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【關鍵詞】內臟痛覺

Suppressiveeffectofintrathecaladministrationofdiazepamonvisceralpaininducedbyrectalinstillationofformalininrats

【Abstract】AIM:Toexplorewhetherdiazepamhasasuppressiveeffectonvisceralpainatthespinallevel.METHODS:Byintrathecaldrugadministration,theeffectofdiazepamonpersistentvisceralpaininducedbyrectalinstillationofformalinwasstudied.RESULTS:Rectalinstillationofformalininducedobviousvisceralpainresponses,whichoccurredmainlywithin0~75minaftertherectaladministrationofformalin.Intrathecalpretreatmentwiththreedosesofdiazepamsuppressedthevisceralpainresponsesinducedbyformalinandtheanalgesicactionofdiazepamwasmainlywithin0~60minaftertherectaladministrationofformalin.CONCLUSION:Intrathecalpretreatmentwithdiazepamsuppressesthevisceralpaininducedbyrectalinstillationofformalin,whichsuggeststhatdiazepamexertssomesuppressiveeffectonvisceralpainatthespinallevel.

【Keywords】diazepam;visceralpain;formaldehyde;latency

【摘要】目的：研究地西泮在脊髓水平對內臟痛有無抑制作用.方法：采用鞘內給藥的方法觀察地西泮對大鼠直腸注入甲醛致持續性內臟痛的抑制作用.結果：①直腸注入甲醛可引起大鼠劇烈的內臟痛反應，疼痛反應主要集中在甲醛刺激大鼠直腸后的75min內.②鞘內預先注入三個劑量的地西泮均可抑制甲醛刺激大鼠直腸誘發的內臟痛，鎮痛作用主要集中在甲醛刺激直腸后的0~60min.結論：鞘內注射地西泮可抑制大鼠直腸注入甲醛引起的內臟痛覺，提示地西泮在脊髓水平對內臟痛有抑制作用.

【關鍵詞】地西泮；內臟痛覺；甲醛；潛伏期

0引言

地西泮（diazepam,valium,安定）是苯二氮革類的典型代表藥物，也是臨床上最常用的鎮靜、催眠及抗焦慮藥.以往研究表明，鞘內注入地西泮可抑制軀體痛覺的傳入［1］.但其是否可以作用于脊髓從而抑制內臟痛覺的傳入尚無定論.故本實驗利用甲醛內臟痛模型，應用鞘內注射地西泮至腰骶膨大的方法探索地西泮在脊髓水平對內臟痛是否有抑制作用.

1材料和方法

1.1材料

雄性SpragueDawley(SD)大鼠48只，體質量180~220g（第四軍醫大學動物實驗中心提供），實驗前3d將大鼠置于20~24℃，濕度為50%~60%的環境，保持晝夜節律.實驗時，將大鼠隨機分為6組（每組8只）：直腸對照組：直腸注入0.5mL生理鹽水；模型組：直腸注入0.5mL20g/L甲醛；鞘內對照組：鞘內注入10μL生理鹽水，10min后直腸注入0.5mL20g/L甲醛；低劑量實驗組：鞘內注入10μL濃度為0.4g/L的地西泮，10min后直腸注入0.5mL20g/L甲醛；中劑量實驗組：鞘內注入地西泮的濃度為1.6g/L，其余同低劑量實驗組；高劑量實驗組：鞘內注入地西泮濃度為3.0g/L，其余同低劑量實驗組.地西泮（針劑）購于西安利君制藥股份有限公司.實驗過程中，保持溫度（20~24℃）、濕度（50%~60%）和周圍環境安靜，避免不必要刺激的影響.本實驗操作嚴格遵守國際疼痛學會(IASP)制定的《關于使用清醒動物進行疼痛研究的綱要》.

1.2方法

1.2.1鞘內置管術經腹腔注射戊巴比妥鈉（40mg/kg）深度麻醉大鼠后，從C7水平沿背正中線向尾部切開皮膚、皮下組織、肌肉，暴露并去除T4椎板（約1mm×1mm），切開硬脊膜，經鞘內向尾部置入內腔充盈7μL生理鹽水的聚乙烯PE8導管（內徑0.28mm，外徑0.6mm，購自日本Natume公司），根據動物大小確定置入導管從入口到腰骶膨大處的長度（大約3～5cm），經導管注入生理鹽水后見硬膜破口處有腦脊液流出證明導管在蛛網膜腔內.封外口，局部青霉素抗感染.術后單籠飼養3～5d，觀察動物狀態良好，無活動障礙，則可進行實驗［2］.

1.2.2鞘內給藥鞘內置管術未引起大鼠運動障礙和毒性反應.鞘內對照組和三個實驗組的大鼠在實驗玻璃箱適應30min后，乙醚麻醉，用10μL微量注射器（寧波鎮海玻璃儀器廠）將10μL生理鹽水或不同濃度地西泮以0.5μL/s的速度注入預先置好的聚乙烯PE8導管，后用7μL生理鹽水洗脫，確保地西泮注入到脊髓，封外口.動物實驗完畢后，解剖證實導管內口開口于蛛網膜下腔腰骶膨大處.局部脊髓無損傷及陳舊性出血，說明本實驗結果可靠.

1.2.3內臟疼痛的行為學觀察將30cm×30cm×30cm的透明有機玻璃箱置于高于實驗臺45cm的玻璃臺上，實驗前30min將大鼠置于其中使其適應環境，后用乙醚將其麻醉，在肛門周圍裸露皮膚涂抹凡士林（避免甲醛接觸肛周皮膚引起軀體痛覺），將直徑1.5mm的圓頭細管迅速經肛門插入直腸（鞘內對照組和實驗組鞘內生理鹽水或地西泮處理10min后進行此操作），按分組要求分別將0.5mL生理鹽水或0.5mL20g/L甲醛溶液注入大鼠直腸.以5min為間隔，觀察并記錄90min內大鼠的內臟痛相關行為（viseralpainrelatedbehaviors,VPRB）的數目［3］［A：大鼠舔或輕咬腹部、下肢及會陰周圍的皮膚；B：伸展軀體使其拉長；C：腹部收縮側屈身體；D：全身收縮使背部拱起呈弓形，持續時間(t)<30s；E：全身收縮使背部拱起呈弓形，30s60s］，同時記錄大鼠出現第一個上述動作的時間，即潛伏期(latency).根據記錄的內臟痛相關行為，用公式S=1A+2B+3C+4D+5E+6F計算所得數值評估大鼠直腸注入甲醛后不同時間段的疼痛反應(spontaneousnociceptiveresponse).

統計學處理：用SPSS11.0軟件進行統計學處理.數據以x±s表示，用重復測量數據的方差分析對不同組的內臟疼痛反應做統計學分析，用Dunnettt法分析第一個內臟痛相關行為的潛伏期.P＜0.05為差異有顯著性.

2結果

2.1直腸注入甲醛后誘導的疼痛反應以15min為間隔，統計大鼠直腸注入不同溶液后90min內的行為學指標(見表1).大鼠直腸注入甲醛，可引起了大鼠劇烈的內臟痛覺，疼痛反應主要集中在甲醛刺激直腸后的75min內，其中，在甲醛刺激直腸后15~30min，疼痛反應最劇烈.

2.2鞘內給予地西泮抑制大鼠內臟痛覺反應鞘內注射生理鹽水對內臟痛覺影響較小(表1).3個實驗組與模型組比較，內臟疼痛反應均明顯減弱(P<0.001).鞘內應用三個濃度地西泮發現：鞘內注射地西泮的鎮痛作用主要集中在甲醛刺激直腸后的0~60min，鞘內地西泮濃度為3.0g/L時，地西泮的鎮痛作用的持續時間最長，為60min，而低濃度的地西泮（0.4g/L,1.6g/L）的鎮痛作用持續45min.

2.3各組大鼠出現第一個VPRB的潛伏期直腸對照組、模型組、鞘內對照組、低劑量實驗組、中劑量實驗組、高劑量實驗組第一個VPRB的潛伏期分別為(79.2±11.8)s;(22.5±1.4)s;(24.1±1.7)s;(47.3±5.3)s;(42.3±3.5)s;(69.2±7.2)s.模型組第一個VPRB的潛伏期較直腸對照組明顯縮短（P<0.05），但模型組和鞘內對照組第一個VPRB的潛伏期無顯著差異(圖1).實驗組與模型組比較，實驗組第一個VPRB的潛伏期較模型組明顯增加(P＜0.05).表1各組大鼠直腸注入生理鹽水或甲醛后內臟疼痛反應(略)

3討論

內臟痛（visceralpain）是一種臨床上常見的疼痛現象.目前研究內臟痛的模型較多，但在實驗過程中易混雜軀體痛覺的影響.在本研究中，我們直接將0.5mL濃度為20g/L的甲醛溶液通過圓頭塑料管注入大鼠直腸，觀察并計數內臟痛相關行為發現，直接將甲醛注入直腸后大鼠的內臟痛行為反應較直腸對照組強烈，并且大鼠出現第一個VPRB的潛伏期較直腸對照組也明顯縮短，表明直接將甲醛注入大鼠直腸可誘發大鼠的內臟痛覺，并且甲醛誘發的內臟痛覺呈單相，主要集中在甲醛刺激直腸后的75min內，這不同于將甲醛注入直腸壁致內臟痛所呈現的雙相時程［3］.另外，本研究在直腸注入甲醛之前，將凡士林涂抹在大鼠的肛門周圍，避免了軀體痛覺的影響，因此，本研究中甲醛刺激大鼠直腸引起的內臟痛有特異性.

另外，將三種不同劑量的地西泮注入大鼠的蛛網膜下腔，發現鞘內注入地西泮對大鼠的內臟痛覺有抑制作用，主要表現在兩個方面：①直腸注入甲醛后的75min內，實驗組大鼠的內臟痛反應較模型組明顯減弱；②鞘內注入地西泮后，大鼠出現第一個VPRB的潛伏期較模型組明顯延長.另外，地西泮對內臟痛抑制作用的持續時間與地西泮劑量成依賴關系，即鞘內注入的地西泮劑量越大，其對內臟痛的抑制時間越長.

鞘內地西泮對內臟痛的抑制作用可能與中樞神經系統中的GABA有關.以往的很多證據表明，GABA及其受體在疼痛的調節過程中發揮重要的作用［4］.另外，骶髓后連合核（sacraldorsalcommissualnucleus,SDCN）是位于腰骶膨大處的重要核團［5］，是盆腔內臟傷害性信息感覺傳遞的中繼站［6］，其內分布大量的GABA免疫陽性的神經元、終末以及GABAA受體［5,7-8］.地西泮作為GABAA受體的配體之一，可作用于GABAA受體，促進GABA與GABAA受體的結合，通過增強Cl-通道開放的頻率增強GABA對GABAA受體的作用而顯示中樞抑制作用.在本實驗中，鞘內注射地西泮至腰骶膨大，地西泮可能作用于SDCN上的GABAA受體，促進GABA與GABAA受體的結合能力，增強了GABAA受體上Cl-通道開放的頻率，進一步抑制了內臟痛覺傳入神經元間的突觸活動，使內臟痛覺傳入過程受阻，因此，鞘內地西泮預處理10min后將甲醛注入直腸，大鼠的內臟疼痛反應以及出現第一個VPRB的潛伏期較模型組分別減少和延長.但至于地西泮是否真正可以增強GABA與SDCN上GABAA受體的結合，并無確切報道，有待于進一步探究.

【參考文獻】

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