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1儀器與試藥

1.1儀器Agilent1100Series高效液相色譜儀（安捷倫公司）；SartoriusBP211-D電子天平（德國賽多利斯公司）。

1.2試藥

麻黃、芍藥、細辛、干姜、甘草、桂枝、半夏和五味子藥材（均購于成都市荷花池中藥材市場）；磷酸二氫鉀、磷酸；甲醇和乙腈為色譜純。

2方法［2，3］

2.1指標及含量測定方法《中國藥典》2005版收載的小青龍湯現有制劑均只以方中的芍藥苷為質量控制指標，因此本方保留該質量控制指標。復方中麻黃為君藥，因此增加鹽酸麻黃堿為質量控制指標。

2.1.1鹽酸麻黃堿含量測定方法鹽酸麻黃堿對照品溶液的制備：精密稱取鹽酸麻黃堿對照品10.83mg于100ml容量瓶中，以甲醇定容，搖勻，精密吸取2ml于25ml量瓶中，甲醇定容，搖勻，過0.45μm微孔濾膜，取續濾液備用。

麻黃供試品的制備：精密量取復方提取液適量（相當于麻黃生藥0.2g）于已干燥的錐形瓶中，低溫揮干，以25ml甲醇溶解，稱定重量，超聲處理45min，放冷，再稱定重量，以甲醇補足減少量，搖勻，濾過，精密量取續液1ml，置中性氧化鋁柱（100～200目，內徑1cm，1.5g）上，以50%甲醇洗脫，收集洗脫液約9ml于量瓶中，加磷酸1滴，以50%甲醇定容搖勻，過0.45μm微孔濾膜，取續濾液備用。

測定方法：C18柱（250mm×4.6mmDiamonsil5μm），流動相為乙腈-0.1%磷酸（9∶90），以三乙胺調節pH=4.5，檢測波長207nm，流速1ml/min，柱溫25℃，理論板數以鹽酸麻黃堿峰計，不得低于3000。

鹽酸麻黃堿標準曲線的繪制：分別吸取鹽酸麻黃堿對照品溶液2，4，6，8，10，12，16，20，24μl進樣，按照測定方法測定，繪制標準曲線。結果見圖1。回歸曲線Y=1722.7X+39.103，R2=0.9998，鹽酸麻黃堿進樣量在0.017288～0.207456μg間具有良好的線性關系。

2.1.2芍藥苷含量測定方法

芍藥苷對照品溶液的制備：精密稱取芍藥苷對照品適量，加入量瓶中，甲醇定容，制成60μg/ml的甲醇對照品溶液，過0.45μm微孔濾膜，取續濾液備用。

白芍供試品溶液的制備：精密量取復方提取液適量（相當于白芍生藥0.1g），水浴揮干，以35ml稀乙醇轉移至50ml量瓶中，超聲處理30min，冷卻至室溫，稀乙醇定容，搖勻，過0.45μm微孔濾膜，取續濾液備用。

測定方法：C18柱（250mm×4.6mm,Diamonsil5μm），流動相為乙腈-0.1%磷酸（14∶86），檢測波長230nm，流速1ml/min，柱溫25℃，理論板數以芍藥苷峰計，不得低于2000。

芍藥苷標準曲線的繪制：分別吸取芍藥苷對照品溶液1，2，3，4，6，8μl進樣，按照測定方法測定，繪制標準曲線，（見圖2）。回歸曲線Y=15414X+2.5391，R2=0.9998，芍藥苷進樣量在0.006～0.048μg間具有良好的線性關系。

2.26種提取工藝的優化研究及結果

2.2.1不同提取溶劑回流提取工藝研究及結果以水、60%乙醇、95%乙醇為提取溶劑，按L9（34）正交表進行實驗。因素水平安排按照表1執行，實驗按各正交表實施，結果用SPSS11.5作方差分析，確定優化工藝。結果見表2～7。表1不同溶液回流提取工藝因素水平（略）表2以水為溶劑回流提取考察結果（略）表3以水為溶劑回流提取方差分析結果（略）表4以60%乙醇為溶劑回流提取考察結果（略）表5以60%乙醇溶劑回流提取方差分析結果（略）表6以95%乙醇為溶劑回流提取考察結果（略）表7以95%乙醇為溶劑回流提取方差分析結果（略）

由方差分析結果分析得，影響因素大小為：提取次數（C）＞提取溶劑量（A）＞提取時間（B），3個因素均具有顯著性影響，優化工藝為A2B2C3。

由方差分析結果得，影響因素大小為：提取時間（B）＞提取溶劑量（A）＞提取次數（C），3個因素均具有顯著性影響，優化工藝為A3B2C2。

由方差分析結果分析得，影響因素大小為：提取次數（C）＞提取溶劑量（A）＞提取時間（B），3個因素均具有顯著性影響，優化工藝為A3B2C3。

2.2.2不同提取溶劑滲漉提取工藝研究及結果以水、60%乙醇、95%乙醇為提取溶劑，按L9（34）正交表進行實驗。因素水平安排按照表8執行，實驗按各正交表實施，結果用SPSS11.5作方差分析，確定優化工藝。結果見表9～14。表8不同溶劑滲漉提取工藝因素水平（略）表9以水為溶劑滲漉提取考察結果（略）表10以水為溶劑滲漉提取方差分析結果（略）表11以60%乙醇為溶劑滲漉提取考察結果（略）表12以60%乙醇溶劑滲漉提取方差分析結果（略）表13以95%乙醇為溶劑滲漉提取考察結果（略）表14以95%乙醇為溶劑滲漉提取方差分析結果（略）

由方差分析結果分析得，影響因素大小為：滲漉液量（A）＞滲液速度（C）＞藥材粒度（B），A和C因素具有顯著性影響，優化工藝為A3B2C3。

由方差分析結果得，影響因素大小為：藥材粒度（B）＞滲漉液量（A）＞滲漉速度（C），B因素具有顯著性影響，優化工藝為A1B3C1。

由方差分析結果分析得，影響因素大小為：滲漉液量（A）＞藥材粒度（B）＞滲漉速度（C），A因素具有顯著性影響，優化工藝為A2B2C1。

2.3不同提取工藝及提取溶劑對提取工藝的影響對比研究

2.3.1不同正交實驗因素分析結果見表15。表15不同正交實驗結果分析（略）

2.3.2不同優化提取工藝的對比研究按照上述各種優化工藝，分別稱取復方藥材進行提取試驗，以提取液中鹽酸麻黃堿和芍藥苷的含量為指標加權（權重系數依次為0.6和0.4），綜合評價提取工藝。對比不同提取工藝的差異。結果見表16。表16不同工藝驗證結果(略)

2.3.3相同方法不同溶劑對提取工藝的影響研究結果見表17。表17不同溶劑時間的比較結果（略）

2.3.4相同溶劑不同提取方法間的比較研究結果見表18。表18不同提取方法比較結果（略）

2.3.5綜合評價結果實驗表明，在考察范圍內，小青龍湯提取工藝優劣順序為60%乙醇回流提取＞水回流提取＞60%乙醇滲漉＞95%乙醇回流提取＞水滲漉；提取方法對比研究結果表明，回流提取方法效果較滲漉提取方法效果好；提取溶劑對比研究表明60%乙醇為提取溶劑較其他兩種溶劑效果好。

3討論

現有小青龍湯成方制劑只選擇了芍藥苷為含量控制指標，對于復方制劑的多指標多成分而言，顯得質量控制過于單一。本研究從處方構成出發，增加君藥麻黃的指標成分鹽酸麻黃堿為指標，更多的注重全方的系統性。

實驗結果均反應回流提取法較滲漉法的提取效果好，其中提取溶劑又以60%乙醇為佳，這與控制指標的選擇有一定的關系，但是是否在藥效方面有正變的關系，還需要進行藥效學研究。

小青龍湯整體提取的不同工藝比較結果得出，優化提取工藝為12倍量60%乙醇回流提取2次，1.5h/次。所得優化提取工藝合理可行，可作為小青龍湯的提取工藝。

【參考文獻】

［1］段富津.方劑學［M］.上海：上海科學技術出版社，2002：25.

［2］國家藥典委員會.中國藥典，Ⅰ部［S］.北京：化學工業出版社，2005.

［3］馬云淑，寧朝香.小青龍滴丸的制備工藝及質量標準［J］.云南中醫學院學報，1999，22（3）：14.

【摘要】目的探討提取方法、提取溶劑對小青龍湯復方提取的影響，并篩選出最佳提取工藝。方法擬用回流、滲漉兩種傳統提取法，水、60%乙醇、95%乙醇3種提取溶劑進行正交實驗，以提取液中鹽酸麻黃堿、芍藥苷含量（權重系數依次為0.6，0.4）為指標，通過指標加權計算綜合評分以評價提取工藝，篩選出6種不同提取工藝的最佳提取條件，再對這6種提取工藝進行相同方法不同溶劑、相同溶劑不同方法的比較研究。結果小青龍湯最佳提取工藝為以12倍量60%乙醇回流提取2次，1.5h/次。結論所得優化提取工藝合理可行，可作為小青龍湯的提取工藝。

【關鍵詞】小青龍湯復方；正交實驗；鹽酸麻黃堿；芍藥苷