染。

3 討論

近年來,HIV檢測技術取得了很大進展,但是仍有不足的地方。例如ELISA法第四代試劑增加了P24抗原的檢測, p24抗原檢測能夠在病毒開始復制后檢測到血液中的可溶性p24抗原,但易出現假陽性。因此,陽性結果必須經中和試驗確認,該結果才可作為HIV感染的輔助診斷依據。還有病毒核酸檢測方法具有很高的靈敏度,對疾病進展的監測、抗病毒療效觀察和耐藥性監測非常重要。但是,由于HIV基因的多樣性,沒有一套引物可以覆蓋所有的HIV序列,使檢測的敏感性又受到限制。

HIV感染的診斷是艾滋病預防控制工作的重要組成部分,建立敏感實用的檢測方法對于監測、診斷或血液篩查,控制艾滋病的流行顯得尤為重要。總結以上討論的檢測方法,我們得出的結論是,既要提高檢測的敏感性、特異性,縮短窗口期,又要簡便、快速和降低成本已成為HIV檢測技術發展的要求和方向,很多的研究正致力于尋找病毒檢測的替代技術。

參考文獻

[1] 曹韻貞我國艾滋病的現狀中國抗感染化療雜志 2002,2(2):65 66

篇8

【關鍵詞】棘球蚴病;核酸檢測;細粒棘球絳蟲;多房棘球絳蟲

棘球蚴病(俗稱包蟲病),是棘球屬絳蟲的中絳期幼蟲寄生于人或動物體內引起的一種危害嚴重的人獸共患寄生蟲病,呈世界性分布,被世界衛生組織列為被忽視的熱帶病之一。目前全球公認的棘球絳蟲有五種,分別是細粒棘球絳蟲(E.granulosus)、多房棘球絳蟲(E.multilocularis)、伏氏棘球絳蟲(E.vo-geli)、少節棘球絳蟲(E.oligarthrus)、石渠棘球絳蟲(E.shiquicus)。細粒棘球絳蟲病呈全球性分布[1 ],在大洋洲、歐洲、亞洲、非洲和美洲等畜牧產業發達的地區發病率較高。全球每年遭受細粒棘球蚴病(囊型包蟲病)和泡型棘球蚴病(泡型包蟲病/泡球蚴病)危害的人數分別為300 萬和65 萬[2 ]。我國包蟲病人群患病率為0 .24%,患病人數約17 .4 萬[3 ],以囊型包蟲病為主,這與全球流行情況基本一致。目前棘球蚴病的診斷依據主要包括流行病學史、臨床癥狀體征、病原學檢測[4 ]、核酸檢測[5 -6 ]、免疫學[7 -8 ]和影像學診斷。由于棘球蚴在人體內發育較慢,早期體積較小,影像學技術(B超、CT、MRI)在感染早期不易發現病灶;感染早期,由于抗體水平較低或現有診斷試劑敏感性和特異性不高,免疫學檢測可能出現假陽性或假陰性。因此,免疫學和影像學診斷技術都存在一定局限性,不利于棘球蚴病的早期診斷。核酸檢測技術具有所需樣本量少、敏感性高、特異性強、反應快速等優點,已被廣泛應用于腫瘤[9 ]、細菌感染[10 -11 ]、病毒感染及寄生蟲病[12 -14 ]等臨床診斷。近年來國內外學者針對棘球蚴病診斷進行了一些核酸檢測技術的研發和應用,本文綜述如下。

1 常規PCR

聚合酶鏈式反應(PCR)發明于20 世紀80 年代,即在體外模擬DNA合成過程,在酶促合成反應條件下,通過控制溫度和時間對目的核酸片段進行指數級擴增。因其靈敏度高、特異性好、成本低、省時高效等優點,逐漸成為核酸檢測的重要手段。2017 年,Hamza[15 ]等根據線粒體基因12SrRNA為靶標建立了PCR方法,對48 只嚙齒動物肝臟病灶檢測,檢出5 只感染多房棘球絳蟲。2019 年,Mary-am[16 ]等以細粒棘球絳蟲COX1 和NADH1 為目的基因建立PCR方法,分析了伊朗80 例棘球蚴病患者的臨床標本,血清樣本的棘球絳蟲基因陽性率分別為15 .0%和10 .0%,包囊組織的棘球絳蟲基因陽性率分別為91 .3%和83 .8%。John[17 ]等以NADH1 和NADH5 為目的基因建立PCR方法,對來自羊及耗牛的85 份囊液標本進行鑒定,結果均為細粒棘球蚴,其中G1 基因型77 份,G3 基因型6 份,G6 基因型2 份,該研究首次在西藏牦牛體內檢測到G6 基因型。少節棘球絳蟲和伏氏棘球絳蟲報道較少。2013 年,Soare[18 ]根據COX1 建立PCR方法,對人體分離的肝包囊進行核酸擴增和測序,最終證實病原體為少節棘球絳蟲。2018 年,Fernanda[19 ]等根據COX1 建立PCR方法,對豚鼠分離的包囊進行核酸檢測,測序結果提示為伏氏棘球絳蟲。

2 多重引物PCR

多重引物PCR(Multiplex-PCR)技術原理與常規PCR無差異,區別在于反應體系中至少有兩對特異性引物,一次反應即可完成多個目的基因的檢測,大大提高了檢測效率。與常規PCR技術相比,mul-tiplex-PCR技術具有快速、準確等優點,在鑒別不同物種基因方面具有獨特優勢。2011 年,Molouk[20 ]等以NADH1 和rRNA為目的基因建立了multiplex-PCR方法,目的片段長度分別為395 和117bp,可以鑒別多房棘球絳蟲和細粒棘球絳蟲。2016 年,Ka-rin[21 ]等根據NADH1 和rRNA小亞基(Cest3 、Cest4 和Cest5)基因建立了multiplex-PCR方法,該方法能夠同時鑒別細粒棘球絳蟲和多房棘球絳蟲感染,可用于監測兩型包蟲病混合流行情況。2018 年,Ger-ald[22 ]等利用細粒棘球絳蟲的兩個特異性微衛星(EgSca6 和EgScall)分別建立了PCR和mulitiple-PCR方法,PCR方法分辨指數分別為0 .824 和0.987 ,而mulitiple-PCR顯示出了極高的分辨指數(0.994),提示mulitiple-PCR方法有較好的應用前景。根據遺傳學特征目前最廣為接受的理論[23 ],囊型棘球蚴病的致病原由4 個棘球絳蟲復合種構成:狹義細粒棘球絳蟲(E.granulosussensustrict)、奧氏棘球絳蟲(E.ortleppi)、馬棘球絳蟲(E.equinus)、加拿大棘球絳蟲(E.canadensis)。2019 年,Jing[24 ]根據atp6 、NADH1 和rrnL序列作為檢測靶標建立multi-plex-PCR方法,可以同時檢測狹義細粒棘球絳蟲、多房棘球絳蟲和加拿大棘球絳蟲,multiplex-PCR鑒定結果與原始測序結果一致,對3 種棘球絳蟲檢出限均為5pg/μL。用相同濃度3 種混合模板進行檢測,對細粒棘球絳蟲、多房棘球絳蟲、加拿大棘球絳蟲的檢出限分別為50 、10 和5pg/μL,表明multi-plex-PCR在快速診斷和流行病學調查方面具有優勢。2019 年,Fan[25 ]等根據狹義細粒棘球絳蟲、多房棘球絳蟲、加拿大棘球絳蟲線粒體基因設計種屬特異性引物,并建立了multiplex-PCR方法,其中狹義細粒棘球絳蟲和加拿大棘球絳蟲檢測限僅為0 .32pg,多房棘球絳蟲檢測限為1 .6pg,除與石渠棘球絳蟲有微弱交叉反應外,可與其他7 種絳蟲進行鑒別,顯示了較好的敏感性和特異性。

3 實時熒光定量PCR

實時熒光定量PCR(Real-timePCR)利用熒光染料或探針,實時監測核酸擴增過程中產生的熒光信號,并通過Ct值和標準曲線準確定量樣本目的基因的初始拷貝數。相比于常規PCR方法,Real-timePCR具有特異性更強、自動化程度高等優點,已經成為核酸定量檢測的重要手段。miRNA能夠在宿主的血清或血漿中穩定存在,對于疾病診斷和療效評價具有重要意義,近年來已成為研究熱點。2017 年,Guo[26 ]等通過測序分析在疾病模型的小鼠血清中找到7 種多房棘球絳蟲特異性miRNA,通過real-timePCR檢測發現emu-miRNA-10 和emu-miRNA-227 表達水平顯著上調,對于疾病診斷和了解宿主-蟲體相互作用具有重要意義。2018 年Alice[27 ]等利用U1snRNA和NADH5 基因片段建立了real-timePCR和微滴式數字PCR(dd-PCR)方法,檢測到泡球蚴病患者和患病動物血清中循環游離DNA(ccf-DNA)均為陽性,但由于泡球蚴病患者體內檢測到的ccf-DNA濃度過低,目前該方法還不能用于泡球蚴病診斷。2019 年,Ren[28 ]等利用real-timePCR比較60 名健康人和47 名多房棘球絳蟲病患者血清中3 種microRNA的表達水平,發現患者miRNA-483 -3p顯著上調,可作為疾病診斷的候選標志物。2019 年,Zahra[29 ]等建立real-timePCR方法并對30 名細粒棘球蚴病患者血漿進行檢測,發現egr-miR-r71 和egr-let-7 表達上調;術后3 個月和6 個月分別對患者血漿再次進行檢測,兩種miRNA表達水平明顯下調,提示該方法可以用于疾病早期診斷和療效監測。

4 環介導等溫擴增技術(LAMP)

環介導等溫擴增技術(LAMP)是一種新型的核酸檢測方法,該方法不需要模板的熱變性、長時間溫度循環、繁瑣的電泳和紫外觀察等過程,可以在等溫條件下一步完成,并通過肉眼讀取結果。因其具有簡單快速、特異性強、成本低等優點,已成為核酸檢測技術的研究熱點。2014 年,Marion[30 ]利用NADN1 基因建立了一種高效的LAMP方法,可以準確鑒別狹義細粒棘球絳蟲、馬棘球絳蟲、奧氏棘球絳蟲、加拿大棘球絳蟲及獅棘球絳蟲(E.felidis)。2016 年,Ahmed[31 ]根據線粒體基因NADH1 為靶標建立了LAMP方法,檢測限為10fg,具有較高的敏感性,通過肉眼可以直接判斷陽性結果,而且與血吸蟲、片形吸蟲、牛囊尾蚴等無交叉反應,具有流行區現場篩查的應用價值。

5 基于PCR的其他檢測方法

PCR-RFLP技術(限制性片段長度多態性聚合酶鏈反應)是用特異設計的引物擴增目的基因,對擴增產物片段進行酶切處理,以檢測其多態性。2012 年Canan[32 ]等根據ITS-1 和NADH1 基因分別建立了PCR-RFLP和PCR-SSCP方法,其中PCR-RFLP可以通過不同的限制性切酶產物鑒別細粒棘球絳蟲的基因型,而PCR-SSCP能夠通過肉眼就可以直接鑒別細粒棘球絳蟲的基因型。2014 年,Cagrl[33 ]等根據細粒棘球絳蟲和多房棘球絳蟲線粒體特異性基因建立PCR-RFLP方法,分析4 種不同限制性內切酶的酶切產物鑒別兩種蟲體,其中3 種酶(MboⅠ、MboⅡ、AccⅠ)只能酶切多房棘球絳蟲基因組PCR產物,而TSol只能酶切細粒棘球絳蟲基因組PCR產物,可以準確鑒別兩種蟲體。2019 年,Fallahizadeh[34 ]等采用狹義細粒棘球絳蟲ITS-1 基因建立了PCR-RFLP方法,使用4 種不同的限制性內切酶酶切PCR擴增產物。其中AluⅠ酶切產生800 和200bp,HpaⅡ酶切產生700 和300bp,Rsa酶切產生655 和345bp,而TaqⅠ不能酶切PCR產物。

篇9

作為宮頸癌生物基因檢測領域的市場領導者,國內領先的核酸分子診斷產品提供商,凱普生物(300639.SZ)專注分子診斷試劑、分子診斷配套儀器等體外診斷相關產品的研發、生產、銷售和服務。

經過十余年的發展,凱普生物基于強大的技術研發實力和自主知識產權的導流雜交技術平臺,研發了覆蓋傳染病檢測和遺傳病檢測兩大領域的系列產品,廣泛應用于臨床檢測、大規模人口篩查和優生優育管理領域。

日前,凱普生物的發明專利“人狀瘤病毒基因分型檢測試劑盒及其基因芯片制備方法”榮獲被譽為“中國知識產權奧斯卡”的第十八屆中國發明專利獎金獎,成為本屆體外診斷領域專利創新唯一的金獎。

凱普生物獲獎專利是在首創低密度基因芯片技術平臺,借助香港大學兩項專利,通過解決傳統雜交耗時長和易污染的技術難題,突破原市場主導技術――雜交捕獲方法不能分型技術障礙,解決HPV檢測鑒定病毒型別的難題和宮頸癌早期檢測的臨床跟蹤和治療的關鍵問題,在核酸層面實現HPV檢測產業化。

這只是凱普生物強大研發實力的冰山一角,在發展中,凱普生物已形成一套集自主研發、優勢技術、產學醫合作、流程質控、數據積淀、客戶需求挖掘、品牌價值于一體的核心競爭優勢循環系,收入及凈利潤快速增長,盈利能力領先同行業。

基于國際通用PCR平臺和擁有自主知識產權的導流雜交平臺,目前凱普生物已擁有國內產品注冊證書44項,獲得歐盟CE認證產品18項,同時在研產品超過30項,并且多項產品已進入臨床最后試驗階段及申請注冊,覆蓋宮頸癌、性病等傳染病,地中海貧血、蠶豆病等遺傳病,婚前體檢、新生兒缺陷病等領域。

包括多種品類HPV熒光試劑盒、HPV分型試劑盒、地貧檢測試劑盒、STD檢測試劑盒、乙肝熒光試劑盒、STD熒光試劑盒、耳聾基因檢測等產品。結合產品核準上市進度及核酸分子的市場發展情況,公司有步驟地推出適時新品,豐富現有產品系列,優化產品結構有望鞏固并提升公司的競爭地位,進一步提高市場份額。

凱普生物在核酸分子領域擁有較強的技術優勢。全球多家醫療機構、企業實驗室、高校實驗室采用公司研發的HPV21分型試劑盒、HPV13高危熒光試劑盒、HPV12+2高危熒光試劑盒等產品。并參加多屆世界衛生組織“HPV實驗室網絡檢測鑒定”,靈敏度、特異性等多項指標的測試結果優異。

截至2015年年末,以公司產品為研究工具的成果論文累計逾300篇,部分研究成果發表在國外著名專業雜志和國內核心學術期刊上,其中包括被SCI收錄的際論文30余篇。

2014-2016年,凱普生物三年中營業收入和凈利潤均保持穩健增長,2016年,公司綜合毛利率和凈利潤率分別達到85.67%、18.72%。不僅在營收上保持前進的步伐,凱普生物在現有診斷儀器以及診斷試劑基礎上,公司已在全國主要省市相繼成立 “凱普檢驗所”,從事核酸分子醫學服務,打造“儀器+試劑+服務”全鏈條的產業服務模式,增加盈利點,降低運營風險。

通過檢測網絡的鋪設,凱普生物奠定面向終端市場銷售的基礎,未來可逐步拓展終端市場銷售模式,直接面對終端患者,實現公司品牌的渠道下沉,解決渠道品牌商的限制格局,提升“凱普”品牌的傳播效能。

篇10

根據我國的疫情防控措施,疫情風險分為三個等級,即便高風險地區、中風險地區和低風險地區,而只有低風險的人員是可以正常出行的。不過隨著春節的臨近,現在各地返鄉政策也已經,那么2022春節低風險地區到低風險地區要核酸檢測隔離嗎?一起來看下。

根據國內的疫情防控政策,疫情低風險地區不對人員采取隔離措施,不得再設置障礙。也就是說從低風險區去低風險區一般情況下無需隔離,具體可咨詢當地防疫部門。

不過,現在各地都出臺了最新的返鄉政策,跨省出行人員,即便是低風險地區到低風險地區,雖然不用隔離,大部分都是需要持有48小時核酸檢測陰性證明的。

以上就是2022春節低風險地區到低風險地區要不要核酸檢測隔離介紹了。希望對大家有所幫助。

(來源:文章屋網 )