抗病毒范文10篇

時間:2024-02-19 06:52:58

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抗病毒

抗病毒藥物耐藥研究論文

【關鍵詞】,抗病毒藥;,,耐藥性;,,耐藥機制

摘要:目前臨床應用的抗病毒藥物達40多種,為病毒引起的疾病的治療發揮了重大作用。與臨床其他抗感染藥物一樣,抗病毒藥物長期應用易產生耐藥性,降低療效,成為臨床治療及新藥開發的重要問題。本文就抗艾滋病毒藥物、抗乙型肝炎病毒藥物、抗流感病毒藥物及抗皰疹病毒藥物耐藥性及耐藥機制研究進行綜述。

關鍵詞:抗病毒藥;耐藥性;耐藥機制

Advancesinantiviraldrugresistanceandresistancemechanisms

ABSTRACTTherearemorethan40antivirusdrugsintheclinicaluse,whichhaveplayedveryimportantroleinthetreatmentofviraldiseases.Likeotherkindofantiinfectiondrugs,antivirusdrugscanalsoinduceresistanceinlongtimeusethatresultsthereducingoftherapeuticefficacyandbecomingaverytoughproblemintheclinicaltreatmentandthedevelopmentofnewdrugs.ThispaperbrieflyreviewedtherecentadvancesinresistanceandresistancemechanismsofantiHIVdrugs,antiHBVdrugs,antiinfluenzadrugsandantiHSVdrugs.

KEYWORDSAntivirusdrugs;Resistance;Resistancemechanisms

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抗病毒中藥研究論文

1抗病毒中藥的研究及臨床應用

1.1抗艾滋病病毒(HIV)中藥

艾滋病是由艾滋病病毒(HIV)引起的,在中醫學中被認為是“邪”“毒(熱)”所致。目前,國內外從中草藥中篩選出了大量抗HIV和抑制艾滋病逆轉錄酶(RT)活性的中藥,其中以清熱解毒中藥居多。有文獻報道[1]用感染的H9細胞系,篩選了27味清熱解毒中藥,發現其中12味有抑制HIV作用,如紫花地丁、夏枯草、穿心蓮、金銀花、螃蜞菊、牛蒡子、黃連、淫羊藿、紫草、狗脊、貫仲、苦參等。有研究在體外抗HIV實驗中篩選了500種中草藥,發現其中50種可抗HIV活性,如桑白皮、紫草、巴豆、檳榔、白頭翁、防風、蔓荊子等。關氏等[2]用猴艾滋病毒(SIV)在HUT-78細胞系中觀察40種中草藥的篩選實驗,結果發現紫花地丁、天花粉、甘草等有抑制HIV的作用。此外有報道,還有靈芝、槲寄生、姜黃、蘆薈等中藥的提取成分具有抑制HIV的活性,包括抑制逆轉錄酶,干擾病毒進入細胞等作用;諸多海洋藻類植物中也有不少具有抗HIV的活性物質,如藍藻門的鞘絲藻、纖細席藻、鈍頂螺旋藻及紅藻門、褐藻門的海帶等。研究表明[4],這些中藥的抗HIV活性成分主要是多糖類、生物堿類、黃酮類、萜類、蛋白質類,以及甾醇、酚類、木脂素等。

綜觀對抗HIV中藥的研究發現,目前對抗HIV有效中藥的篩選主要是在動物身上,但由于種屬間的差異,這些中藥與臨床實際應用還有一定差距。因此,必須作進一步的臨床觀察,才能確定其實際療效。作為抗HIV中藥的臨床研究,中外學者多采用中藥復方,較成功的主要有小柴胡湯、人參湯、克艾可、紅保方等,在對艾滋病患者的實際治療中均取得了較好的療效[4]。

1.2抗SARS病毒中藥非典是由SARS病毒或其他致病微生物引起的肺部炎癥,臨床多以發熱、咳嗽、氣促為主癥,屬中醫“溫病”范疇,又因其具有傳染、流行和致死特點,當屬于溫病中的“瘟疫”“疫癘”之類。國內對中藥防治“非典”的研究,主要集中在中藥處方和有效成分篩選兩個方面。目前,初步篩選出可在“非典”治療中發揮一定作用的中成藥有8個,它們是清開靈注射液(膽酸、珍珠母、豬去氧膽酸、梔子、水牛角、黃芩苷、金銀花等)、魚腥草注射液(魚腥草)、板藍根沖劑(板藍根)、新雪顆粒(磁石、石膏、滑石、寒水石、硝石、芒硝、梔子、竹葉卷心、升麻、穿心蓮、珍珠層粉、沉香、牛黃、冰片)、金蓮清熱顆粒(金蓮花、大青葉、生石膏、知母、玄參)、燈盞細辛注射液(燈盞細辛)、復方苦參注射液(苦參、狼毒、當歸、土茯苓等)和香丹注射液(丹參、降香),這些中成藥具有保護多臟器免受內毒素引起的損傷、改善炎性滲出以及針對高熱癥狀的退熱作用[5]。從上述8個中成藥的功能來看,基本上可以歸納為清熱解毒(包括祛濕)和活血化瘀兩大類。單氏等[6]對各大媒體公布的防治非典中藥處方進行了統計分析,結果顯示,在預防和治療非典的中藥處方中,位居前5位的中藥有4味,依次是甘草、金銀花、黃芪和連翹,使用頻次最高的中藥分別是甘草和金銀花。國內科技攻關項目“中藥抗非典型肺炎(SARS)病毒的研究”,通過中醫、西醫、分子生物等多學科手段,對多種中藥進行了科學分析,最后從中藥大黃中找到了對SARS病毒有阻斷作用的特效成分,這種成分能夠非常有效地抑制SARS病毒生活周期中所需的主要蛋白酶-3CL蛋白酶的活性,從而阻斷SARS病毒的轉錄和復制,最終達到治療的目的。

1.3抗流感病毒中藥流行性感冒是感染流感病毒所引發的一種急性呼吸道疾病,其最大特點是發病快、傳染性強、發病率高,癥狀一般來勢兇猛,病人常有高熱、寒戰、頭痛、全身關節痛等嚴重的全身癥狀,中醫將其歸屬于溫病學中的“風溫”,臨床常用中藥中的解表藥、清熱藥以及以它們為主組成的中成藥,通過抗病毒、解熱抗炎、鎮痛及增強機體免疫功能而達到抗流感的療效。從中醫學角度認識,中草藥及中成藥抗流感病毒的機理,在于“祛邪”和“扶正”;通過現代藥理實驗,中草藥及中成藥抗流感病毒的基本原理,主要是通過阻斷病毒繁殖過程的吸附、穿入、復制、成熟中的某一環節而直接抑制病毒,或通過提高機體的免疫功能,促進機體的特異性和非特異性免疫功能而間接抑制病毒[7]。

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抗病毒中藥研究論文

1抗病毒中藥的研究及臨床應用

1.1抗艾滋病病毒(HIV)中藥

艾滋病是由艾滋病病毒(HIV)引起的,在中醫學中被認為是“邪”“毒(熱)”所致。目前,國內外從中草藥中篩選出了大量抗HIV和抑制艾滋病逆轉錄酶(RT)活性的中藥,其中以清熱解毒中藥居多。有文獻報道[1]用感染的H9細胞系,篩選了27味清熱解毒中藥,發現其中12味有抑制HIV作用,如紫花地丁、夏枯草、穿心蓮、金銀花、螃蜞菊、牛蒡子、黃連、淫羊藿、紫草、狗脊、貫仲、苦參等。有研究在體外抗HIV實驗中篩選了500種中草藥,發現其中50種可抗HIV活性,如桑白皮、紫草、巴豆、檳榔、白頭翁、防風、蔓荊子等。關氏等[2]用猴艾滋病毒(SIV)在HUT-78細胞系中觀察40種中草藥的篩選實驗,結果發現紫花地丁、天花粉、甘草等有抑制HIV的作用。此外有報道,還有靈芝、槲寄生、姜黃、蘆薈等中藥的提取成分具有抑制HIV的活性,包括抑制逆轉錄酶,干擾病毒進入細胞等作用;諸多海洋藻類植物中也有不少具有抗HIV的活性物質,如藍藻門的鞘絲藻、纖細席藻、鈍頂螺旋藻及紅藻門、褐藻門的海帶等。研究表明[4],這些中藥的抗HIV活性成分主要是多糖類、生物堿類、黃酮類、萜類、蛋白質類,以及甾醇、酚類、木脂素等。

綜觀對抗HIV中藥的研究發現,目前對抗HIV有效中藥的篩選主要是在動物身上,但由于種屬間的差異,這些中藥與臨床實際應用還有一定差距。因此,必須作進一步的臨床觀察,才能確定其實際療效。作為抗HIV中藥的臨床研究,中外學者多采用中藥復方,較成功的主要有小柴胡湯、人參湯、克艾可、紅保方等,在對艾滋病患者的實際治療中均取得了較好的療效[4]。

1.2抗SARS病毒中藥非典是由SARS病毒或其他致病微生物引起的肺部炎癥,臨床多以發熱、咳嗽、氣促為主癥,屬中醫“溫病”范疇,又因其具有傳染、流行和致死特點,當屬于溫病中的“瘟疫”“疫癘”之類。國內對中藥防治“非典”的研究,主要集中在中藥處方和有效成分篩選兩個方面。目前,初步篩選出可在“非典”治療中發揮一定作用的中成藥有8個,它們是清開靈注射液(膽酸、珍珠母、豬去氧膽酸、梔子、水牛角、黃芩苷、金銀花等)、魚腥草注射液(魚腥草)、板藍根沖劑(板藍根)、新雪顆粒(磁石、石膏、滑石、寒水石、硝石、芒硝、梔子、竹葉卷心、升麻、穿心蓮、珍珠層粉、沉香、牛黃、冰片)、金蓮清熱顆粒(金蓮花、大青葉、生石膏、知母、玄參)、燈盞細辛注射液(燈盞細辛)、復方苦參注射液(苦參、狼毒、當歸、土茯苓等)和香丹注射液(丹參、降香),這些中成藥具有保護多臟器免受內毒素引起的損傷、改善炎性滲出以及針對高熱癥狀的退熱作用[5]。從上述8個中成藥的功能來看,基本上可以歸納為清熱解毒(包括祛濕)和活血化瘀兩大類。單氏等[6]對各大媒體公布的防治非典中藥處方進行了統計分析,結果顯示,在預防和治療非典的中藥處方中,位居前5位的中藥有4味,依次是甘草、金銀花、黃芪和連翹,使用頻次最高的中藥分別是甘草和金銀花。國內科技攻關項目“中藥抗非典型肺炎(SARS)病毒的研究”,通過中醫、西醫、分子生物等多學科手段,對多種中藥進行了科學分析,最后從中藥大黃中找到了對SARS病毒有阻斷作用的特效成分,這種成分能夠非常有效地抑制SARS病毒生活周期中所需的主要蛋白酶-3CL蛋白酶的活性,從而阻斷SARS病毒的轉錄和復制,最終達到治療的目的。

1.3抗流感病毒中藥流行性感冒是感染流感病毒所引發的一種急性呼吸道疾病,其最大特點是發病快、傳染性強、發病率高,癥狀一般來勢兇猛,病人常有高熱、寒戰、頭痛、全身關節痛等嚴重的全身癥狀,中醫將其歸屬于溫病學中的“風溫”,臨床常用中藥中的解表藥、清熱藥以及以它們為主組成的中成藥,通過抗病毒、解熱抗炎、鎮痛及增強機體免疫功能而達到抗流感的療效。從中醫學角度認識,中草藥及中成藥抗流感病毒的機理,在于“祛邪”和“扶正”;通過現代藥理實驗,中草藥及中成藥抗流感病毒的基本原理,主要是通過阻斷病毒繁殖過程的吸附、穿入、復制、成熟中的某一環節而直接抑制病毒,或通過提高機體的免疫功能,促進機體的特異性和非特異性免疫功能而間接抑制病毒[7]。

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干擾素抗病毒作用研究論文

[摘要]本文棕述了干擾素的分類、信號傳導及其影響因素、受干擾素刺激的基因產物的抗病毒作用,以及干擾素在臨床用于抗病毒治療的效能,并提出了一個早期治療SARS感染的建議方案。[關鍵詞]干擾素;抗病毒;SARSAntiviralInterferonsandTheirTherapeuticPotentialsforSARSYANGLiping1,CAOSuyan2,SHAOHong31.DepartmentofClinicalPharmacology,BeijingHospital,Beijing100730;2.DepartmentofEmergency,BeijingHospital,Beijing100730;3.DepartmentofPharmacyAdministrationandClinicalPharmacy,SchoolofPharmaceuticalSciences,BeijingUniversity,Beijing100083[Abstract]Thispaperisabird’s-eyeofclassification,signalingpathways,IFN-stimulatedantivirusgenesofinterferons,asummaryofeffectsofviral-inducedfactorsoninterferonsignalingpathways,andsomeclinicalpractices.Inconclusion,atherapeuticprotocolforinhibitingSARSviralinfectionisrecommended.[KeyWords]Interferon(IFN);Antiviral;SARS病毒是專性細胞內寄生的微生物,大多數細胞都固有抗病毒的能力。機體在受到病毒感染時,免疫細胞和非免疫細胞(如感染的組織細胞)會產生多種細胞因子,如白介素-1、白介素-8、白介素-6、白介素-12、腫瘤壞死因子-a、干擾素-a和干擾素-b.這些細胞因子在機體發揮著非特異性的效應,包括致炎、致熱、引發急性期反應、趨化炎癥細胞、激活免疫細胞、抑制病毒復制、胞毒作用等,這些都屬于天然免疫反應的范疇。機體的天然免疫機制主要限制病毒早期的感染和傳播。在病毒感染的早期階段常常是宿主防御能力與病毒感染能力的競爭過程。一旦宿主防御系統被突破,早期天然(非特異)免疫的防御因素,如干擾素,自然殺傷(Naturalkiller,NK)細胞和巨噬細胞,首先被激活。隨著感染的進行,獲得(特異)性免疫應答被啟動,細胞毒T細胞,輔助T細胞和抗病毒抗體隨之出現。抗病毒抗體的出現給病毒在細胞和組織間傳播建起了一道屏障,特別是限制病毒在血液中的傳播。但特異性免疫應答相對于非特異的應答要晚得多。感染初期主要是天然免疫起到防護作用,病毒直接激活被感染細胞轉錄的是I型干擾素基因而刺激機體的抗病毒反應,而II型干擾素主要在獲得性免疫應答(而非天然免疫應答)中起重要作用。因此,I型干擾素是宿主細胞和臨近細胞抵御病毒感染的第一防線。2003年初,在世界范圍內爆發的嚴重急性呼吸綜合征(severeacuterespiratorysyndrome,SARS)威脅了成百上千的無辜生命。Peiris等在Lancet(2003,361:9365)上提供的證據強有力地表明,SARS與一種新的從未在人類或動物中發現過的冠狀病毒有關,現稱為SARS病毒。這種狀病毒通過近距離飛沫傳染并迅速發展為嚴重的非典型肺炎。為了控制這種致命性病毒感染,首先應搞清SARS病毒的致病機制,這需要研究SARS病毒是如何逃逸免疫防御系統而得以在機體中迅速擴散;弄清病毒是否編碼相關因子來抑制免疫應答,如抑制細胞對IFN應答反應等。如果存在這類因子,則有可能成為藥物作用的靶點;而且去除這些因子基因的病毒還可用于疫苗的研究。干擾素的分類和信號傳遞1干擾素的分類IFN是人類和動物細胞在對各種病毒刺激的應答中產生的具有多種功能的一類蛋白或糖蛋白,是細胞因子家族中成員。它可激活別的基因亞群進行轉錄。根據其抗原性和分子結構,可將IFN分為5個不同種類:IFNα,IFNβ,IFNγ,IFNτ和IFNω。IFNα,IFNβ和IFNγ在體內分別由白細胞或淋巴母細胞、纖維母細胞和受免疫刺激的T淋巴細胞產生,IFNβ在DNA水平上與IFNα有30%的同源性,而IFNγ與IFNα和IFNβ無明顯的同源性。它們是常作為藥用的幾個亞型,在體外可通過重組DNA技術進行生產[1]。其中,IFNα是了解最多也是用得最廣的抗病毒藥物,約有23個變種,較詳細研究的有約13種亞型。IFNτ,即所謂的TP-1,是由反芻動物營養細胞分泌的,不同的宿主有不同的多肽序列。IFNω,由病毒感染的白細胞分泌的一種單糖蛋白,是人類白細胞IFN的主要成分,也可通過體外重組DNA技術進行生產。IFNω與IFNα高度同源,與IFNβ有較疏遠的關系,而與IFNγ無關。IFNα,IFNβ,IFNγ,IFNω和IFNτ分別由156-166,166,143,172和172個氨基酸組成,其中α,β,γ各自的亞型在結構上又有不同(見表1),作用基本一樣,這可能是由于不同廠家為了競爭而研究開發的結果。表1IFN亞型的結構差異名稱

蛋白的氨基酸變化

IFNα

第23氨基酸第34氨基酸IFNα-2a賴氨酸組氨酸IFNα-2b精氨酸組氨酸IFNα-2c精氨酸精氨酸

IFNβ

第1氨基酸第17氨基酸第80氨基酸IFNβ-1a甲硫氨酸半胱氨酸糖基化IFNβ-1b絲氨酸非糖基化

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艾滋病抗病毒治療與實驗室檢測進展

實驗室檢測是艾滋病臨床診斷、病程進展監測、抗病毒治療啟動、治療效果監測、耐藥性檢測及調整治療方案等診療工作不可或缺的技術支撐。為滿足不斷增加的艾滋病診斷和治療相關的防治需求,全國艾滋病實驗室網絡不斷發展壯大。特別是實施“四免一關懷”政策以來,實驗室網絡建設快速持續發展,檢測技術和檢測策略也適時進行完善、更新,為艾滋病診斷和治療提供了有力的技術支持和質量保證,助力我國艾滋病防治工作取得顯著成效。

1艾滋病檢測實驗室網絡建設與發展

2006年發布的《全國艾滋病檢測工作管理辦法》中,將艾滋病檢測實驗室分為三類,分別為參比實驗室、確證實驗室和篩查實驗室[1],規定了各類實驗室的具體管理辦法,為全國艾滋病實驗室網絡規范化管理奠定了基礎。在《中國遏制與防治艾滋病行動計劃》(2006-2010年)中提出實驗室建設發展應建成覆蓋縣級以上的國家艾滋病監測體系和篩查實驗室網絡[2],健全市級以上確證實驗室網絡。之后的“十二五”和“十三五”《中國遏制與防治艾滋病行動計劃》進一步為實驗室網絡建設與發展提供了強大的發展動力[3-4]。截至2021年底,我國已有篩查實驗室13261個和檢測點35912個,覆蓋了96.9%的縣級行政區域。確證實驗室739個,覆蓋了91.7%的地級行政區域。遍布全國的篩查和確證實驗室,為各地進行艾滋病診斷提供了技術保證。同時,隨著抗病毒治療需求增加,CD4細胞、病毒載量、基因型耐藥檢測技術平臺也得到了快速發展。截至2021年底,全國各級疾病預防控制系統和醫療機構等共有1195個實驗室具備了CD4細胞檢測能力,446個實驗室具備了病毒載量檢測能力,61個實驗室具備了基因型耐藥檢測能力,為國家免費抗病毒治療工作的大規模開展提供了檢測技術保障,使我國超過百萬HIV感染者的治療效果得到科學評估。實施“四免一關懷”政策以來,2004年在自愿咨詢檢測門診實施免費抗體篩查檢測,2006年起在疾病預防控制機構實施免費CD4細胞檢測和病毒載量檢測,2008年起在疾病預防控制機構實施免費抗體確證檢測[5],這些免費政策有力促進了全國艾滋病篩查、確證和治療相關的檢測工作。

2艾滋病檢測質量保證體系的建立和發展

為加強艾滋病檢測工作的規范化管理,不斷完善檢測質量,為臨床診斷和治療監測提供準確的檢測結果,有效服務于臨床診斷和治療相關的檢測需求,國務院出臺了一系列政策文件對艾滋病檢測實驗室網絡的建設提出具體要求和發展目標[2-4]。艾滋病檢測質量保證體系也在同步建立和完善,目前已建立了國家級質量保證體系和省級質量保證體系[5]。

2.1國家級質量保證體系

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HIV感染者心理健康與抗病毒治療的關系

摘要:目的探索心理健康因素與HIV感染者ART在治情況的關系,為后期制定提高ART比例的策略提供科學依據。方法采用方便抽樣的方法抽取調查對象,采用問卷調查法對調查對象的社會支持系統、艾滋病壓力、焦慮和抑郁情緒以及應對方式進行心理健康測試,并探索其與感染者ART在治情況的關系,采用SPSS17.0進行描述性統計、單因素分析、多因素分析。結果共調查600名感染者,其中有410名感染者正在接受ART,占68.33%。多因素分析結果顯示,艾滋病壓力(OR=0.612,95%CI:0.516~0.726,P<0.01)、抑郁(OR=0.969,95%CI:0.949~0.989,P<0.01)和消極應對得分(OR=0.923,95%CI:0.866~0.983,P=0.01)與ART在治情況呈負相關關系,已婚/同居者比未婚/離異/喪偶者更易接受ART(OR=2.180,95%CI:1.492~3.183,P<0.01)。結論心理健康水平相對較低的HIV感染者更不易接受ART。建議日常隨訪咨詢中,為HIV感染者提供心理支持,重點關注未婚/離異/喪偶者,提高其心理健康水平,從而促進其接受抗病毒治療。

關鍵詞:艾滋病病毒感染者;心理健康;抗病毒治療

ART是目前已被證實的針對HIV感染最有效的治療手段[1]。它能促進機體重建免疫功能,減少艾滋病相關并發癥與死亡,同時能抑制感染者體內艾滋病病毒復制,有效降低病毒載量,從而起到預防傳播的作用[2-3]。目前艾滋病防治的核心策略之一是“早發現,早治療”,如何促進更多感染者接受治療對艾滋病防控工作具有重要意義。本文探討心理因素與HIV感染者接受ART的關系,為后期制定提高ART覆蓋率的策略提供科學依據。

1對象與方法

1.1對象選取2019年12月至2020年2月間云南省德宏州4縣市(芒市、瑞麗、隴川、盈江)接受隨訪且愿意接受問卷調查的18~70周歲的HIV感染者,總數達到樣本量為止。本研究經云南省生物醫學倫理審查委員會批準。1.2方法云南省主要由疾病預防控制中心承擔未治療HIV感染者的隨訪。根據預實驗結果,到疾病預防控制中心接受隨訪的HIV感染者治療率為55.6%,P=0.556,要使相對誤差不超過10%,且保持可信水平95%,根據單純隨機抽樣樣本量計算公式。計算得出,至少調查307人,由于采取非概率抽樣,在此基礎上增加0.5倍樣本,且估計失訪率為20%,確定樣本量為600。由經過統一培訓的調查員在獨立房間內對研究對象進行一對一面對面的問卷調查。調查內容包括一般人口學特征、心理健康測試、ART在治情況及未在治原因。心理健康測試主要采用社會支持評定量表[4](SocialSupportRatingScale,SSRS)、艾滋病壓力量表[5](HIV/AIDSStressScale)、抑郁自評量表[6](Self-ratingDepressionScale,SDS)、焦慮自評量表[7](Self-ratingAnxietyScale,SAS)和特質應對方式[8]分別對調查對象的社會支持水平、HIV感染壓力、抑郁、焦慮情緒和應對方式進行測試。調查開始前對調查人員進行統一培訓。調查完成當日,由調查小組負責人對問卷進行統一邏輯審核,最后對問卷進行雙錄入以保證數據質量。1.3統計分析使用SPSS17.0進行統計分析,計量資料采用(x±s)描述,計數資料采用頻數和構成比表示,將單因素分析中P<0.20的自變量納入回歸模型進行多因素分析,回歸模型變量的引入水平為0.05,剔除水平為0.1。以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

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妊娠晚期抗病毒免疫阻斷治療新生兒血清研究論文

【關鍵詞】宮內感染InfluenceonserumhepatitisBvirustranscriptsinnewbornsbyHBIGimmunoblockingtherapyduringthelaterstageofpregnancy【Abstract】AIM:ToinvestigatethesignificanceofviraltranscriptsinearlystagediagnosisofHBVverticaltransmission,andtoobservetheinfluenceofHBIGimmunoblockingtherapyonserumHBVRNAinnewbornsfromHBVcarriermothers.METHODS:FortysixHBsAgpositivepregnantwomenweretreatedwithantiHBVimmunotherapy(HBIG200IU/4weeksandLimidazolewasappliedasliniment10mg/week)since26weekpregnancy.Theother23weretakenascontrolswithoutanyantiHBVtherapy.Viralnucleicacidswereextractedfromseraofmothersbeforetherapyandfromseraofnewborns.HBVDNAandRNAs,includingthefulllengthandtruncatedRNAmolecules,wereamplifiedrespectivelythroughPCRandRTPCRtargetedtotheHBVXproteinencodingregion.RESULTS:SerumHBVDNAinnewbornswasonlyfoundwhentheirmothershadnotbeentreated.CirculatingviralRNAwasdetectedinmorethanhalfofthenewbornsirrespectiveoftreatmentofmothers.However,inthenewbornsoftreatedmothers,serumRNAwasuniformlyofthetruncatedtype.CONCLUSION:ApplicationofserumHBVRNAisgreatlyhelpfultothediagnosisofearlystageinfectionofnewbornsfromHBVcarriermothers.TruncatedRNAistranscribedfromHBVtemplatesinthenewbornsratherthanbeingtransmittedfrommothertochild,immunoblockingtherapydoesnotinterferewithintrauterineinfection.However,itmayinterferewiththemanifestionofahighreplicativeinfection.【Keywords】hepatitisBvirus;transcript;verticaltransmission;intrauterineinfection;immunotherapy【摘要】目的:探討乙型肝炎病毒(HBV)轉錄體在早期診斷HBV母嬰傳播中的意義,并觀察母親抗乙型肝炎病毒免疫球蛋白(HBIG)免疫阻斷治療對新生兒血清HBV轉錄體的影響.方法:治療組46例HBV表面抗原(HBsAg)陽性孕婦自孕26wk開始行抗HBV免疫治療(HBIGim,200IU/4wk;同時使用左旋咪唑涂布劑10mg/wk);另23例HBsAg)陽性孕婦做為對照組未給予任何抗病毒治療.從孕婦治療前血清及其新生兒血清中提取核酸,經PCR及RTPCR擴增HBVDNA,全長型RNA(fRNA)和頓挫型RNA(trRNA),瓊脂糖凝膠電泳顯示產物,Southern雜交進一步驗證擴增產物.結果:HBVDNA陽性僅存在于未接受免疫治療的母親所生新生兒中;超過半數的新生兒血清中可檢測到病毒轉錄體RNA,并與其母親是否接受免疫阻斷治療無關.但是,治療組母親所生新生兒中僅可檢測到頓挫型病毒轉錄體trRNA.結論:血清HBV轉錄體可早期診斷新生兒HBV感染的狀態;新生兒血清中trRNA的轉錄模板可能為新生兒體內的病毒DNA;HBIG免疫阻斷治療不能阻斷HBV宮內感染,但可以阻止高復制性感染的發生.【關鍵詞】乙型肝炎病毒;轉錄體;母嬰傳播;宮內感染;免疫療法0引言母嬰傳播是形成慢性HBV感染的重要原因.據估計我國的慢性HBV感染約有30%~50%是通過母嬰傳播發生的.對于未接受治療的母親來講單獨HBsAg陽性母親的嬰兒,約40%在半歲內出現HBsAg陽性的所謂“突破性感染”[1-3].而HBsAg和HBeAg雙陽性母親的嬰兒HBsAg陽性率高達90%以上[4].這些嬰兒多數轉變為慢性HBV感染形成新的傳染源,并成為發生肝細胞癌(HCC)的高危人群.由于大部分受感染的新生兒延遲出現診斷性的指標HBsAg和HBVDNA,再加上部分病毒抗原和抗體可以通過胎盤屏障進入胎兒體內,使得新生兒感染的早期診斷顯得極為復雜和困難[1,5].有研究表明,新生兒延遲出現的“突破性感染”發生在已有的隱匿型感染的基礎上[1,6-7].我們的研究表明,結合病毒轉錄體的檢測可以更精確地診斷和區分復制期和非復制期(既隱匿型感染)等不同的感染階段[8-11].并且,我們前期的研究也顯示,在慢性HBV感染母親所生的新生兒中,HBV轉錄體是一個較早出現的病毒標志物[12].本研究擬應用我們建立的血清HBVRNA檢測方法,進一步分析血清病毒轉錄體在早期診斷新生兒感染狀態中的意義,以及免疫治療對它的影響.1材料和方法1.1材料1.1.1病例選擇69例HBsAg陽性孕婦分為治療組46例及未治療組23例.69例孕婦孕期均無先兆流產史無急性或慢性肝炎病史癥狀及體征無肝功能受損情況.孕婦年齡孕產次胎齡均無明顯差異.69例孕婦分娩新生兒69(男36,女33)例.1.1.2試劑高純度核酸提取試劑盒、核糖體RNA(rRNA)、單管RT/PCR試劑盒、地高辛探針標記及原位雜交試劑盒均購自Roche公司(Mannheim,德國),原位雜交試劑盒、DNase和RNase滅活的吸頭購自Biolabs,HybondN尼龍膜購自Amersham,TaqDNA聚合酶、100bpDNAMarker及DNaseI均為Gibcol產品,DNase和RNase滅活的試管和離心管購自Eppendof公司.其他常用試劑和藥品均為分析純或電泳級.1.1.3引物和質粒PCR引物由上海生工合成.用于陽性對照的質粒為40A和41A[13],均由德國癌癥研究中心病毒與宿主相互關系分部制備.1.2方法1.2.169例HBsAg陽性孕婦治療方法孕26wk開始,按來診次序分為治療組46例,孕26wk始孕婦臀大肌注射已型肝炎病毒免疫球蛋白(HBIG)(上海生物制品研究所生產批號為20000712)200IU/4wk,同時使用左旋咪唑涂布劑(福建省凱華藥業有限公司生產批號為20000307500mg/支)5mL涂布于上下肢體內側皮膚易吸收處2次/wk,3mo一療程.未治療組23例根據患者或其親屬的意見未給予上述任何主動或被動免疫防治措施,孕婦所生的新生兒的乙肝疫苗接種均按第0,1,6月進行.1.2.2血清分離和核酸提取孕婦26wk肘靜脈采血2mL,新生兒分娩后24h內采股靜脈血2mL.按照我們建立的方法[10],于30min內應用低溫離心(4000r/min,20min,4℃)分離血清.核酸的提取采用高純度病毒核酸提取試劑盒,按照說明書操作,僅將其中的poly(A)RNA替換為rRNA作為載體RNA,以免與后面使用的oligod(T)引物結合而干擾HBV3′端的結構分析.200μL血清標本提取后可得到50μL的核酸提取物.1.2.3目的核酸擴增按我們建立的方法[10],針對HBV基因X區血清核酸的PCR,RTPCR所用上游引物包括txs(1445):5′GGACCGTGTGCACTTCGCTT3′,txs1(1454):5′GCACTTCGCTTCACCTCTGC3′,txs2(1464):5′TCACCTCTGCACGTCGCATG3′;下游引物包括:txas(1574):5′CCTCAAGGTCGGTCGTTGAC3′,xas1(1668):5′AATTTATGCCTACAGCCTCC3′,txas5(1683a):5′(T)15GCTGG3′.擴增病毒DNA采用50μL反應體系,TagDNA聚合酶5U,引物為txs/txas,循環條件:93℃100s,90℃40s,58℃50s,70℃40s,35個循環,72℃15min.trRNA的RTPCR系統在逆轉錄后采用半巢式PCR,引物txas5分別與txs和txs2配對.trRNA擴增用的錨定oligod(T)引物與fRNA的末端1803~1806位置的結構也有一定的親和力,故也同時檢測fRNA[10].20g/L瓊脂糖凝膠電泳后觀察結果.1.2.4地高辛標記探針的制備和原位雜交按我們建立的方法采用PCR法合成2種地高辛標記探針,用于區分fRNA和trR[1][2][3]NA[10].在這些PCR反應中,Dig11dUTP部分取代了dTTP作為Taq多聚酶的底物.各種核苷的使用濃度為:200μmol/LdATP,dGTP,dCTP;180μmol/LdTTP和20μmol/LDIG11dUTP.地高辛標記探針的合成嚴格按照產品說明書進行(Roche,Cat.No.1093088).作為分析血清RNA的PCR擴增產物,DIG11dU/dT的最佳比例為1∶10.地高辛標記探針的顯影,采用一種堿性磷酸酶鏈接的抗地高辛抗體,當堿性磷酸酶與底物BCIP結合后,其產物可進一步與NBT反應,在膜上產生持久的藍色或棕色的沉淀.2結果2.1母親和新生兒血清中HBVDNA,fRNA(全長型)trRNA(頓挫型)的檢測圖1所示為4對治療組母親新生兒血清中相應的PCR和RTPCR擴增結果[10].第1和第2對的母親DNA,fRNA,trRNA和HBeAg陽性,第3對的母親僅DNA和trRNA陽性,第4對的母親僅trRNA陽性.而所有4名新生兒僅顯示trRNA陽性.2.2治療組與非治療組母親和新生兒血清病毒RNA和DNA檢測結果表1總結了治療組與非治療組母親和新生兒血清中HBVDNA,fRNA和trRNA檢測結果.HBVDNA和fRNA等病毒復制的指標僅存在于非治療組新生兒,而trRNA在治療組與非治療組新生兒中普遍存在.未治療組新生兒HBVDNA和fRNA陽性率明顯高于治療組新生兒(P<0.01),而兩組新生兒血清trRNA陽性率無顯著性差異(P>0.05).圖中所示119bpPCR擴增產物為HBVXDNA,360bp和235bp分別為fRNA和trRNA擴增產物.m1n1到m4n4表示4對母親/新生兒.cDNAf和cDNAtr:包含fcDNA和trcDNA的陽性對照質粒;符號“-”表示陰性對照;M:100bpDNA標志物.圖14對母親/新生兒血清中HBV核酸檢測的代表性結果(略)表1HBsAg陽性母親及其新生兒血清中HBV核酸的檢測結果(略)2.3HBIG免疫阻斷治療對trRNA和fRNA的影響表2對比了僅僅trRNA陽性和fRNA與trRNA共同陽性新生兒的例數.未治療23位母親所生23名新生兒中,12名表現為僅trRNA陽性,而治療組46位母親所生新生兒全部表現為僅trRNA陽性(表2).結果提示,單獨trRNA陽性新生兒的出現與免疫治療無關,免疫治療導致新生兒fRNA消失,相應地trRNA單獨陽性的例數增加.在HBsAg和HBeAg共同陽性母親所生的新生兒中,免疫治療導致新生兒單獨trRNA陽性例數相對增加的作用表現得更加明顯(表2).未治療母親所生新生兒中,fRNA和trRNA共同陽性者占7/11,而在治療組中則為0/14.3討論本研究立足于應用血清HBVRNA和DNA區分新生兒的不同感染類型.既往研究表明,fRNA是一個病毒復制的標志物,而trRNA單獨陽性提示無復制階段的病毒基因表達[8,9,14].先前基于肝組織和血清的研究提示,trRNA的來源與染色體整合的和游離的病毒DNA均有一定關系[14-15].而新生兒的感染處于病毒感染的早期階段,此時染色體整合的病毒DNA不占主導地位.因此更支持游離的病毒DNA為trRNA的轉錄模板.表2頓挫型RNA在全長型RNA陰性(tr)和陽性(ftr)母親/新生兒血清中的表達(略)不難理解,新生兒的HBV感染是由于暴露于受感染母親體內的病毒所導致的宮內感染.但是,這種感染不一定伴隨高復制階段.這可能是由于前基因組RNA缺乏反轉錄起始位點,原因可能為轉錄和轉錄體成熟的相關因素與肝臟的發育程度有關[16].接受免疫阻斷治療的母親所生新生兒普遍缺乏fRNA和病毒DNA(以及HBeAg),但trRNA陽性較為普遍.這一方面反映了免疫阻斷治療可以有效預防新生兒的高復制性的感染.另一方面,治療組與非治療組新生兒trRNA陽性率無明顯差異,提示病毒感染本身并沒有被有效預防.如果新生兒血清trRNA是宮內感染的產物,我們推測病毒感染和表達的模式可能有兩種:一種導致病毒的高復制,而另一種則檢測不到病毒的復制.前者對免疫治療敏感,而后者不敏感.但是,后者有可能會轉變為高復制狀態,這有助于解釋部分新生兒在出生后1歲以內甚至更晚出現的“突破性感染”[1,3,17].雖然本研究明確地顯示了血清HBVtrRNA在新生兒HBV感染血清學診斷中的潛在意義,但在推廣至臨床應用之前,有必要進行包括動態追蹤觀察在內更大規模的研究.【參考文獻】[1]WangZ,ZhangJ,YangH,etal.QuantitativeanalysisofHBVDNAlevelandHBeAgtiterinhepatitisBsurfaceantigenpositivemothersandtheirbabies:HBeAgpassagethroughtheplacentaandtherateofdecayinbabies[J].JMedVirol,2003,71(3):360-366.[2]ZhuQ,YuG,YuH,etal.ArandomizedcontroltrialoninterruptionofHBVtransmissioninuterus[J].ChinMedJ(Engl),2003,116(5):685-687.[3]DentingerCM,McMahonBJ,ButlerJC,etal.PersistenceofantibodytohepatitisBandprotectionfromdiseaseamongAlaskanativesimmunizedatbirth[J].PediatrInfectDisJ,2005,24:786-792.[4]朱啟熔,呂晴,愈蕙,等.宮內感染HBV嬰兒接種乙肝疫苗失敗的機制和預后研究[J].中華兒科雜志,1997,35(7):349-351.[5]WangJS,ChenH,ZhuQR.TransformationofhepatitisBserologicmarkersinbabiesborntohepatitisBsurfaceantigenpositivemothers[J].WorldJGastroenterol,2005,11(23):3582-3585.[6]WheeleySM,BoxallEH,TarlowMJ,etal.HepatitisBvaccineinthepreventionofperinatallytransmittedhepatitisBvirusinfection:finalreportonaWestMidlandspilotstudy[J].JMedVirol,1990,30(2):113-116.[7]NguiSL,OConnellS,EglinRP,etal.LowdetectionrateandmaternalprovenanceofhepatitisBvirusSgenemutantsincasesoffailedpostnatalimmunoprophylaxisinEnglandandWales[J].JInfectDis,1997,176(5):1360-1365.[8]BreitkreutzR,ZhangW,LeeM,etal.HepatitisBvirusnucleicacidscirculatingintheblood:distinctpatternsinHBscarrierswithhepatocellularcarcinoma[J].AnnNYAcadSci,2001,945:195-206.[9]SuQ,WangSF,ChangTE,etal.CirculatinghepatitisBvirusnucleicacidsinchronicinfection:Representationofdifferentlypolyadenylatedviraltranscriptsduringprogressiontononreplicativestages[J].ClinCancerRes,2001,7(7):2005-2015.[10]ZhangW,HackerHJ,MildenbergerM,etal.2004.DetectionofHBVRNAinserumofpatients(Invitedpaper)[J].MethodsMolMed,2004,95:29-40.[11]吳濤,張偉,蘇勤,等.中國人終末期肝病組織中乙肝病毒轉錄體的檢測[J].第四軍醫大學學報,2004,25(7):587-589.[12]崔云,張偉,蘇勤,等.乙型肝炎病毒轉錄體血清學檢測及其在母嬰垂直傳播中的意義[J].第四軍醫大學學報,2005,26(12):1089-1092.[13]HilgerC,VelhagenI,ZentgrafH,etal.DiversityofhepatitisBvirusXgenerelatedtranscriptsinhepatocellularcarcinoma:AnovelpolyadenylationsiteonviralDNA[J].JVirol,1991,65(8):4284-4291.[14]KairatA,BeerheideW,ZhouG,etal.TruncatedhepatitisBvirusRNAinhumanhepatocellularcarcinoma:Itsrepresentationinpatientswithadvancingage[J].Intervirology,1999,42(4):228-237.[15]Zhang[1][2][3]W,HackerHJ,TokusM,etal.PatternsofcirculatinghepatitisBvirusserumnucleicacidsduringlamivudinetherapy[J].JMedVirol,2003,71(1):24-30.[16]ZhaoR,DuncanSA.Embryonicdevelopmentoftheliver[J].Hepatology,2005,41(5):956-967.[17]YuenMF,LimWL,ChanAO,etal.18yearfollowupstudyofaprospectiverandomizedtrialofhepatitisBvaccinationswithoutboosterdosesinchildren[J].ClinGastroenterolHepatol,2004,2(10):941-945

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病毒藥物及藥學監護研究

【提要】自病毒肺炎(簡稱肺炎)暴發以來,全國乃至全球的公共衛生事業均受到了嚴重的威脅。目前在肺炎的治療中,仍未有特效藥物,藥物治療的有效性和安全性也在不斷的摸索與實踐中。抗病毒藥物是治療肺炎的關鍵,藥物的合理使用對患者病程的轉歸以及預后有重要的作用。本文綜述了自疫情暴發以來常用的抗病毒藥物,探討了該類藥物的抗病毒機制、常見的不良反應、藥物相互作用以及特殊人群藥學監護,以期發揮臨床藥師在臨床合理用藥方面的作用。

【關鍵詞】病毒肺炎;抗病毒藥物;藥學監護

2019年12月,中國湖北武漢暴發了病毒肺炎(簡稱肺炎)疫情,相繼蔓延至全國其他地區。截止到2020年3月5日,全國共報道超過8萬病例確診,超過3000例患者死亡。肺炎被WHO命名為COVID-19,而導致這種疾病的病毒為病毒(SARS-CoV-2)。在《病毒肺炎診療方案(試行第七版)》[1](以下簡稱第七版指南)中指出,SARS-CoV-2作為冠狀病毒的一種,是具有包膜的正鏈單股RNA。疫情進展到今,暫無特異性抗病毒治療方法,相關人員不斷進行科學研究以尋求針對該病毒有效的藥物。目前運用于肺炎的抗病毒藥物包括正在研制的新藥和已上市的有效的藥物。本文將對該類藥物進行梳理和總結,并對使用過程中所需的藥學監護進行歸納,以達到合理用藥的目的。

一、SARS-CoV-2特點

SARS-CoV-2和嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒(SARS-CoV)、中東呼吸綜合征(MERS)-CoV同屬可感染人類的β屬冠狀病毒。SARS-CoV-2與SARS-CoV的序列同源性為79.5%,與MERS-CoV約為40.0%[2]。序列差異主要在ORF1a和編碼S-蛋白的spike基因上,這是冠狀病毒與宿主細胞作用的關鍵蛋白[3],且SARS-CoV-2主要通過S-蛋白與人體血管緊張素轉換酶2受體相結合,以此感染人上呼吸道上皮細胞。目前尚無針對SARS-CoV-2感染的特異性療法,主要研究在SARS和MERS治療經驗中的藥物是否有效,以及能否研發出新型抗病毒藥物。第七版指南中提及了靶向SARS-CoV-2-3CL水解酶的潛在藥物,如洛匹那韋;靶向SARS-CoV-2-PLP蛋白酶的潛在藥物利巴韋林;老藥磷酸氯喹以及IFN等。此外,還有正在進行臨床研究的抗病毒藥物瑞德西韋以及新提及的老藥溴己新。下面將一一列舉這些藥物的主要抗病毒作用與臨床藥學監護點。

二、常見的抗病毒藥物及其藥學監護

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解析乙型肝炎治療特殊情況處理

應用化療和免疫抑止劑治療的乙肝患者

關于因其他疾病而承受化療、免疫抑止劑治療的患者,應常規篩查乙型肝炎病毒外表抗原,若為陽性,即便乙型肝炎病毒DNA陰性和丙氨酸氨基轉移酶正常,也應在治療前1周開端服用拉米夫定或其他核苷(酸)相似物。

對乙型肝炎病毒外表抗原陰性、抗HBc陽性患者,在給予長期或大劑量免疫抑止劑或細胞毒藥物(特別是針對B或T淋巴細胞單克隆抗體)治療時,應親密監測乙型肝炎病毒DNA和乙型肝炎病毒外表抗原,若呈現陽轉則應及時加用抗病毒治療。

在化療和免疫抑止劑治療中止后,應依據患者病情決議停藥時間:①關于基線乙型肝炎病毒DNA<2000IU/ml的患者,在完成化療或免疫抑止劑治療后,應當繼續治療6個月;②基線乙型肝炎病毒DNA程度較高(>2000IU/ml)的患者,應當持續治療到和免疫功用正常的慢性乙型肝炎患者同樣的停藥規范;③關于預期療程≤12個月的患者,能夠選用拉米夫定或替比夫定;④關于預期療程更長的患者,應優先選用恩替卡韋或阿德福韋酯;⑤核苷(酸)相似物停用后可呈現復發,以至病情惡化,應予以高度注重;⑥干擾素有骨髓抑止作用,應當防止選用。

乙型肝炎病毒/丙型肝炎兼并感染患者的治療

對此類患者應先肯定是哪種病毒占優勢,然后決議如何治療。如患者乙型肝炎病毒DNA≥104拷貝/ml,而丙肝病毒RNA測不到,則應先治療乙型肝炎病毒感染。對乙型肝炎病毒DNA程度高且可檢測到丙肝病毒RNA者,應先用規范劑量聚乙二醇化干擾素和利巴韋林治療3個月,如乙型肝炎病毒DNA無應對或升高,則加用拉米夫定或恩替卡韋或阿德福韋酯治療。

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靜滴丙種球蛋白治療小兒感染探討論文

【摘要】目的觀察靜滴丙種球蛋白治療基層醫院小兒常見的難治性病毒感染的療效。方法選擇急性呼吸道感染、毛細支氣管炎、輪狀病毒感染性腸炎3組病例,在常規使用抗病毒藥物3天,效果不佳的情況下,隨機分為2組。治療組用丙種球蛋白治療而對照組則繼用抗病毒藥物治療,觀察其臨床癥狀、體征消失的時間。結果3組病例的治療組與對照組多項觀察指標比較,差異均有顯著性(P<0.01)。結論靜脈滴注丙種球蛋白用于基層醫院小兒常見的病毒感染,療效顯著,值得推廣使用。但達到療效的最小治療劑量及療程尚需進一步探索。

關鍵詞丙種球蛋白小兒病毒感染

小兒常見的病毒感染性疾病,大多分為2大類:即呼吸道和消化道的病毒感染。呼吸道常見流感病毒及呼吸道合胞病毒所致的上呼吸道感染及毛細支氣管炎;消化道多為輪狀病毒感染所致的腹瀉病。針對病毒感染國內尚無特異性的抗病毒藥物,加之基層醫院多無住院條件,不能及時發現病情變化且給予必要的處置,故大大影響了臨床治療效果。1年來,在針對以上疾病常規治療的同時,對部分病例采用了靜脈滴注丙種球蛋白治療,取得了明顯療效。現總結報告如下。

1資料和方法

1.1一般資料近1年來,我院門診收治的上呼吸道感染42例、毛細支氣管炎40例、秋季腹瀉24例,以上病例除均符合其本病的診斷標準外,末梢血細胞分析均顯示白細胞減低及淋巴細胞增高的表現,即符合病毒感染的血象特點。腹瀉患兒中輪狀病毒抗原檢測均為陽性。以上病例均為常規抗病毒藥物治療3天,病情無好轉的病例。將每組病例隨機分為治療組及對照組,兩組患兒的年齡、性別、病程及病情基本相似(P>0.05),具有可比性。

1.2方法上呼吸道感染及毛細支氣管炎病例的治療組,在停用所有的抗病毒藥物前提下,靜滴丙種球蛋白3天,對照組繼予利巴韋林注射液和喜炎平注射液治療,2組病例均輔以對癥治療。腹瀉病例治療組也停用所有抗生素,給予靜滴丙種球蛋白治療3天,對照組繼續予利巴韋林和雙黃連注射液治療,2組均用微生態制劑及補液等對癥治療。用藥劑量:5%人血丙種球蛋白溶液(上海生物制品研究所生產,50ml/瓶,每瓶含丙種球蛋白2.5g)200~300mg/(kg·d)靜脈滴注,每日1次。利巴韋林注射液10mg/(kg·d)加入葡萄糖液中靜脈滴注,每日1次。喜炎平注射液為50~100mg/d加入葡萄糖液中靜脈滴注,每日1次。雙黃連注射液60mg/(kg·d)加入糖鹽水中靜脈滴注,每日1次。

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