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【論文關鍵詞】組織病理學技術運動人體科學

【論文摘要】近年來分子生物學技術以及其它高、新技術在病理領域得到廣泛的應用，同樣作為體育界的基礎研究學科運動人體科學的發展已經不能滿足簡單的宏觀的研究，越來越多的醫學檢驗以及病理學實驗技術在運動人體科學廣泛應用，尤其是組織病理學技術中定位技術，例如免疫組化、原位雜交等。本文就以上三種病理學常用的定位技術的方法進行綜述。

1免疫組織化學實驗技術

隨著免疫組織化學染色技術的廣泛應用，病理學研究產生了劃時代的飛躍。免疫組織化學是病理學實驗中常用的方法，是在蛋白質水平用各種特異性抗體檢測細胞內各種抗原物質。根據標記物的不同，免疫組織化學技術可分為免疫熒光細胞化學技術、免疫酶細胞化學技術、免疫鐵蛋白技術、免疫金-銀細胞化學技術、親和免疫細胞化學技術、免疫電子顯微鏡技術等。

1.1免疫組織化學實驗步驟免疫組化技術是在組織化學的方法上結合免疫學的理論和技術發展起來的一門新技術。其原理是利用免疫學的核心——抗原體特異性結合的原理，用標記抗體追蹤抗原，通過化學反應使標記于結合后的特異性抗體上的顯示劑，如酶、金屬離子、同位素等顯示一定的顏色，并借助顯微鏡、熒光顯微鏡、電鏡對其顏色進行觀察，以達到檢測抗原物的目的[1]。

1.2免疫組化技術的優點免疫組化技術的優點：①特異性強，免疫組化中抗體與組織細胞中的抗原的結合是特異的。如白細胞共同抗原（LCA）顯示淋巴細胞成分。②敏感性高，而今，由于抗生物素—生物素（ABC）法和鏈酶素—過氧化物酶連接（SP）法的出現，使抗體的稀釋度(代表敏感度)達到了上千、上萬，甚至上億倍，使免疫組化技術更加可靠。③定位準確，由于抗原抗體的結合是特異的，因而免疫組化技術可在組織和細胞內準確定位，對不同抗原在同一組織或細胞中進行定位觀察，將形態與功能相結合，對疾病進行深入的研究。

2原位雜交實驗技術

原位雜交是將組織化學與分子生物學技術結合來檢測合定位核酸的技術。它是用一段已知序列的核苷酸片斷來檢測細胞內是否存在欲檢測物質的DNA或RNA，是比免疫組化更加靈敏而深入一個層次的檢驗方法。根據所選探針和待測靶序列的不同，核酸原位雜交有DNA-DNA雜交、DNA-RNA雜交、RNA-RNA雜交等。

2.1原位雜交技術的應用原位雜交由于不需要從待測組織中提取核酸，可完好的保存組織、細胞的形態結構，將形態學與基因功能活動的變化相結合進行多層面的研究。主要應用：①細胞特異性mRNA轉錄的定位可用于基因圖譜、基因表達和基因組進化的研究；②感染組織病毒DNA/RNA的檢測和定位；③癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉錄水平的表達及其變化的監測；④基因在染色體上的定位；⑤檢測染色體的變化；⑥間期細胞遺傳學的研究。

2.2原位雜交技術與免疫組化的比較

2.2.1兩者的區別原位雜交與免疫組化染色技術相比較，這兩種方法的共同之處均具有定位檢測的功能，且均有較高的敏感性和特異性，所不同的是免疫組化染色是用的是抗體，其檢測對象是抗原，機制是抗原-抗體的特異性結合，是蛋白質表達水平的檢測；原位雜交使用的是探針，遵循堿基互補配對的原則與待測靶序列結合，是DNA或mRNA水平的檢測。從實驗方法來看，免疫組化染色操作相對簡單，成本相對較低，受外界因素的影響相對小；原位雜交技術無論從實驗設計上，還是從實際操作上均較免疫組化染色復雜，成本的高低與試劑的種類和來源密切相關。一般而言，直接選用商品化的標記探測和檢測試劑盒的實驗成本較高；熒光標記探針較非熒光標記探針的成本高，對樣本及實驗條件的要求較高，也更容易受到外界因素的影響。

2.2.2免疫組化與原位雜交雙標技術雙標技術是在同一張組織切片上標記兩種不同的抗體或同時應用兩種不同的檢測手段，如免疫組化和原位雜交技術，在不同層次來檢測同一細胞上某些物質的表達是否有相關性的一種實驗方法。與傳統的單項檢測相比，雙標記具有無可比擬的優越性，可以克服由于切片間各種差異而引起的時間或空間的樣本誤差。實驗方法上先進行原位雜交會減少免疫組化過程中對待測DNA或RNA的破壞或影響，一般目前均推薦先進行原位雜交后進行免疫組化標記[2，3]。具體的操作跟單純的免疫組化和原位雜交各自的方法一致。需要注意的問題就是：①所用的實驗設備必須經DEPC水浸泡或200℃烤箱過夜，操作時須帶口罩及手套；②當雜交步驟完成后，切片必須認真浸泡及長時間洗滌至少超過30min。③作免疫組化的各步驟時間均須適當延長，以增加抗原抗體間的結合，楊青春等人研究發現每個步驟均延長2～3倍時間。④免疫組化顯色后不需要用蘇木精復染，以免遮蓋核信號。

參考文獻

[1]紀小龍，施作霖.診斷免疫組織化學[M].北京：軍事醫學科學出版社，1997.5.

[2]許良中.實用腫瘤病理方法學[M].上海：上海醫科大學出版社，1997:222-223

[3]王伯紜，李玉松，黃高升，等.病理學技術[M].北京：人民衛生出版社，2000:587-589.