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【摘要】目的為充分利用馬鞭草植物資源，避免資源的浪費(fèi)，探討馬鞭草總黃酮的提取及鑒別方法。方法采用超聲波乙醇浸提法從馬鞭草中提取黃酮類物質(zhì)，對(duì)所提取的黃酮類物質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證，并用分光光度法測(cè)定含量。結(jié)果測(cè)得樣品中總黃酮的含量C=0.2028mg/ml，回收率為101.4%，其純度和產(chǎn)率均較高。結(jié)論該方法采用全物理過(guò)程，無(wú)任何污染，是提取馬鞭草黃酮類物質(zhì)的有效途徑。

【關(guān)鍵詞】超聲波提取馬鞭草總黃酮鑒別

TheTotalFlavanoneofHerbaVerbenaeExtractionandtheIdentificationbyUltrasonicWave

Abstract：ObjectiveTomakeuseoftheresourcesofherbaverbenae,avoidwastingandapproachtheextractionoftotalflavanoneofherbaverbenae.MethodsTheflavonoidswereextractedbyethanolasthesolventfromHerbaVerbenaewithultrasonicwaveandethanolextraction.UsingspectrophotometrytoextractandchecktheflavanoneofHerbaVerbenae.ResultsThedensityofthetotalflavanoneofherbaverbenaewasC=0.2028mg/mlandtherateofrecoverywas101.4%.Ttheoutcomeandthepurityoftheflavanonewereallveryhigh.ConclusionThismethodisapurelyphysicalprocessandhasnotanypollution.ItisanidealwaytoextracttheflavanoneofHerbaVerbenae.

Keywords：Ultrasonicwavetreatment；Herbaverbenae；Totalflavanone；Identification

馬鞭草Herbaverbenae始載于《名醫(yī)別錄》，為馬鞭草科植物馬鞭草VerbenaoficinalisL．的全草，廣泛分布于我國(guó)中南、西南及山西、甘肅、新疆、江蘇和浙江等地［1］。馬鞭草性苦、辛，微寒，具有清熱解毒、活血通經(jīng)、利水消腫、截瘧的功效，用于感冒發(fā)熱、黃疸、痢疾、痛經(jīng)、水腫、瘧疾、跌打損傷等［1］。其主治癥瘕積聚、經(jīng)閉痛經(jīng)、瘧疾、喉痹、癰腫、水腫、熱淋等癥，可用于治療瘧疾、白喉、傳染性肝炎、流行性感冒、絲蟲(chóng)病、咳嗽等［2］。馬鞭草亦可利尿，止血，促進(jìn)泌尿系統(tǒng)結(jié)石的排出，減少黏膜出血，緩解疼痛，配合其它常用利水通淋化石的中藥，臨床常獲良效［3］。除此之外，其外用可治療痔瘡、關(guān)節(jié)痛、跌打損傷、水疝等［4，5］。馬鞭草含有鞭草苷、5二氫馬鞭草苷、桃葉珊瑚苷、熊果酸、3α，24二羥基齊墩果酸、十六酸、β谷甾醇、羽扇豆醇、蒿黃素、β胡蘿卜素等化學(xué)成分［2］。由于其在臨床應(yīng)用中有明顯的療效，近年又發(fā)現(xiàn)有新的藥理活性，現(xiàn)代研究又發(fā)現(xiàn)馬鞭草醇提取物具有抗生育、抗癌作用［1］。因此馬鞭草中的化學(xué)成分及藥效物質(zhì)引起了新的關(guān)注。馬鞭草由于臨床應(yīng)用無(wú)毒副作用，前景具有潛在優(yōu)勢(shì)，對(duì)其研究受到重視。

近年來(lái)，超聲技術(shù)應(yīng)用于提取植物中的生物堿、苷類、生物活性物質(zhì)、動(dòng)物組織漿的毒質(zhì)等研究已有報(bào)道［6，7］，表明其具有能耗低、效率高、不破壞有效成分的特點(diǎn)。很多研究表明，利用超聲波產(chǎn)生的強(qiáng)烈振動(dòng)、高的加速度、強(qiáng)烈的空化效應(yīng)、攪拌作用等，可加速植物材料中的有效成分進(jìn)入溶劑，從而增加有效成分的提取率，縮短提取時(shí)間，并且還可避免高溫對(duì)提取成分的影響［7］。但超聲技術(shù)應(yīng)用于提取馬鞭草中黃酮類物質(zhì)的研究尚未見(jiàn)報(bào)道，本文報(bào)道用超聲波提取馬鞭草總黃酮及鑒別。

1儀器與試劑

1.1儀器KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器（超聲工作頻率40kHz、昆山市超聲儀器有限公司）；UV755B紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海分析儀器總廠）；ZFI型三用紫外分析儀(上海顧村光電儀器廠)；SHBIII循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）。

1.2試劑95%乙醇；亞硝酸鈉AR；硝酸鋁AR；氫氧化鈉AR；三氯化鋁AR；鹽酸AR；氨水AR；乙酸鎂AR；鎂粉AR；正丁醇AR；冰醋酸AR；醋酸乙酯AR；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；新鮮馬鞭草購(gòu)自廣西百色市人民菜市。

2方法與結(jié)果

2.1總黃酮成分提取取新鮮馬鞭草，烘干，粉碎。稱取馬鞭草粉末約6g，加80ml95%乙醇，超聲波提取2.5h，抽濾。濾渣再加80ml95%乙醇，超聲波提取2.5h，抽濾，合并兩次濾液，減壓回收乙醇至濾液僅剩25ml左右為止，放置250ml容量瓶中，用60%乙醇稀釋至刻度，得樣品液。

2.2測(cè)定方法依據(jù)以蘆丁為對(duì)照品測(cè)定馬鞭草中總黃酮的含量，加入鋁離子試劑，同時(shí)控制適宜pH值，使黃酮化合物與鋁鹽形成絡(luò)合物，在可見(jiàn)光區(qū)能獲得穩(wěn)定的特征吸收峰。

2.3定量實(shí)驗(yàn)-總黃酮的含量測(cè)定

2.3.1波長(zhǎng)的選擇

取樣品液適量，在0.30ml5%亞硝酸鈉溶液存在的堿性條件下，經(jīng)硝酸鋁顯色后，以試劑為空白參比液在420～700nm波長(zhǎng)范圍測(cè)定絡(luò)合物的吸光度，絡(luò)合物于510nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故測(cè)定時(shí)選用此波長(zhǎng)。

2.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別精密吸取蘆丁對(duì)照液（0.10mg/ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00ml于10.00ml容量瓶中，分別加入5%亞硝酸鈉溶液0.30ml，搖勻，靜置6min；再加10%硝酸鋁溶液0.30ml，搖勻，靜置6min；再加4%氫氧化鈉溶液4.00ml，用60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置12min，以試劑作空白參比液，于510nm處測(cè)吸光度。結(jié)果見(jiàn)表1。表1紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)定蘆丁對(duì)照液吸光度（略）

根據(jù)上表得回歸方程：A=-0.03110+13.52C，r=0.9999。

2.3.3提取物含量的測(cè)定精密吸取樣品液0.50ml，置10ml容量瓶，按標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備方法測(cè)定吸光度A=0.106，根據(jù)回歸方程：A=-0.03110+13.52C，計(jì)算樣品中總黃酮的含量C=0.2028mg/ml。

2.3.4回收實(shí)驗(yàn)精密量取樣品液2.00ml，加入標(biāo)準(zhǔn)蘆丁對(duì)照品2.00ml（0.10mg/ml），同前樣品測(cè)定方法操作測(cè)定吸光度，求出回收率為101.4%。

2.4定性實(shí)驗(yàn)-總黃酮的鑒別

2.4.1顏色反應(yīng)

紫外光下呈色反應(yīng)：取該樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，在可見(jiàn)光下呈灰黃色，在紫外光下呈灰褐色并有熒光斑點(diǎn)。

濃氨水反應(yīng)：取該樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，將濾紙?jiān)诎彼戏窖?0s，立即在紫外光下觀察，呈極明顯的黃褐色熒光斑點(diǎn)。

三氯化鋁反應(yīng)：取樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，滴加1％三氯化鋁乙醇溶液，吹干。在可見(jiàn)光下呈灰黃色，在紫外光下呈黃色熒光斑點(diǎn)。

乙酸鎂反應(yīng)：取樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，滴加1%乙酸鎂甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黃色斑點(diǎn)。

鹽酸-鎂粉反應(yīng)：取乙醇提取液1ml于試管中加鎂粉，再加入濃鹽酸數(shù)滴（一次加入），在泡沫處呈紫紅色。

2.4.2紙層析取樣品溶液10μl點(diǎn)在濾紙上。用正丁醇∶醋酸∶水=4∶1∶5（體積比）為展開(kāi)劑，上行展開(kāi)5h，取出晾干。噴1%氯化鋁乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可見(jiàn)熒光斑點(diǎn)。

3討論

3.1實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)方法工藝簡(jiǎn)單，回收率為101.4%，提取效率高于傳統(tǒng)方法，利用本文所提供的超聲波提取、純化方法而得到的黃酮類物質(zhì)其純度較高。超聲波可以強(qiáng)化乙醇浸提法，達(dá)到省時(shí)、高效、節(jié)能的目的，此方法采用全物理過(guò)程，無(wú)任何污染，是一條理想的提取黃酮類物質(zhì)的途徑，具有廣闊的應(yīng)用前景。

3.2黃酮類化合物是一大類天然產(chǎn)物，廣泛存在于植物界，是許多中草藥的有效成分，具有很高的藥用價(jià)值。在自然界中最常見(jiàn)的是黃酮和黃酮醇，其它包括雙氫黃（醇）、異黃酮、雙黃酮、黃烷醇、查爾酮、橙酮、花色苷及新黃酮類等［8］。天然來(lái)源的生物黃酮分子量小，能被人體迅速吸收，能通過(guò)血腦屏障，能進(jìn)入脂肪組織，進(jìn)而體現(xiàn)出如下功能：消除疲勞、保護(hù)血管、防動(dòng)脈硬化、擴(kuò)張毛細(xì)血管、疏通微循環(huán)、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大腦及其他臟器細(xì)胞的功能。

黃酮類化合物具有抗癌、抗腫瘤、消心腦血管疾病、抗炎鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)免疫力、降血糖、治療骨質(zhì)疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗輻射等作用［9～14］。近年來(lái)，世界上掀起了植物藥開(kāi)發(fā)的熱潮，植物藥以其天然低毒的特點(diǎn)倍受青睞，而黃酮類化合物以其廣譜的藥理作用引人矚目。本文實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，馬鞭草中含有較為豐富的黃酮。因此，馬鞭草具有廣泛開(kāi)發(fā)和利用價(jià)值，值得綜合利用，加強(qiáng)資源開(kāi)發(fā)。

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