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1儀器與材料

1．1儀器722型光柵分光光度計（山東高密彩虹分析儀器有限公司），梅特勒AB135－S十萬分之一天平（德國），HH－42快速恒溫數顯水箱（常州國華電器有限公司）。

1．2試藥水曲柳采自長白山，經吉林大學藥學院張靜敏教授鑒定為水曲柳FraxinusmandschuricaRupr．；標準品白蠟樹精（自制），經過1H－NMR，13C－NMR鑒定，HPLC峰面積歸一化法測定其含量達98％以上；其它試劑為分析純。

2方法與結果

2．1標準曲線的繪制精密稱取白蠟樹精對照品，置于50ml容量瓶中，加入適量甲醇溶解并定容至刻度，配制成含白蠟樹精0．1mg／ml的原對照品溶液。精密吸取對照品溶液適量，加甲醇定容至50ml，配制成含白蠟樹精分別為8，16，24，32，40μg／ml的對照品系列溶液。于334nm處測定吸收度，并以吸光度與對照品濃度進行回歸，得標準曲線方程Y＝0．036X－0．0219，r＝0．9997（n＝5）。實驗表明白蠟樹精在8～40μg／ml濃度范圍內與吸光度呈良好的線性關系。

2．2精密度實驗精密吸取上述原對照品溶液適量2ml，加甲醇稀釋至10ml，于334nm處測定吸光度，連續6次，結果表明6次測定的RSD為0．54％，故儀器精密度良好。

2．3穩定性實驗將精密度實驗項下的對照品溶液于0，1，2，4，6，8h在334nm處測定吸光度，實驗結果表明RSD＝0．93％，對照品溶液在8h內穩定性良好。

2．4重現性實驗取水曲柳皮粗粉6份各2g，精密稱定后置于50ml容量瓶中，加甲醇至刻度線，超聲30min，過濾，取濾液稀釋20倍后分別于334nm處測定吸光度，并計算其含量，實驗結果6個樣品含量RSD＝1．57％，表明本法重現性良好。

2．5加樣回收率實驗取已知重現性實驗項下的6份樣品中的任意一份，精密吸取1ml，稀釋20倍后，準確加入一定量的對照品溶液，混勻，在334nm處測定吸光度，計算白蠟樹精的平均加樣回收率為98．2％，RSD＝2．07％（n＝6）。

2．6正交實驗設計優化以水曲柳中總香豆素為考察指標，選擇超聲提取工藝中4個主要影響因素：浸漬時間（A），乙醇濃度（B），水浴溫度（C），提取時間（D）進行優化提取水曲柳中香豆素的條件。研究方法采用正交設計，每個因素選擇3個水平，以L9（34）正交表安排實驗，具體影響因素及實驗水平見表1。

表1因素水平（略）

每一實驗號取水曲柳皮粗粉2．0g，精密稱定后置于50ml容量瓶中，加甲醇至刻度線，按要求浸漬一定時間后在設定的水浴溫度下進行超聲提取，取出冷卻至室溫，過濾，取濾液稀釋20倍后進行測定，各實驗號平行操作重復3次。結果見表2。

由表2極差R比較可知，影響水曲柳總香豆素提取的因素主次順序為B＞D＞A＞C，即乙醇濃度最重要，超聲時間次之。按表2的K值直觀分析，得出超聲提取最佳工藝組合為B3D3A2C3。進一步經方差分析表明乙醇濃度和超聲提取時間均對總香豆素的提取具有非常顯著性差異。

表2L9（34）正交實驗設計及結果分析（略）

3討論

由于水曲柳中的秦皮乙素與秦皮甲素的含量相對較低，但白蠟樹精的化學性質穩定，所以本實驗選擇白蠟樹精為對照品考察檢測條件的可行性。游離香豆素能溶于沸水，難溶于冷水，易溶于甲醇、乙醇、氯仿、乙醚等溶劑；香豆素苷類能溶于水、甲醇、乙醇，而難溶于乙醚、苯等極性小的溶劑［4］?？紤]對總香豆素的溶解與溶劑的毒性，本實驗選擇乙醇作為提取水曲柳中總香豆素的溶劑。

通過正交實驗設計及方差分析，表明乙醇濃度和超聲提取時間均對總香豆素的提取具有非常顯著性差異，而水浴溫度與浸漬時間沒有顯著性差異，結合實際條件，優選出水曲柳皮總香豆素的最佳提取工藝為水曲柳粗粉加25倍量95％乙醇，室溫超聲提取45min。實驗過程中發現水曲柳皮中含有較多的糖，所以選擇95％的乙醇既能提高總香豆素的提取率，又能降低糖的溶解度，有利于香豆素成分的進一步純化和分離。該提取工藝簡單，成本低，節能省時，對研究水曲柳的提取分離具有一定的參考價值。

【參考文獻】

［1］嚴仲鎧，李萬林．中國長白山藥用植物彩色圖譜［M］．北京：人民衛生出版社，1997：339．

［2］ReppelL．Naturalcoumarins，Pharmazie［J］．1954，9：278．.

［3］M．V．Artem＇eva，G．K．NikonovandM．O．Karryev．CoumarinsofFraxinusmandschuricaandF．potamophila［J］．ChemistryofNaturalCompounds，1975，9（4）：465．

［4］肖崇厚．中藥化學［M］．上海：上?？茖W技術出版社，2002：227

【摘要】目的篩選水曲柳總香豆素的最佳提取工藝。方法采用正交實驗設計L9（34）考察浸漬時間，乙醇濃度，水浴溫度，提取時間4個因素對提取工藝的影響。結果水曲柳中總香豆素含量的最佳工藝為水曲柳粗粉加25倍量95％乙醇，室溫超聲提取45min。結論優選的超聲提取條件工藝簡單，成本低，節能省時，可增加水曲柳的利用率。

【關鍵詞】水曲柳白蠟樹精正交實驗總香豆素