目的觀察鈣網蛋白(CRT)在瘢痕及正常皮膚成纖維細胞內的表達情況。方法采用免疫細胞化學染色和原位ELISA技術對體外培養的瘢痕及正常皮膚成纖維細胞進行CRT分布定位及表達水平探究。結果瘢痕和正常皮膚成纖維細胞在處于增殖生長狀態時，胞漿及核內均有不同程度的CRT表達，其中瘢痕成纖維細胞表達CRT水平(A摘要:1.97±0.15,ELISA492nm)明顯高于正常皮膚成纖維細胞水平(A摘要:1.43±0.12),差異有非常顯著意義(P＜0.01)；而在已融合的瘢痕和正常皮膚成纖維細胞內則均無CRT表達。結論瘢痕成纖維細胞內CRT的豐富表達對促進細胞遷移、信號傳遞及鈣存儲等方面均有著積極功能。

Studyontheexpressionofcalreticulininhypertrophicscar-derivedfibroblasts

【AbstractObjectiveToinvestigatetheexpressionlevelandintracellulardistributionofcalreticulin(CRT)inhypertrophicscar-derivedfibroblasts(HSF)andnormalskin-derivedfibroblasts(NSF).MethodsUsinganti-CRTantibody,CRTwasdetectedinHSFandNSFbyimmunocytochemistryandELISAtechnique.ResultsCRTwaspresentinthecytoplasmandnucleiinproliferatingHSForNSFinculture,butHSFpossessedsignificantlyhigherexpressionlevelofCRTthanNSF(P＜0.01).Whenthesecells(HSFandNSF)werefused,neitherintracellularnorintranuclearstainingforCRTwasobserved.ConclusionInHSFandNSF,thedistributionofCRTiswidespread.BecauseofitsabundantexpressioninHSF,wepostulatethatCRTasamultifunctionalproteinplaysanimportantroleinCa2+sequestering,integrin-mediatedsignallingandcelladhesion.

【KeywordsHypertrophicscarFibroblastCalreticulinExpression

增生性瘢痕(Hypertrophicscar,HS)作為創傷及外科手術后常見且十分棘手的皮膚組織疾病，瘢痕組織內成纖維細胞異常活化和細胞外間質過度沉積既是HS的重要組織學特征，也是HS發生、發展的物質基礎。鈣網蛋白(Calreticulin,CRT)最早是作為一種存在于非肌細胞內質網上的主要鈣結合蛋白得以熟悉的［1］，近幾年的探究發現摘要：除具有鈣離子儲藏功能外，CRT在參和并調節眾多細胞生物學活性功能上有著積極影響［2-5］，同時它還作為自身抗原在某些免疫性疾病的發病機制中有著極其重要的價值［6］。我們通過CRT抗體并利用原位ELISA及免疫細胞化學染色技術檢測瘢痕成纖維細胞體外表達CRT水平，輔以正常皮膚成纖維細胞作對照，探索CRT在瘢痕成纖維細胞發揮異常生物學活性功能中的功能。

1材料和方法

目的觀察鈣網蛋白(CRT)在瘢痕及正常皮膚成纖維細胞內的表達情況。方法采用免疫細胞化學染色和原位ELISA技術對體外培養的瘢痕及正常皮膚成纖維細胞進行CRT分布定位及表達水平研究。結果瘢痕和正常皮膚成纖維細胞在處于增殖生長狀態時，胞漿及核內均有不同程度的CRT表達，其中瘢痕成纖維細胞表達CRT水平(A:1.97±0.15,ELISA492nm)明顯高于正常皮膚成纖維細胞水平(A:1.43±0.12),差異有非常顯著意義(P＜0.01)；而在已融合的瘢痕和正常皮膚成纖維細胞內則均無CRT表達。結論瘢痕成纖維細胞內CRT的豐富表達對促進細胞遷移、信號傳遞及鈣存儲等方面均有著積極作用。

Studyontheexpressionofcalreticulininhypertrophicscar-derivedfibroblasts

【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheexpressionlevelandintracellulardistributionofcalreticulin(CRT)inhypertrophicscar-derivedfibroblasts(HSF)andnormalskin-derivedfibroblasts(NSF).MethodsUsinganti-CRTantibody,CRTwasdetectedinHSFandNSFbyimmunocytochemistryandELISAtechnique.ResultsCRTwaspresentinthecytoplasmandnucleiinproliferatingHSForNSFinculture,butHSFpossessedsignificantlyhigherexpressionlevelofCRTthanNSF(P＜0.01).Whenthesecells(HSFandNSF)werefused,neitherintracellularnorintranuclearstainingforCRTwasobserved.ConclusionInHSFandNSF,thedistributionofCRTiswidespread.BecauseofitsabundantexpressioninHSF,wepostulatethatCRTasamultifunctionalproteinplaysanimportantroleinCa2+sequestering,integrin-mediatedsignallingandcelladhesion.

【Keywords】HypertrophicscarFibroblastCalreticulinExpression

增生性瘢痕(Hypertrophicscar,HS)作為創傷及外科手術后常見且十分棘手的皮膚組織疾病，瘢痕組織內成纖維細胞異常活化和細胞外間質過度沉積既是HS的重要組織學特征，也是HS發生、發展的物質基礎。鈣網蛋白(Calreticulin,CRT)最早是作為一種存在于非肌細胞內質網上的主要鈣結合蛋白得以認識的［1］，近幾年的研究發現：除具有鈣離子儲藏作用外，CRT在參與并調節眾多細胞生物學活性功能上有著積極影響［2-5］，同時它還作為自身抗原在某些免疫性疾病的發病機制中有著極其重要的價值［6］。我們通過CRT抗體并利用原位ELISA及免疫細胞化學染色技術檢測瘢痕成纖維細胞體外表達CRT水平，輔以正常皮膚成纖維細胞作對照，探討CRT在瘢痕成纖維細胞發揮異常生物學活性功能中的作用。

1材料與方法

【論文關鍵詞】細胞凋亡；信號傳導

【論文摘要】凋亡是細胞的主動死亡過程，此過程涉及一系列基因的激活表達和調控。在細胞的正常發育過程中，約有半數細胞通過凋亡途徑被清除。由于細胞凋亡在胚胎發育、新舊細胞更替、免疫反應終止、腫瘤發生和自發抑制，以及許多免疫性、神經退行性疾病和衰老等方面均發揮重要作用，闡明細胞凋亡的發生及其調控機制將對相關疾病的治療展示光明的前景。本文就細胞凋亡信號傳導途徑研究及其最新進展作一綜述。

細胞凋亡主要通過受體介導的信號途徑誘導細胞凋亡因子或刺激因素通過第二信使系統傳遞信號，信號傳遞途徑決定了細胞的命運。本文嘗試從細胞凋亡信號傳導途徑角度來對其機制做一概述。

1死亡受體信號通路

死亡受體配體主要通過以半胱氨酸蛋白酶下幾個方面啟動信號傳導：受體齊聚、特殊銜接蛋白募集和caspase級聯活化。

以Fas/FasL為例：Fas是一種跨膜蛋白，屬腫瘤壞死因子受體超家族成員，它與FasL結合可以啟動凋亡信號的轉導引起細胞凋亡。其活化包括以下步驟：首先配體誘導受體三聚體化，然后在細胞膜上形成凋亡誘導復合物，這個復合物中包括帶有死亡結構域的Fas相關蛋白FADD[2]。Fas又稱CD95，是由325個氨基酸組成的受體分子，Fas一旦和配體FasL結合，可通過Fas分子啟動致死性信號轉導，最終引起細胞一系列特征性變化，使細胞死亡。Fas作為一種普遍表達的受體分子，可出現于多種細胞表面，但FasL的表達卻有其特點，通常只出現于活化的T細胞和NK細胞，因而已被活化的殺傷性免疫細胞往往能夠最有效地以凋亡途徑置靶細胞于死地。Fas分子胞內段帶有特殊的死亡結構域。三聚化的Fas和FasL結合后，使三個Fas分子的死亡結構域相聚成簇，吸引了胞漿中另一種帶有相同死亡結構域的蛋白FADD[3]。FADD是死亡信號轉錄中的一個連接蛋白，它由兩部分組成：C端（DD結構域）和N端（DED）部分。DD結構域負責和Fas分子胞內段上的DD結構域結合，該蛋白再以DED連接另一個帶有DED的后續成分，由此引起N段DED隨即與無活性的半胱氨酸蛋白酶8（caspase-8）酶原發生同嗜性交聯，聚合多個caspase-8的分子，caspase-8分子遂由單鏈酶原轉成有活性的雙鏈蛋白，進而引起隨后的級聯反應，活化caspase-8通過兩個平行級聯刺激細胞凋亡：直接切割和活化caspase-3；切割Bid（Bcl-2家族蛋白），截型Bid（tBid）移位至線粒體，誘導細胞色素C釋放，從而活化caspase-9和caspase-3，作為酶原而被激活，引起下面的級聯反應，細胞發生凋亡[4]。TNF誘導的細胞凋亡途徑與此類似[5]。TNF和DR-3L能夠傳導促凋亡和抗凋亡信號。TNFR和DR3通過接頭蛋白TRADD和活化caspase-8加速細胞凋亡。另一方面，活化NF-κB和誘導存活基因（IAP）的一種接頭蛋白復合物（包括RIP）可抑制細胞凋亡。通過Apo2L誘導細胞凋亡需要caspase活性，但是否需要接頭蛋白參與尚不清楚。

大家好！

在坐有很多對我們公司都不是很了解，那由我來介紹下我們公司，成立于年，其前身為美容化妝品經銷有限公司，也是地區最早的專業美容用品經銷之一。經過了十多年的風雨歷程，現已成為一個以專業美容產品為核心，以營銷教育為依托，一品牌加盟店為網絡。擁有3家分公司，商學院教育，業務遍及東北三省的終合性美容集團公司。

大家對我們公司有點了解之后呢，我給大家帶來了（ISOI）的產品，在這之前呢我給大家講個小故事。這個故事的名字叫“扁鵲的醫術”

魏文王問名醫扁鵲：你們家兄弟三人，都精通于醫術，到底哪一位最好呢？

扁鵲回答：長兄最好，中兄次之，我最差！

文王疑惑，又問：那為什么你最出名呢？

中風，亦稱腦血管意外。是嚴重危害患者生命與健康的中老年常見病。中風亦可分為出血性中風(腦出血、蛛網膜下腔出血)和缺血性中風(腦血栓形成、腦梗塞)。中風患者即使有幸存活，仍有約1／3的人會留下半身不遂、說話吐詞不清、癡呆等后遺癥。目前已知高血壓病、糖尿病、高脂血癥及肥胖癥是引起中風的高危因素。有學者指出，高血壓病是導致腦出血的禍根，冠心病、糖尿病患者動脈粥樣硬化斑塊破裂脫落是誘發腦梗塞的主要原因。

世界衛生組織(WHO)建議，通過增加復雜碳水化合物和天然糖類的攝入量，控制白糖、動物脂肪、食鹽及膽固醇的攝入量等飲食措施，可用來預防腦血管意外。具體而言，宜從以下諸方面做起：

多吃優質蛋白和高鉀、高鎂、高鈣食物

很多研究資料表明，飲食中蛋白質和鉀元素攝入不足，或蛋白質的質量欠佳，會使動脈血管脆性增加，容易引起腦內小動脈破裂出血。含甲硫氨酸、賴氨酸、脯氨酸、牛磺酸的魚類、禽類等優質蛋白質食物，除能維持正常血管彈性及改善腦血流外，還能促進鈉鹽的排泄，起到降血壓作用。高鉀食物的攝入也可促進鈉鹽的排泄，調節改善細胞內鈉與鉀的比值，對降低血壓、維護心臟功能及預防中風至關重要。高鉀食物有食用蕈類(香菇、蘑菇、平菇、銀耳等)、蓮子、豆類、紫菜、海帶、馬鈴薯、貝類、葵花子以及香蕉、橙子、柚子、甜瓜等。現代研究發現，天然食物中所含的鎂具有抗凝、降低血脂、擴張血管、保鉀等預防腦血管病的獨特效應。故平時應注意多吃一些富含鎂的食物，諸如甜菜、豌豆、苜蓿、蛤類、乳制品、堅果等。中老年人往往會因缺鈣而引起骨骼中的鈣質向軟組織和血液中“遷移”，致使過多的鈣沉積于動脈壁上，則易引起血-管彈性纖維變性、斷裂，誘發腦血管疾患。所以，酌情多食富鈣食物如奶類、豆類、魚類、蝦皮、芝麻、海帶等，對于預防中風也大有裨益。

多食富含維生素C、E的食物

新近研究發現，腦梗塞患者體內抗氧化維生素C、E水平明顯低下，這勸；是腦梗塞形成與發展的重要原因。因為低水平的維生素C、E狀態難以有效地清除細胞膜和基因的“殺手”--過氧化自由基，易使中樞神經系統細胞膜脂質發生氧化、變性損傷。為預防腦血管疾病的發生，日常生活中應多攝食富含維生素C、E的食物，如菜椒、青蒜、薺菜、芫荽、芹菜、韭菜、鮮棗、檸檬、獼猴桃、刺梨、柑桔、胡桃、橄欖油等。

目的觀察鈣網蛋白(CRT)在瘢痕及正常皮膚成纖維細胞內的表達情況。方法采用免疫細胞化學染色和原位ELISA技術對體外培養的瘢痕及正常皮膚成纖維細胞進行CRT分布定位及表達水平研究。結果瘢痕和正常皮膚成纖維細胞在處于增殖生長狀態時，胞漿及核內均有不同程度的CRT表達，其中瘢痕成纖維細胞表達CRT水平(A:1.97±0.15,ELISA492nm)明顯高于正常皮膚成纖維細胞水平(A:1.43±0.12),差異有非常顯著意義(P＜0.01)；而在已融合的瘢痕和正常皮膚成纖維細胞內則均無CRT表達。結論瘢痕成纖維細胞內CRT的豐富表達對促進細胞遷移、信號傳遞及鈣存儲等方面均有著積極作用。Studyontheexpressionofcalreticulininhypertrophicscar-derivedfibroblasts【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheexpressionlevelandintracellulardistributionofcalreticulin(CRT)inhypertrophicscar-derivedfibroblasts(HSF)andnormalskin-derivedfibroblasts(NSF).MethodsUsinganti-CRTantibody,CRTwasdetectedinHSFandNSFbyimmunocytochemistryandELISAtechnique.ResultsCRTwaspresentinthecytoplasmandnucleiinproliferatingHSForNSFinculture,butHSFpossessedsignificantlyhigherexpressionlevelofCRTthanNSF(P＜0.01).Whenthesecells(HSFandNSF)werefused,neitherintracellularnorintranuclearstainingforCRTwasobserved.ConclusionInHSFandNSF,thedistributionofCRTiswidespread.BecauseofitsabundantexpressioninHSF,wepostulatethatCRTasamultifunctionalproteinplaysanimportantroleinCa2sequestering,integrin-mediatedsignallingandcelladhesion.【Keywords】HypertrophicscarFibroblastCalreticulinExpression增生性瘢痕(Hypertrophicscar,HS)作為創傷及外科手術后常見且十分棘手的皮膚組織疾病，瘢痕組織內成纖維細胞異常活化和細胞外間質過度沉積既是HS的重要組織學特征，也是HS發生、發展的物質基礎。鈣網蛋白(Calreticulin,CRT)最早是作為一種存在于非肌細胞內質網上的主要鈣結合蛋白得以認識的［1］，近幾年的研究發現：除具有鈣離子儲藏作用外，CRT在參與并調節眾多細胞生物學活性功能上有著積極影響［2-5］，同時它還作為自身抗原在某些免疫性疾病的發病機制中有著極其重要的價值［6］。我們通過CRT抗體并利用原位ELISA及免疫細胞化學染色技術檢測瘢痕成纖維細胞體外表達CRT水平，輔以正常皮膚成纖維細胞作對照，探討CRT在瘢痕成纖維細胞發揮異常生物學活性功能中的作用。1材料與方法1.1組織標本增生性瘢痕及正常皮膚組織標本均取自住院病人，年齡17～40歲。患者在取標本前無長時間外用各種防治增生性瘢痕藥物史，不伴腫瘤及其他嚴重疾患；瘢痕組織生長時間均在6～9個月之間。1.2主要試劑及物品準備羊抗CRT抗體：Michalak博士惠贈。辣根過氧化物酶標記兔抗羊IgG(Zymed公司)。DAB及OPD(Sigma公司)。細胞培養基：DMEM添加10%小牛血清(上海華美生物技術有限公司)。96孔塑料培養板及100mm培養皿(丹麥Nunc公司)。1.3成纖維細胞培養手術切取增生性瘢痕及正常皮膚組織，去皮下脂肪，0.01%新潔爾滅浸洗10min，PBS洗3次，用組織剪將組織剪成細小碎塊并接種于培養皿內，加少量10%小牛血清的DMEM培養基，37℃5%CO2靜止培養，3天后補充少量培養劑，隔2天換液，見有細胞從組織塊爬出生長后每天換液，傳代。1.4CRT免疫細胞化學染色體外培養的成纖維細胞去培養基后，PBS輕洗，2%多聚甲醛固定10min，0.3%雙氧水反應5min，PBS再洗；二抗血清37℃20min，抗CRT抗體37℃作用45min，HRP-兔抗羊IgG37℃反應1h，DAB顯色；顯微鏡下觀察顯色信號。1.5CRT原位ELISA檢測［7］選擇第5代培養細胞為實驗對象，用0.25%胰蛋白酶消化后收集細胞，調整細胞濃度至106/ml，每孔100μl接種于96孔培養板內。培養16h后，去培養劑，PBS清洗；2%多聚甲醛固定10min，0.3%雙氧水反應5min，PBS洗；與0.1%TritonX-1004℃作用3min后，進一步分別與5%小牛血清(37℃、20min)、抗CRT抗體(37℃、1h)、5%小牛血清PBS稀釋的HRP-兔抗羊IgG(37℃、1h)反應；PBS清洗后加入OPD底物液100μl，作用30min后用50μl1mol/L硫酸中止反應。ELISAreader上讀取492nm的P值。2結果2.1成纖維細胞初代培養結果在體外相同培養條件下，細小的瘢痕及正常皮膚組織塊接種后2天見有部分貼壁，培養1周后有少量的成纖維細胞從組織塊邊緣爬出，2周后細胞在組織塊周圍呈暈狀分布，此后細胞開始向外旺盛擴散增殖。顯微鏡下觀察瘢痕及正常皮膚組織來源的成纖維細胞形態，發現細胞均呈細小梭形狀，二者未見明顯差異。2.2成纖維細胞CRT表達的免疫細胞化學染色結果原代培養的瘢痕及正常皮膚成纖維細胞在未生長融合前，細胞內均有不同程度的CRT陽性表達；一旦細胞生長融合后，在融合區內的成纖維細胞中均未見有明顯的CRT陽性信號出現，但在融合區邊緣仍處于增殖、遷移擴散的瘢痕及正常皮膚成纖維細胞內，則仍有CRT的陽性信號分布；就二種細胞內CRT的表達信號強弱來看，瘢痕成纖維細胞內的CRT陽性信號相對較強，而正常皮膚成纖維細胞內CRT陽性信號相對較弱；另外，當瘢痕及正常皮膚成纖維細胞以較高密度傳代培養時，細胞內CRT表達在接種后16h較為明顯，而在培養24h細胞接近融合時信號較弱。轉此外，CRT在瘢痕及正常皮膚成纖維細胞內的表達區域無明顯差異，往往在細胞漿、核膜及核內均有表達。2.3成纖維細胞CRT表達的ELISA檢測結果根據CRT免疫細胞化學染色結果，我們對第5代瘢痕及正常皮膚成纖維細胞(接種后培養16h)進行CRT表達的ELISA檢測，其中正常皮膚成纖維細胞組的CRT表達值為1.43±0.12(A)，瘢痕成纖維細胞組為1.97±0.15(A)，二組間差異有非常著性意義(P＜0.01)。3討論增生性瘢痕是傷口上皮化愈合后組織內成纖維細胞異常活化即繼續旺盛增殖并分泌大量膠原、纖維連接蛋白及蛋白多糖等細胞外間質所造成的一種組織病理改變，有關瘢痕成纖維細胞為何異常活化一直是整形燒傷外科領域里重點探索的課題之一。轉化生長因子β1、腫瘤壞死因子α、白細胞介素-1和類胰島素生長因子-1等在增生性瘢痕組織內的過度表達一直被認為是引起成纖維細胞異常活化不可忽視的因素，但越來越多實驗研究表明瘢痕成纖維細胞自身生物學特性改變是觸發其功能異常的關鍵［8］。我們通過對細胞內CRT的表達檢測，進一步發現CRT不但在瘢痕成纖維細胞內分布廣泛，而且其表達量明顯高于正常皮膚成纖維細胞內水平。CRT作為鈣離子主要結合蛋白，早期研究認為CRT主要是通過影響細胞內鈣離子的儲存與釋放而影響細胞的一些生物學活性效應，但近幾年的研究結果表明CRT除上述作用外，它在細胞遷移擴散及細胞內相關基因表達等方面均有直接的介導和調節作用。1997年，Zhu等人［9］通過對B16細胞CRT表達的深入研究發現實細胞內的CRT分子常常與整合素粘附分子的α鏈胞內區結合并成為雙向傳導細胞內外信號的復合體；Coppolino等人［5］利用CRT缺乏而整合素表達正常的胚胎干細胞進行細胞體外遷移粘附研究，證實在正常培養條件下干細胞的遷移擴散能力很弱，而經轉染CRT基因后，細胞的遷移粘附作用顯著增強。因此，Coppolino認為細胞內CRT與整合素粘附分子直接參與細胞的信號傳導、粘附、遷移擴散等生物學活性功能。Tsai等［10］曾利用體外結締組織收縮模型發現增生性瘢痕組織來源的成纖維細胞在體外有著比正常皮膚成纖維細胞更強的遷移擴[1][2]散能力，并認為其作用可能與細胞內肌動蛋白絲積聚有關。筆者在博士后研究工作階段卻發現在相同培養條件下增生性瘢痕組織來源的成纖維細胞除有著較強遷移擴散能力外，還具有高表達β1、α1、α2、α3及α4整合素粘附分子的特性［11］，從而提示瘢痕成纖維細胞的強遷移擴散能力與高表達整合素粘附分子有關；而從本實驗對CRT在瘢痕成纖維細胞內的表達情況來看，細胞內其CRT表達并不屬持續性表達，CRT的高表達期一般是在細胞的遷移擴散階段，而當細胞融合后細胞內CRT表達甚少。但就與同一時期培養的正常皮膚成纖維細胞相比，瘢痕成纖維細胞內的CRT表達則顯得更為豐富。因此，結合我們以往的研究工作結果，我們認為：瘢痕成纖維細胞異常的遷移擴散能力是細胞內豐富的CRT、整合素粘附分子表達及肌動蛋白絲積聚共同作用的結果，其中積聚的肌動蛋白絲是其異常遷移擴散的重要動力來源，而有效表達的CRT及整合素粘附分子則是細胞與細胞外間質之間遷移動力的傳遞媒介；另外，CRT的豐富表達對瘢痕成纖維細胞鈣離子的儲存、釋放及其信號傳導等也有著重要的意義。參考文獻1KrauseKH,MichalakM.Calreticulin.Cell,1997,88:439-443.2TectorM,ZhangQ,SalterRD.Beta2-microglobulinandcalnexincanindependentlypromotefoldinganddisulfidebondformationinclassIhistocompatiblityproteins.MolImmunol,1997,34:401-408.3LiuH,BowesRC,van-de-WaterB,etal.EndoplasmicreticulumchaperonesGRP78andcalreticulinpreventoxidativestress,Ca2disturbances,andcelldeathinrenalepithelialcells.JBiolChem,1997,272:21751-21759.4BurnsK,OpasM,MichalakM.Calreticulininhibitsglucocorticoid-butnotcAMP-sensitiveexpressionoftyrosineaminotransferasegeneincultruedMcA-RH7777hepatocytes.MolCellBiochem,1997,171:37-43.5CoppolinoMG,WoodsideMJ,DemaurexN,etal.Calreticulinisessentialforintegrin-mediatedcalciumsignallingandcelladhesion.Nature,1997,386:843-847.6EggletonP,ReidKB,KishoreU,etal.Clinicalrelevanceofcalreticulininsystemiclupuserythematosus.Lupus,1997,6:564-571.7WiniskA,FosterC.ICAM-1expressioninaspontaneouslytransformedhumankeratinocytecellline:Characterizationbyasimplecell-ELISAassay.JInvestDermal,1992,99:48-52.8TredgetEE,NedelecB,Scott-PG,etal.Hypertrophicscars,keloids,andcontractures.Thecellularandmolecularbasisfortherapy.SurgClinNorthAm,1997,77:701-30.9ZhuQ,ZelinkaP,WhiteT,etal.Calreticulin-integrinbidirectionalsignalingcomplex.BiochemBiophysResCommun,1997,232:354-358.10TsaiCY,HataK,ToriiS,etal.Contractionpotencyofhypertrophicscar-derivedfibroblastsinaconnectivetissuemodel:invitroanalysisofwoundcontraction.AnnPlastSurg,1995,35:638-646.11趙燁德，何清濂，紀徐淮，等.瘢痕成纖維細胞整合素表達實驗研究.第二軍醫大學學報，1998，19：330-332

【摘要】目的研制理想的能較快修復大段骨缺損的人工骨材料。方法將重組骨形態發生蛋白-2（rhBMP-2）/透明質酸鈉纖維蛋白復合凝膠（HAFG）緩釋體系和多孔雙相鈣磷陶瓷（BCP）結合研制成BCP/HAFG-rhBMP-2人工骨，并分別將BCP/HAFG-rhBMP-2和BCP/rhBMP-2及BCP/HAFG人工骨進行兔橈骨大段骨缺損修復的對比研究。術后分別行大體、放射學、組織形態學及生物力學測試。結果試驗中第12周與第2周相比較，3組堿性磷酸酶（AKP）值下降情況分別為BPC/HAFG-rhBMP-2組降低了65.13%，BPC/BMP-2組降低了71.03%，BPC/HAFG組降低了58.59%。組織學及掃描電鏡觀察顯示:12周時BPC/HAFG-rhBMP-2組材料已基本被成熟骨組織所代替，新骨結構與宿主骨無差別，而BPC/HAFG和BPC/rhBMP-2組骨小梁結構疏松細小，材料仍未完全被降解，材料與骨組織間形成較大間隙。術后12周時3組材料植入部位骨組織極限抗壓強度分別為:BCP/HAFG-rhBMP-2組（538±12.7）N、BCP/BMP-2組（368±24.0）N、BCP/HAFG組（256±8.4）N。BPC/HAFG-BMP-2復合型人工骨較BCP/BMP-2及BCP/HAFG人工骨具有更強、更持久的誘導成骨活性。結論BCP/HAFG-rhBMP-2人工骨能更快促進長骨大段骨缺損的修復，是一種較理想的人工骨材料。

【關鍵詞】骨和骨組織;骨移植;生物力學

為尋找理想的人工骨組織材料，本實驗將多孔雙相鈣磷陶瓷（BCP）同重組骨形態發生蛋白-2（rhBMP-2）/透明質酸鈉（HA）和纖維蛋白復合凝膠（HAFG）緩釋體系結合，制成BCP/HAFG-rhBMP-2人工骨材料，進行修復長骨大段骨缺損的實驗。

1材料與方法

1.1人工骨材料的制備

（1）BCP由東南大學材料科學與工程學院生物材料研究組研制提供。該BCP材料呈白色多孔狀結構，孔道彼此連通，孔徑約為300μm，孔隙率為80%。試驗中將BCP制成長10mm，直徑4mm圓柱體。

【論文關鍵詞】缺血再灌注；凋亡；丹參；中藥；綜述

【論文摘要】細胞過度凋亡參與了缺血再灌注損傷(Ischimiareperfusioninjury,IRI)的發生。我國傳統中藥丹參可在細胞、分子、基因水平調控IRI時細胞凋亡的發生，從而對IRI具有良好的防治作用。

在肝、腎、腦等器官缺血再灌注損傷(Ischimiareperfusioninjury,IRI)造成的細胞死亡形式中，凋亡也是一種常見而重要的形式[1-4]。組織細胞一旦壞死，目前人們尚無辦法干預；但細胞凋亡是受一系列程序控制的過程，人們有可能通過干預死亡程序加以挽救。丹參經現代實驗技術證實，對IRI時細胞過度凋亡有抑制作用，本文就此方面的內容予以綜述。

1丹參對IRI時細胞凋亡的抑制作用

Wu.W等[5]利用原位細胞凋亡標記(terminaldeoxynucleotidyltransferasemediateduridinenucleotideendlabeling,TUNEL)實驗觀察到：左大腦中動脈結扎后24h大鼠大腦皮層、尾狀核、豆狀核缺血區出現大量凋亡細胞，24~48h達到高峰；預先給予丹參則在相應部位只見到少量凋亡細胞；且與對照組比較，24h時間段組織損傷明顯減輕。提示丹參可能通過減少神經細胞凋亡對腦IRI發揮保護作用。丹參是否對其他器官也有類似作用目前尚未明了。

2丹參抑制IRI時細胞凋亡的作用機制

摘要:隨著全面推進素質教育和樹立健康第一思想,高校體育鍛煉已經成為大學生活中必不可少的一部分。大學生作為優秀的青年群體,其素質水平高低將直接影響到國家發展,膳食營養是高素質人才的基礎。然而現在大學生缺乏科學系統的營養知識,營養不良、營養過剩分化比較明顯,飲食隨意性較大。采用文獻資料法、問卷調查法、數理統計法等研究方法對江蘇師范大學學生飲食習慣、體育鍛煉投入情況等問題進行調查與研究。采取有效措施提高大學生自身營養意識。督促大學生自身養成良好飲食習慣,從而促進體育鍛煉效果提高。

關鍵詞:江蘇師范大學;學生;膳食營養;體育鍛煉

合理營養加體育鍛煉獲得健康同時,同樣也獲得健康身體素質。該文旨在了解江蘇師范大學學生膳食營養狀況,熟知大學生體育鍛煉內容和形式,分析合理飲食習慣及膳食制度在運動能力和健康狀況上的重要作用,對營養搭配和體育鍛煉中存在問題提出解決方案,為更好地加強大學生自身營養意識進一步提高體育鍛煉的效果提出合理化建議。

1研究對象與方法

1.1研究對象

文章以江蘇師范大學學生195名為研究對象,其中男生100名,占51.3%,女生95名,占48.7%。

選擇能早期診斷缺血性心肌損傷的生化標志物是檢驗醫學的一項重要工作，這是因為不少研究都指出溶栓治療的療效和進行治療時間的早晚密切相關。Rawles［1］曾估計每延遲治療1h有可能增加30d死亡率21‰。但另一方面溶栓治療有一定危險性，可引起腦出血等嚴重合并癥，只憑經驗或臨床征狀就冒然進行溶栓治療顯然也是不恰當的。美國心臟學會在其提出的"急性心肌梗死（AMI）患者治療導則"［2］中認為只有當急性心肌梗死患者心電圖出現ST段上升時，才考慮給以溶栓治療，這種提法似乎保守一些，有可能漏掉一些征狀不典型但卻應該進行溶栓治療的患者。所以如果檢驗工作者能夠找出一些更有效的心肌損傷早期生化標志物，無疑會給臨床以莫大的幫助。

在以往尋找心肌損傷生化標志物的工作中，往往集中在尋找由于心肌壞死后，釋放出來的心臟特異的酶或蛋白質。心肌胞質中的小分子蛋白比結構蛋白更容易進入血循環。現已證實肌紅蛋白（相對分子質量17000）以及CK-MB亞型,即MB1/MB2比值是目前公認的2個早期生化標志物。但是壞死病變不是患病后立刻出現的，在壞死出現前先經過一個可逆的缺氧階段。所以如果只注意檢查壞死損傷所釋放的物質，很難在發病后短時間內查出心肌損傷病變。

近年來對于急性缺血性心臟病的病理生理有了更多的了解，不僅認識到穩定性心絞痛的發生和動脈壁的粥樣斑塊形成有關，還認識到斑塊破裂是病變發展的基本因素。Fuster等［3］認為，冠狀動脈心臟病的發展有2個階段，第一階段是動脈粥樣斑塊的形成，此斑塊表面有一完整的纖維帽，上面覆蓋一層內皮細胞，此時患者往往無征狀或在勞動缺氧時出現心絞痛。第二階段則是由于斑塊破裂引起一系列病變：如內皮細胞功能下降；脂質進入血管壁；出現炎癥病變，單核細胞轉化為活化的巨噬細胞；低密度脂蛋白被氧化形成氧化低密度脂蛋白；產生生長因子，反過來損傷內皮細胞，釋放多種血栓形成因子，如：vW因子、V因子等。所有這些因素，再加上血小板活化，極可能形成冠狀動脈血栓。血栓的形成是多種作用如血液流體力學、血管壁各種因子成份、血小板活化、血凝和纖溶系統等相互影響、平衡的結果。

一旦血栓形成，冠狀動脈血流受限可能引起心肌缺血，出現不穩定心絞痛，病情進一步發展或者直接出現急性心肌梗死。一般認為Q波心梗往往與冠狀動脈完全阻塞有關，無Q波心肌梗死的冠狀動脈常出現血管不完全栓塞。

根據上述理論，Wu等［4］提出一些可能成為冠狀動脈心臟病早期病變的標志物。見表1。表1中大部分標志物都出現在目前公認的心肌壞死標志物之前。表中標志物有一部分可能成為冠心病的早期診斷指標。但缺點也是明顯的，因為它們大多數只表示存在炎癥或血栓等病理變化，并不意味一定存在心肌壞死。同時這些指標很難鑒別診斷不穩定心絞痛和急性心肌梗死。但無論如何這些指標變化對于冠心病的治療是很有價值的，臨床醫師可以針對患者的這些病變，采取及時的對癥治療，防止病變的進一步發展。下面對表1列舉的標志物作一介紹。

表1可能成為心肌損傷的早期標志物