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【摘要】目的建立消痛靈搽劑的質量標準。方法采用薄層色譜法（TLC）對處方中的梔子、姜黃、乳香、沒藥進行定性鑒別；采用反相高效液相色譜法（RPHPLC）定量分析消痛靈搽劑中大黃素和大黃酚的含量。結果TLC分離效果好，斑點清晰；大黃素在0.248～1.984μg，大黃酚在0.292～2.336μg范圍內呈良好的線性關系，平均回收率大黃素為99.7%，RSD﹦0.64%；大黃酚為99.2%，RSD﹦0.89%。結論該方法簡便、準確、重復性好、能有效控制該復方制劑的質量。

【關鍵詞】消痛靈搽劑；大黃素；大黃酚；薄層色譜；反相高效液相色譜

Abstract：ObjectiveToestablishthequalitystandardofXiaotonglingliniment．MethodsFructusGardeniae,RhizomaCurcumaelongae,Olibanum,MyrrhawereidentifiedbyTLC.ThecontentofemodinandchrysophanolinXiaotonglinglinimentwasdeterminedbyRPHPLC．ResultsTheidentifiedcharacteristicsofchromatographyweredistinctandthespotswereclear.Thestandardcurvewaslinearwithintherangeof0.248～1.984μgforemodinand0.292～2.336μgforchrysophanol．Theaveragerecoveryofemodinwas99.7%withRSDof0.64%,withthatofchrysophanolwas99.2%withRSDof0.89%．ConclusionThemethodisconvenient,accurateandhasagoodreappearance．Thepreparation''''squalitycanbecontrolledeffectively．

Keywords：Xiaotonglingliniment；Emodin；Chrysophanol；TLC；HPLC

消痛靈搽劑是由我院文紹敦教授根據中醫藥理論和多年臨床經驗，篩選有效藥物研制而成的中藥復方外用制劑，全方以大黃為君藥，梔子為臣藥，佐以姜黃、乳香、沒藥，具有清熱止痛、化淤散結的功效，主要用于治療急性痛風性關節炎、跌打損傷、局部淤腫疼痛等病癥，臨床療效顯著。為了有效控制該制劑的質量，本文建立了TLC法對梔子、姜黃、乳香、沒藥等4味藥材進行定性鑒別；并采用RPHPLC法測定君藥大黃中的大黃素和大黃酚的含量。研究結果表明，該方法具有簡便、準確、重復性好、專屬性強等特點，能有效控制消痛靈搽劑的質量。

1儀器與試藥

高效液相色譜儀（LC10AT泵，SPD10A紫外檢測器，日本島津公司）；N2000型色譜數據工作站（浙江大學智能信息工程研究所）；KQ100超聲波清洗器（浙江昆山市超聲儀器有限公司）；硅膠G板（自制，規格：12cm×24cm)；大黃素、大黃酚、梔子苷、姜黃素對照品（中國藥品生物制品檢定所）；乳香、沒藥對照藥材由青海大學醫學院中藥教研室魏全嘉教授鑒定；消痛靈搽劑及陰性對照樣品（自制）；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2薄層色譜鑒別

2.1梔子的TLC法鑒別取消痛靈搽劑作為供試品溶液。取缺梔子的陰性樣品作為陰性對照溶液。另取梔子苷對照品，加甲醇制成每毫升含2mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述溶液各3μl，分別點樣于同一塊硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇（5∶2）為展開劑，展開，取出，晾干。用10%的硫酸乙醇液顯色，110℃烘至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯淺黃色斑點，陰性對照溶液在相應的位置上無此斑點。結果見圖1。

2.2姜黃的TLC法鑒別取消痛靈搽劑作為供試品溶液。取缺姜黃的陰性樣品作為陰性對照溶液。另取姜黃素對照品，加甲醇制成每毫升含2mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述溶液各3μl，分別點樣于同一塊硅膠G薄層板上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸（5.5∶1.2∶0.6）為展開劑，展開，取出，晾干。用濃氨水顯色，110℃烘至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯黃色斑點，陰性對照溶液在相應的位置上無此斑點。結果見圖2。

圖1梔子的TLC圖譜（略）

圖2姜黃的TLC圖譜（略）

2.3乳香的TLC法鑒別取消痛靈搽劑作為供試品溶液。取缺乳香的陰性樣品作為陰性對照溶液。另取乳香對照藥材0.5g，加乙醚10ml，超聲處理20min，濾過，濾液作為對照藥材溶液。吸取上述溶液各3μl，分別點樣于同一硅膠G薄層板上,以石油醚（30～60℃）-醋酸乙酯（34∶6）為展開劑，展開，取出，晾干。用5%香草醛硫酸溶液顯色，110℃烘至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯紫色斑點，而陰性對照溶液在相應的位置上無斑點。結果見圖3。

2.4沒藥的TLC法鑒別取消痛靈搽劑作為供試品溶液。取缺沒藥的陰性樣品作為陰性對照溶液。另取沒藥對照藥材0.5g，加乙醚10ml，超聲處理20min，濾過，濾液作為對照藥材溶液。吸取上述溶液各3μl，分別點樣于同一硅膠G薄層板上,以環己烷-丙酮（17∶2）為展開劑，展開，取出，晾干。用5%香草醛硫酸溶液顯色，110℃烘至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯紫色斑點，而陰性對照溶液在相應的位置上無斑點。結果見圖4。

圖3乳香的TLC圖譜（略）

圖4沒藥的TLC圖譜（略）

3含量測定

3.1色譜條件色譜柱：HypersilC18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-0.1%磷酸溶液（87∶13）；檢測波長：254nm；流速：1.0ml·min-1；進樣量：10μl。

3.2線性范圍的考察精密稱取大黃素對照品6.2mg，大黃酚對照品7.3mg，分別置兩個50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。分別精密吸取對照品溶液2，4，6，10，16μl，進樣，在上述色譜條件下測定峰面積，以大黃素、大黃酚進樣量為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為：Y大黃素=1.26×103X－12.95，r=0.9997；Y大黃酚=2.81×103X－7.52，r=0.9995。結果表明，大黃素、大黃酚進樣量在0.248～1.984μg和0.292～2.336μg線性關系良好。

3.3供試品溶液的制備精密量取消痛靈搽劑樣品3ml，置水浴上蒸干，殘渣加適量甲醇溶解，轉移至10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液。

3.4陰性對照實驗取缺大黃陰性對照樣品，按“3.3”項下方法制備陰性對照品溶液，取10μl進樣，結果在與大黃素、大黃酚對照品保留時間相同的位置上無色譜峰出現，表明缺大黃的陰性對照品溶液對測定無干擾。

3.5精密度實驗精密吸取大黃素、大黃酚對照品溶液各10μl,在上述色譜條件下連續進樣5次，大黃素、大黃酚峰面積積分值的RSD分別為0.86%，1.02%，結果表明該方法的精密度良好。

3.6重復性實驗取同一批號樣品5份，分別按“3.3”項下操作，依法測定，計算得大黃素、大黃酚的平均含量分別為0.136，0.283mg·ml-1，RSD分別為1.53%和0.71%。

3.7穩定性實驗取同一供試品溶液放置不同時間(0，2，4，8，12h)后進樣，測定峰面積，結果RSD為0.23%，表明溶液在12h內保持穩定。

3.8加樣回收實驗取已知含量的樣品5份，分別精密加入大黃素對照品溶液（0.124mg·ml-1）、大黃酚對照品溶液（0.146mg·ml-1）各2ml，按“3.3”項下制備回收率測定用樣品溶液，依法測定，計算回收率，大黃素平均回收率為99.7%，RSD=0.64%；大黃酚平均回收率為99.2%，RSD=0.89%，結果表明本方法的回收率好。

3.9樣品測定精密吸取對照品和供試品溶液，依上述條件進行測定，記錄峰面積，按外標法以峰面積計算含量。結果見表1。

表1樣品含量測定結果（略）

4討論

薄層色譜法（TLC）鑒別項下選用的展開系統均參照《中國藥典》（2005年版）的鑒別方法［1］制定，方中梔子、姜黃選擇主要有效成分梔子苷、姜黃素作為對照品，而乳香、沒藥無對照品，則選用對照藥材作對照，樣品及陰性對照品采用平行試驗,結果表明各檢出成分分離效果好，不受其他成分的干擾，操作簡便，專屬性強，可作為該制劑的定性控制指標。

大黃為消痛靈搽劑的君藥，主要含有游離和結合的蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃素甲醚和大黃酚，其中大黃素具有抑菌、抗炎、免疫調節、抑制血小板聚集、改善微循環、降低血液黏度、抗氧化、清除自由基、保護肝腎等作用［2］；大黃酚具有止咳、抗菌、止血、抗氧化、清除自由基等作用［3］，這些藥理作用在很大程度上與該復方制劑的功能主治相一致，故選擇君藥大黃中的大黃素、大黃酚作為質量控制指標成分，結合文獻［4］用RP-HPLC進行含量測定，前處理過程簡單，陰性無干擾，靈敏度高，準確性及重現性好，可作為本品的定量控制指標。

根據樣品測定結果，5批樣品中大黃素的平均含量為0.131mg·ml-1，大黃酚的平均含量為0.287mg·ml-1，考慮到藥材來源、制劑工藝等因素，建議其限度為本品含大黃以大黃素和大黃酚的總量計,不得少于0.4mg·ml-1。

【參考文獻】

［1］國家藥典委員會.中國藥典［S］.北京：化學工業出版社,2000：18.

［2］張喜平，李宗芳.大黃素的藥理作用研究概況［J］.中國藥理學通報，2003，19(8)：851.

［3］譚曉虹，張丹參，張力，等.大黃酚在兔體內藥動學的研究［J］.中國醫院藥學雜志，2005，26(8)：947.

［4］王亞林，索銀科，劉學東.HPLC法測定清熱消炎片中大黃素和大黃酚的含量［J］.西北藥學雜志，2004，19(5)：207.