導(dǎo)語(yǔ)：大鼠神經(jīng)功能研究管理論文一文來(lái)源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

【摘要】目的研究川芎(CHX)生物堿對(duì)局灶性腦缺血再灌注（I/R）大鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及動(dòng)物蘇醒后神經(jīng)功能、腦梗死容積的影響。方法腹腔注射（ip）CHX生物堿50、100、200mg/kg和生理鹽水1w后將其制成局灶性腦大鼠損傷模型，并檢測(cè)血清中的SOD活性、MDA含量，神經(jīng)功能損傷評(píng)分以及腦梗死容積的變化，同時(shí)與假手術(shù)組比較。結(jié)果I/R組與假手術(shù)組相比，血清中的SOD活性降低，MDA含量增加（P＜0.01）。CHX50mg/kg組、CHX100mg/kg組、CHX200mg/kg組與I/R組相比，血清中的SOD活性均升高（P＜0.01），MDA含量均降低（P＜0.05），腦梗死容積明顯縮小（P＜0.01）；神經(jīng)功能評(píng)分差異顯著（P＜0.05）。結(jié)論CHX生物堿對(duì)腦I/R引發(fā)的自由基損傷有保護(hù)作用，從而減輕腦I/R后腦組織的損害。

【關(guān)鍵詞】川芎生物堿；缺血再灌注；超氧化物歧化酶；丙二醛；自由基

近年來(lái)，人們傾向于采用超早期溶栓治療腦梗死，迅速恢復(fù)局部血供，以達(dá)到理想的治療效果，但缺血再灌注（I/R）損傷可引起一系列復(fù)雜的繼發(fā)改變，導(dǎo)致缺血組織損傷惡化〔1〕。如何防止腦I/R，尋找有效的防治藥物，促進(jìn)腦卒中后中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能恢復(fù)，一直是相關(guān)學(xué)科研究的重點(diǎn)之一。某些中藥如叁附、大黃、川芎等經(jīng)臨床驗(yàn)證可通過(guò)多種環(huán)節(jié)防止缺血性損傷〔2〕,但目前國(guó)內(nèi)有對(duì)照的臨床研究病例數(shù)較少,本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察川芎（CHX）中的生物堿對(duì)大鼠腦I/R損傷后血清中的超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量及動(dòng)物蘇醒后神經(jīng)功能評(píng)分、腦梗死容積大小的影響探討CHX生物堿對(duì)腦I/R損傷的保護(hù)作用，為CHX防治中樞神經(jīng)系統(tǒng)缺血性損傷提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1動(dòng)物分組及給藥方法選擇健康Wistar大鼠50只,體重280～350g，由吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。編號(hào)：SCXK(吉)20030004，隨機(jī)分成5組，每組10只。CHX生物堿由北華大學(xué)藥學(xué)院中藥研究室制備,用時(shí)調(diào)配至所需濃度。①I/R組（生理鹽水組10ml/kg），腹腔注射（ip）生理鹽水10ml/kg7d，每天1次。②I/R＋CHX50mg/kg組，ipCHX生物堿50mg/kg連續(xù)7d，每天1次。③I/R＋CHX100mg/kg組，ipCHX生物堿100mg/kg連續(xù)7d，每天1次。④I/R＋CHX200mg/kg，ipCHX生物堿200mg/kg連續(xù)7d，每天1次。⑤假手術(shù)組，進(jìn)行手術(shù)而未制造大鼠局灶性腦I/R病理模型。⑥陽(yáng)性對(duì)照組，用葛根素（GGS）5mg/kg，連續(xù)7d，每天1次。除假手術(shù)組外，其余各組用藥7d。后制造大鼠局灶性腦I/R病理模型。

1.2I/R造摸方法大鼠用25％烏拉坦ip（0.3ml/100g）加乙醚吸入麻醉。背位固定，頸右側(cè)切口，暴露右頸總動(dòng)脈（CCA）。向外牽引二腹肌和胸鎖乳突肌，由CCA分叉處向頭端依次游離。電凝頸外動(dòng)脈（ECA）的所有分支。在甲狀腺上動(dòng)脈遠(yuǎn)端結(jié)扎，切斷ECA，使其主干游離備用，然后分離頸內(nèi)動(dòng)脈（ICA）至顱底，結(jié)扎其分支翼腭動(dòng)脈，僅保留ICA入頸主干。用1號(hào)絲線在ECA根部打一松扣，用動(dòng)脈夾暫時(shí)關(guān)閉CCA和ICA，將預(yù)先制備好的尼龍線經(jīng)ECA主干的切口插入至CCA分叉處,將ECA根部的絲線縛緊,以防止其中的尼龍線滑出或出血，然后移去ICA的動(dòng)脈夾，將動(dòng)脈夾緩慢向ICA入頸的方向推進(jìn)，以分叉處為標(biāo)記，推進(jìn)約17mm時(shí)可感到阻力，表明尼龍線的頭端已通過(guò)大腦中動(dòng)脈（MCA）的起始處,到達(dá)較細(xì)的大腦前動(dòng)脈內(nèi)，移去CCA上的動(dòng)脈夾，此時(shí)即完成右側(cè)MCA的阻塞，縫合切口，將尼龍絲的尾端留在皮外，再灌注時(shí)將尼龍線輕輕抽感到阻力時(shí)，表明尼龍線的頭端已回到ECA的主干中，從而實(shí)現(xiàn)MCA的再灌注。術(shù)中及術(shù)后注意保持體溫，室溫保持在20℃～24℃。

1.3檢測(cè)指標(biāo)及方法采用黃嘌呤氧化酶法檢測(cè)血清中SOD活性（單位：U/ml）；硫代巴比妥酸顯色法檢測(cè)血清中MDA含量（單位：nmol/L）;TTC染色法及圖像處理軟件（AdobePhotoshop6.0）計(jì)算腦梗死面積，各腦片梗死面積之和乘以厚度（2mm）為總腦梗死容積。動(dòng)物蘇醒后放回鼠籠，自由飲食。腦缺血2h再灌注2h后，由一名不了解情況的觀察者評(píng)估記錄神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分,方法參考Zealonga等的報(bào)道〔3〕，即7級(jí)評(píng)分方法：0級(jí)，無(wú)異常；0.5級(jí)，豎毛，輕度運(yùn)動(dòng)低下；1級(jí)，前肢屈曲，運(yùn)動(dòng)障礙；2.0級(jí)，行動(dòng)不協(xié)調(diào)，屈取姿勢(shì)，旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)；3.0級(jí)，偏癱，不能站立和行走；4.0級(jí)，痙攣，昏睡；5.0級(jí)，死亡。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，組間進(jìn)行方差分析，兩兩比較用SNKq檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1CHX生物堿對(duì)大鼠血清中SOD活性和MDA含量的影響見表1。I/R組與假手術(shù)組相比，血清中SOD活性降低，MDA含量增加（P＜0.01）。CHX50mg/kg組、100mg/kg組及200mg/kg組與I/R組相比，血清中的SOD活性均升高（P＜0.01），MDA含量均降低（P＜0.05）。

2.2CHX生物堿對(duì)I/R組大鼠腦梗死容積的影響見表2。各用藥組梗死容積與I/R組相比有明顯下降（P＜0.01）；各用藥組間梗死容積差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表1CHX生物堿對(duì)大鼠血清中SOD活性和MDA含量的影響與I/R組比較：1）P＜0.01，2）P＜0.05。下表同表2CHX生物堿對(duì)I/R組大鼠腦梗死容積的影響

2.3CHX生物堿對(duì)I/R大鼠神經(jīng)功能的影響見表3。各用藥組大鼠I/R后神經(jīng)功能評(píng)分與I/R組比較差異顯著（P＜0.05）。表3CHX生物堿對(duì)I/R大鼠神經(jīng)功能的影響

3討論

自由基是最外層軌道上有單個(gè)未配對(duì)電子的原子、原子團(tuán)和分子的總稱。常見的自由基有超氧陰離子（·O-2）、羥自由基（·OH）、還原性一氧化氮（NO·）等〔4〕。在正常情況下，人體內(nèi)約1％～2％的氧通過(guò)多種途徑產(chǎn)生自由基，但由于細(xì)胞內(nèi)存在SOD、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSHPx）、過(guò)氧化氫酶（CAT）等可迅速清除自由基，使其生成和清除處于平衡狀態(tài)，但在缺血，特別是再灌注后（因其帶有大量的氧）等條件下，產(chǎn)生大量的自由基，而SOD等酶的清除能力有限，使生成與清除平衡失控，積累大量的自由基，自由基主要通過(guò)許多氧化反應(yīng)造成組織細(xì)胞的損傷，主要的損傷為細(xì)胞膜磷脂分子中的不飽和脂肪酸的過(guò)氧化產(chǎn)生脂質(zhì)過(guò)氧化物，再經(jīng)過(guò)氧化酶催化生成MDA，最終使磷脂結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，膜受到嚴(yán)重?fù)p傷，引起遲發(fā)性功能損害。MDA是其反應(yīng)的主要產(chǎn)物，由于腦組織中富含脂質(zhì)，因此腦組織對(duì)自由基特別敏感〔5〕。血中MDA含量的變化間接反映了腦組織中氧自由基含量的變化，反映腦組織中脂質(zhì)過(guò)氧化程度及腦細(xì)胞損傷程度。SOD是機(jī)體清除自由基的主要酶，SOD活性高低間接反映腦組織清除自由基的能力〔6〕。

本實(shí)驗(yàn)顯示，與假手術(shù)組相比，I/R后血清中的MDA含量顯著升高（P＜0.01），而SOD活力明顯下降（P＜0.01），說(shuō)明自由基引起的脂質(zhì)過(guò)氧化損傷在腦I/R損傷中非常顯著。與I/R組相比，CHX50mg/kg組、CHX100mg/kg組、CHX200mg/kg組血漿中MDA含量顯著降低（P＜0.05），SOD活力明顯升高（P＜0.01），說(shuō)明CHX生物堿對(duì)腦I/R引發(fā)的自由基損傷有保護(hù)作用，從而減輕腦I/R后腦組織的損害。

本研究還發(fā)現(xiàn)，CHX50mg/kg組、CHX100mg/kg組、CHX200mg/kg組與I/R組相比，腦梗死容積明顯降低（P＜0.01）。大鼠腦缺血2h再灌注2h后，均表現(xiàn)一定的神經(jīng)功能障礙，神經(jīng)功能評(píng)分顯示，CHX50mg/kg組、CHX100mg/kg組、CHX200mg/kg組和GGS5mg/kg組與I/R組相比差異顯著（P＜0.05），均進(jìn)一步證實(shí)了CHX生物堿對(duì)腦I/R損傷具有保護(hù)作用。

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